Name: Szybkie Technika Wizualizacja żywo unieruchomionych komórek drożdży (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 54 s
Description: Poznaj szybką technikę wizualizacji unieruchomionych komórek drożdży z fluorescencyjnymi reporterami. Ta metoda umożliwia obserwację zmian stanów epigenetycznych podczas podziałów komórkowych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Chcielibyśmy podziękować Pete Houston i Eugenia Xu za pomoc.

<ol><li> Unieruchomionych komórek oczywiście mikroskopii czas epifluorescencją. Należy pamiętać, że protokół ten jest przydatna tylko gdy obiektywy swojego mikroskopu są pod sceną mikroskopem. </li><li> Komórek miejsce pożądanego stężenia w płynie mediów na długo szkiełko (ok. 24x50mm) </li><li> Cut bloku agar o pożądanej wielkości z syntetycznych płyta media (te mają niższe autofluorescencję) i umieścić w komórkach. Miejsce z boku bloku agar nie obsługiwane przez pincety w kontakcie z komórkami. </li><li> W przypadku krótszych okresów czasu (do 3 godzin), takie ustawienie jest wystarczające. Jeżeli komórki są w ruchu, gdy wyświetlone na mikroskopem, zmniejszenie objętości komórek lub obszaru wzrost bloku agar. </li><li> W przypadku dłuższych okresów czasu, miejsce spadek świeżych ciekłych na szczycie bloku agar, i umieścić szkiełka w górnej części bloku agar. Ten slajd zmniejsza parowanie przez szczyt bloku agar. W razie potrzeby, krawędzie bloku agar w kontakcie z poślizgu okładka może być zamknięte z wazeliną w celu dalszego zmniejszenia wilgoci. Używałem tego zestawu do filmów do 9 godzin, z dzielących się komórek w dzikie stawki typu. </li></ol>

<ol>
	<li>Xu, E. Y., Zawadzki, K. A., Broach, J. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+observations+reveal+intermediate+transcriptional+silencing+states.">Single-cell observations reveal intermediate transcriptional silencing states.</a> Mol. Cell. 23, 219-229 (2006).</li></ol>

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Jest to szybka technika, która unieruchamia komórek drożdży, umożliwiając jednocześnie wzrostu. Śledzimy rozwój drożdży do dziesięciu godzin, z drożdży wyświetlania dzikich stóp podział typu w trakcie eksperymentu. Zauważ, że ta instalacja wymaga obiektywu być pod sceną mikroskopem.

szybkie technika wizualizacja żywo unieruchomionych komórek drożdży

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

Prezentujemy proste, szybkie i bardzo elastyczne technikę do immobilizacji i wizualizacji rosnących komórek drożdży epifluorescencją mikroskopii. Technika jest odpowiedni zarówno do wizualizacji statycznych populacji drożdży i eksperymentów kursy czas do dziesięciu godzin w długości. My mikroskopii bada Dziedziczenie epigenetyczne w cichej loci krycia w S. cerevisiae. Istnieją dwa ciche loci krycia, HML i HMR, które nie są normalnie wyrażane są one pakowane w heterochromatyny. W sir1 wyciszanie mutant tle jest osłabiony tak, że każdy locus może być w wyraźnych lub wyciszony stan epigenetyczne, więc w całej populacji jest połączenie komórki z różnych państw epigenetyczne dla HML i HMR. My mikroskopia wykazała, że ​​nie ma żadnego związku między epigenetyczne stan HML i HMR w poszczególnych komórek. sir1 komórek stochastycznie przełącznik epigenetyczne państwa, ustanawiający wyciszania na wcześniej wyrażone locus lub wyrażając wcześniej wyciszony locus. My mikroskopii oczywiście czas śledzone poszczególnych sir1 komórek i ich potomstwa na zdobycie częstotliwości każdego z czterech możliwych przełączników epigenetyczne, a tym samym stabilność każdego z państw epigenetyczne w sir1 komórek. Zobacz także Xu et al. Mol. Piosenki 2006 roku.

Szybkie techniki wizualizacji coraz unieruchomionych komórek drożdży, tutaj stosowane do świetlówek dziennikarzom w cichej krycia loci HML i HMR

Szybkie Technika Wizualizacja żywo unieruchomionych komórek drożdży

Przedstawiamy tutaj prostą, szybką i niezwykle elastyczną technikę immobilizacji i wizualizacji rosnących komórek drożdży za pomocą epifluorescencji...

Celem eksperymentu jest możliwość śledzenia populacji komórek linii sir one pod mikroskopem, aby zaobserwować, w jaki sposób zmieniają się stany epigenetyczne oraz jak często następują te zmiany przy każdym kolejnym podziale komórek. Należy wziąć długą szkiełko nakrywkę, nanieść na nią około 7 µL komórek, a następnie wykorzystać płytkę z syntetyczną pożywką. Za pomocą żyletki należy wykonać nacięcia w agarze. Następnie należy wyciąć blok agaru, podnieść go i umieścić nad komórkami.Dobrze, w przypadku eksperymentów krótkoterminowych, trwających do trzech godzin, takie rozwiązanie jest wystarczające. Do eksperymentów długoterminowych komórki zostaną unieruchomione; w tym celu dodaję do powierzchni podkładu agarowego ciekłe medium Li, a następnie nakładam na całość szkiełko przedmiotowe.Pożywka będzie pełnić funkcję uszczelnienia pomiędzy nimi. Szkiełko służy wyłącznie temu, aby zapobiec odparowywaniu wody z górnej powierzchni bloku agaru. Dzięki takiemu ustawieniu blok agaru pozostanie wilgotny, a komórki będą się dzielić przez co najmniej osiem godzin.

a-rapid-technique-for-visualization-live-immobilized-yeast

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Delecja genów oraz nadekspresja białek to powszechnie stosowane metody badania funkcji białek. W niniejszym artykule opisujemy protokół analizy rozwoju fenotypu w zależności od stężenia białka na poziomie populacyjnym i pojedynczych komórek u Saccharomyces cerevisiae.

Analiza rozwoju fenotypu morfologicznego w funkcji stężenia białka u drożdży pączkujących

Metoda zatapiania kolonii drożdży umożliwiająca wykonywanie przekrojów do mikroskopii świetlnej i elektronowej. Protokół ten pozwala na określenie rozmieszczenia komórek zsporulowanych i komórek pseudohifowych w obrębie kolonii, stanowiąc nowe narzędzie do zrozumienia organizacji typów komórek w obrębie społeczności grzybowej.

Metoda zatapiania kolonii drożdży

Opisano niezawodną metodę monitorowania transportu organelli do kwaśnego światła wakuoli drożdżowej w celu ich degradacji i recyklingu. Metoda ta opiera się na specyficznym znakowaniu docelowych organelli za pomocą genetycznie kodowanego dwuemisyjnego fluorescencyjnego biosensora pH oraz wizualizacji pojedynczych komórek przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej.

Analiza z wykorzystaniem mikroskopii fluorescencyjnej do monitorowania mitofagii w drożdżach Saccharomyces cerevisiae

Drożdże szczapowe, Schizosaccharomyces pombe, stanowią dobry system modelowy do badania podstawowych procesów komórkowych. W niniejszej pracy opisujemy metodę ilościowej analizy żywych komórek drożdży szczapowych. W tym konkretnym doświadczeniu skupiamy się na organizacji genomu w obrębie jądra komórkowego, jednak metoda ta może być również wykorzystana do badania czynników cytozolowych.

Ilościowa analiza fluorescencyjna żywych komórek drożdży szczepowych przy użyciu mikroskopii

Prezentujemy prosty protokół do uzyskiwania filmów z mikroskopii fluorescencyjnej rosnących komórek drożdży, oraz pakiet oprogramowania oparty na graficznym interfejsie użytkownika do ekstrakcji danych szeregów czasowych pojedynczych komórek. Analiza obejmuje automatyczne przypisywanie czasu pochodzenia i podziału zintegrowane z inspekcją wizualną i ręczną selekcją śledzonych danych.

Pozyskiwanie fluorescencyjnych filmów poklatkowych pączkujących drożdży i analiza dynamiki pojedynczych komórek za pomocą GRAFTS

Przedstawiono metodę rozprzestrzeniania się chromosomów powierzchniowych z pączkujących drożdży. Metoda ta wywodzi się z metody opisanej wcześniej przez Loidla i Kleina. Ponadto demonstrujemy procedurę barwienia immunologicznego chromosomów rozsianych.

Rozprzestrzenianie się powierzchniowe i barwienie immunologiczne chromosomów drożdży

Zapewniamy powtarzalną podstawową metodę długoterminowej mikroskopii cyklu życia płciowego drożdży rozszczepialnych. Z niewielkimi korektami, przedstawiony protokół pozwala na skupienie badań na różnych etapach procesu rozrodczego.

Mikroskopia płciowego cyklu życiowego drożdży rozszczepialnych

Ten protokół opisuje analizę fluorescencyjnie znakowanych przedziałów wewnątrzkomórkowych w pączkujących drożdżach za pomocą wielokolorowej mikroskopii konfokalnej 4D (time-lapse 3D). Parametry obrazowania dobierane są tak, aby wychwycić odpowiednie sygnały przy jednoczesnym ograniczeniu fotouszkodzeń. Niestandardowe wtyczki ImageJ umożliwiają śledzenie oznaczonych struktur i analizę ilościową.

Mikroskopia 4D drożdży

Tutaj prezentujemy obrazowanie żywych komórek, które jest nietoksyczną metodą mikroskopii, która pozwala badaczom badać zachowanie białek i dynamikę jądrową w żywych komórkach drożdży rozszczepialnych podczas mitozy i mejozy.

Badanie dynamiki jądrowej drożdży rozszczepienia mitotycznego i mejotycznego za pomocą fluorescencyjnej mikroskopii żywych komórek

Niezbędne barwniki fluorescencyjne są niezbędnymi narzędziami do analiz obrazowania żywych komórek w nowoczesnej biologii komórek grzybów. W artykule szczegółowo opisano zastosowanie znanych i mniej znanych barwników fluorescencyjnych do śledzenia dynamiki błony plazmatycznej, endo-/egzocytozy i morfogenezy ściany komórkowej u grzybów strzępkowych.

Zastosowanie selektywnych barwników fluorescencyjnych błonowych i ścian komórkowych do obrazowania żywych komórek grzybów strzępkowych

Poznaj szybką technikę wizualizacji unieruchomionych komórek drożdży z fluorescencyjnymi reporterami. Ta metoda umożliwia obserwację zmian stanów epigenetycznych podczas podziałów komórkowych.

Szybkie Technika Wizualizacja żywo unieruchomionych komórek drożdży

Przeglądaj więcej filmów