Summary
חוש הריח נוירונים חושיים מבטאים מגוון רחב של מולקולות מיון האקסון להקים מעגלים עצביים נאותים. פרוטוקול זה מתאר שיטת מכתים immunohistochemical לדמיין ביטויים קומבינטוריים של מולקולות מיון האקסון ב טרמיני האקסון של נוירונים חושית חוש הריח.
Abstract
מערכת חוש הריח של העכבר משמש לעתים קרובות כדי ללמוד מנגנונים של המעגל העצבי היווצרות בגלל המבנה האנטומי הפשוט שלה. חוש הריח נוירון (OSN) הוא תא דו קוטבי עם דנדריט יחיד ואקסון unbranched יחיד. OSN מבטא רק גן אחד קולטן הריח (OR), OSNs להביע סוג נתון של או להתכנס אקסונים שלהם כמה קבוצות של glomeruli קבועים של הנורה חוש הריח (OB). תכונה יוצאת דופן של הקרנת OSN היא כי הביע אורס לשחק תפקידים מאלפת הקרנה axonal. ORs לווסת את הביטוי של מולקולות מיון האקסון מרובים וליצור קוד מולקולרית קומבינטורית של מולקולות מיון האקסון ב Termini האקסון OSN. לכן, כדי להבין את המנגנונים המולקולריים של מנגנוני הדרכה האקסון ספציפי, חשוב לאפיין את פרופילי הביטוי שלהם ב טרמיני האקסון OSN בתוך glomerulus אותו. מטרת מאמר זה היה להציג שיטות לאיסוף כמו glomeruli רבים כמו possiblדואר על סעיף OB בודד ועל ביצוע immunostaining באמצעות נוגדנים מרובים. זה יאפשר השוואה וניתוח של דפוסי הביטוי של אקסון מיון מולקולות ללא מכתים וריאציה בין סעיפים OB.
Introduction
במהלך ההתפתחות, נוירונים מחוברים זה לזה בדיוק כדי ליצור מעגלים עצביים נאותים, קריטיים לתפקוד המוח הרגיל. מאחר שמעגלים עצביים חריגים במוח נחשבים כגורמים להפרעות נפשיות כגון אוטיזם וסכיזופרניה, ההבנה של מנגנוני המעגל העצבי היא אחד האתגרים המרכזיים בתחום מדעי המוח.
במערכת חוש הריח של העכבר, כל נוירון חושני חוש הריח (OSN) באפיתל חוש הריח (OE) מבטא רק גן אחד של קולטן חוש הריחתי (OS) או OSNs המבטאים אותו או מתמזגים עם האקסונים שלהם לצמד מסוים של גלומרולי במיקומים סטריאוטיפיים חוש הריח Bulb (OB) 1 , 2 . מערכת הריח העכבר היא מערכת מודל מעולה לחקר המנגנונים המולקולריים של היווצרות מעגל עצבי כי החוקרים יכולים לנצל את הביטוי OR לזהות ספציפייםUbtype של OSNs לדמיין את אתרי ההקרנה של האקסונים OSN כמו מבנים glomerular ברור. תכונה יוצאת דופן של הקרנת OSN היא כי אורס לשחק תפקידים מאלפת הקרנת אקסונים OSN ל OB 3 , 4 , 5 , 6 . באופן ספציפי יותר, לאחר שהאקסונים של OSN מודרכים לאזורי יעד משוערים, הם מופרדים ליצירת גלומרולוס באופן תלוי-תלות. מחקרים קודמים הראו כי מולקולות או לשלוט על הביטוי של המולקולות מיון האקסון, אשר להסדיר הפרדה glomerular 7 , 8 . יתר על כן, ראיות מצטברות עולה כי מולקולות או לייצר את קוד הזהות העצבית על ידי שילוב ייחודי של מולקולות מיון האקסון 9 . לכן, כדי להבין את המנגנון של הפרדת גלומרולרי תלותית, יש צורך לאפיין את הביטוי פרופילים של מיון האקסון molEcules ב OSNs.
פלואורסצנטי immunostaining היא שיטה נפוצה לדמיין את הביטוי של גנים ספציפיים. מאז חלבונים של מולקולות מיון האקסון ממוקמים בעיקר על האקסונים OSN, החוקרים צריכים להשתמש סעיפים OB לאפיין את דפוסי הביטוי שלהם OSNs. חתך העטרה של OB שימש באופן שגרתי עבור immunostaining. עם זאת, הכנה זו מאבדת את המידע הטופוגרפי לאורך הציר הקדמי-אחורי באותו קטע OB. לכן פיתחנו הכנה parasagittal של הצד המדיאלי של OB, אשר יכול לעלות כמו glomeruli רבים סביב סביב באותו סעיף OB. בשילוב עם immunostaining באמצעות נוגדנים מרובים, הכנה זו מאפשרת השוואה וניתוח של דפוסי הביטוי של אקסון מיון מולקולות ללא מכתים וריאציה בין סעיפים OB.
יתר על כן, שיטת מכתים immunohistochemical הוצגה ללא קיבוע לאחר עם PFA אטיפול סוכרוז nd. שיטה זו מאפשרת לחוקרים להשיג מספיק נתונים באיכות גבוהה מכתים לניתוח נתונים רב משתנים. הפרוטוקולים המוצגים כאן יספק פרטים על שיטות רבות עוצמה לחוקרים אשר לומדים את היווצרות מעגלים עצביים חוש הריח.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל ההליכים הניסיוניים בוצעו באישור ועדת האתיקה של ניסויים בבעלי חיים באוניברסיטת טוקיו ובהתאם להנחיות של אוניברסיטת טוקיו לטיפול וטיפול בבעלי מעבדה.
1. הכנת פתרונות
- הכן 0.01 M פוספט שנאגרו מלוחים (PBS): להוסיף טבלית PBS (0.14 M NaCl, 0.0027 M KCl, 0.010 M PO 4 3- , pH 7.4) ל 1 L מים מזוקקים ומערבבים ב RT עד שהוא מומס לחלוטין.
- הכן paraformaldehyde 4% (PFA) ב PBS: להוסיף 4 גרם של PFA ל 100 מ"ל PBS. מערבבים את הפתרון ב 60 ° C עד שהוא מומס לחלוטין.
- לאחר המסת PFA ב PBS, להתאים את ה- pH של הפתרון 7.4 עם 1 N נתרן hydroxide (NaOH). לאחר מכן, מגניב על קרח לסנן את הפתרון באמצעות נייר סינון כדי להסיר כל חומר חלקיקי. חנות ב 4 ° C.
זהירות: קח את הטיפול המתאים בעת שימוש אלה ריאגנטים. ידיתעם כפפות טיפול ושימוש, משקפי מגן, מעיל מעבדה תחת מכסה המנוע כימי.
הערה: השתמש טרי 4% PFA פתרון מוכן בתוך 2 ד.
- לאחר המסת PFA ב PBS, להתאים את ה- pH של הפתרון 7.4 עם 1 N נתרן hydroxide (NaOH). לאחר מכן, מגניב על קרח לסנן את הפתרון באמצעות נייר סינון כדי להסיר כל חומר חלקיקי. חנות ב 4 ° C.
- הכן 0.01 M PBS השלימו עם 0.3% Triton X-100 (PBST): להוסיף 3 מ"ל של טריטון X- 100 ל 997 מ"ל של PBS. מערבבים את הפתרון ב RT עד שהוא מומס לחלוטין.
- הכן 1% ו 5% חסימת פתרון: להוסיף 10 גרם של חלב רזה ל 200 מ"ל PBST להכין 5% פתרון חסימה. מערבבים ב RT עד שהוא מומס לחלוטין. לדלל 5% חסימת פתרון חמש פעמים עם PBST להכין פתרון חוסם 1%.
2. הכנה של פרזגיטל OB סעיפים
- השתמש בעלי חיים בין 1-2 שבועות של גיל. קבוצות גיל אלו מתאימות לניסויים הבאים משום שגלומרולי גלויים היטב וניתן לחתוך את המוח עם הגולגולת.
- להרדים את החיה עם הזרקת intraperitoneal של pentobarbital (50 מ"ג / ק"ג משקל גוף). Perfuse החיה transcardially עם קר כקרח 4% PFA ב PBS. טיפול עם כפפות טיפול ושימוש, משקפי מגן, מעיל מעבדה תחת ברדס כימי.
- לאחר זלוף, לחתוך את הראש עם מספריים להסיר את העור בזהירות. לאחר מכן, הכנס להב של המספריים לתוך החלל בין השיניים העליונות והתחתונות לחתוך אופקית כדי להסיר את עצם הלסת התחתונה. חתוך משם רקמת עודף עם מלקחיים ומספריים לעזוב את הרקמה חוש הריח כולל OB ו OE.
הערה: אין להסיר את הגולגולת המקיפה את OB כמו זה שומר על glomeruli המדיאלי מיושר ישר אנכית. - לטבול את רקמת הריח PBS כדי להסיר את האוויר בחלל האף. חותכים את החלק האחורי של המוח אנכית ומניחים את הרקמות חוש הריח על החלק התחתון של עובש הטבעת עם הפנים חיתוך למטה. ממלאים את התבנית עם אופטימלית חיתוך טמפרטורה (OCT) המתחם ולאחר מכן לטבול את עובש לתוך חנקן נוזלי.
- לאחר הרקמה במתחם הוא קפוא לחלוטין, דגירה אותו cryosטאט ב -20 מעלות צלזיוס למשך 1 שעות.
- הפוך סעיפים parasagittal טורי (10 מיקרומטר) של OB עם cryostat ולאסוף אותם על ידי דבק שקופיות זכוכית מצופים MAS. לאחר הדבקה, יבש את השקופיות מיד עם מייבש מכה.
3. יום 1: Immunostaining Quadruple של פרוסות OB
- לשטוף את השקופיות במשך 5 דקות עם PBS ב RT. חזור 3 פעמים.
- לחסום את אתרי מחייב ספציפי על ידי דוגרים את השקופיות עבור 1 שעות עם פתרון 5% חסימה ב RT.
- דגירה שקופיות O / N עם קוקטייל של נוגדנים ראשוניים (400 μL כל שקופית) ב 1% פתרון חסימה ב RT. השתמש בנוגדנים העיקריים הבאים: נוגדנים נגד חנקן אנטי-קירל 2 (1: 1000), נוגדן (7: 500), נוגדן עכברוש אנטי-OL-protocadherin (1: 500) ו עכבר anti-vesicular גלוטמט transporter2 (VGLUT2) נוגדן (1: 500).
4. יום 2: Immunostaining Quadrple של OBפרוסות
- מחק את הפתרון נוגדן ראשוני לשטוף את השקופיות במשך 5 דקות עם PBST ב RT. חזור 3 פעמים.
- לדגור את השקופיות עבור 1 שעות עם קוקטייל של נוגדנים משני (400 μL כל שקופית) PBS ב RT. השתמש נוגדנים משני הבאים: חמור אנטי עכבר אלקסה פלואור 405 (1: 400), חמור אנטי עז אלקסה פלואור 488 (1: 400), חמור נגד גינאה חזיר Alexa פלואור 555 (1: 400), חולדה אלקסה פלואורוס 647 (1: 400).
הערה: כל נוגדנים משני צריך לבוא מאותו המין המארח. בחר אורך גל שונה של הקרינה של נוגדנים משני עבור כל נוגדן ראשוני כדי להבטיח שום חפיפה של אורכי גל. - מחק את הפתרון לשטוף את השקופיות במשך 5 דקות עם PBS ב RT. חזור 3 פעמים.
- Mount coverslips על השקופיות עם המדיום הרכבה. לשם כך, להחיל 2 טיפות של המדיום הרכבה על כל שקופית, ולאחר מכן, לשים coverslip ידי הסרת בועות אוויר.
5. עוצמת אותיasurements
- השג תמונות פלורסנט עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי. השתמש קוביות סינון הבאות: קוביית מסנן DAPI (360/40 ננומטר נרגש, 460/50 ננומטר פליטה, 400 ננומטר המראה dichroic) עבור אלקסה פלואור 405 אותות, קוביית GFP סינון (470/40 ננומטר עירור, 525/50 ננומטר פליטה, ו 495 ננומטר המראה dichroic) עבור אלקסה פלואור 488, קוביית המסנן TRITC (545/25 ננומטר עירור, 605/70 ננומטר פליטה, 565 ננומטר המראה dichroic) עבור אלקסה פלואור 555, ו C5 מסנן קובייה (620/60 ננומטר עירור, 700 / 75 ננומטר פליטה, ו 600 ננומטר המראה dichroic) עבור אלקסה פלואורם 647.
הערה: התאם את זמן החשיפה לקבלת אותות ניאון של התמונה ללא רוויה. - הגדרת המבנה glomerular ידי אותות immunofluorescence של VGLUT2. למדוד את עוצמות מכתים של מולקולות מיון האקסון בתוך glomeruli עם ImageJ.
6. ניתוח נתונים
- הפחתת האותות רקע מן עוצמות מכתים של מולקולות מיון האקסון.
- הכן את הE נתונים מטריקס נתונים, אשר יש עמודות המורכבות של אקסון מיון מולקולות ושורות המורכבת glomeruli.
- ביצוע ניתוח רכיב ראשי (PCA) באמצעות מערך ביטוי מוכן. לאחר מכן, לקבל את ציוני PCA, יחסי תרומה, וגורם גורם של כל רכיב העיקרי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
מפת גלומרולארית חוש הריח נוצרת על ידי מיקוד גלובלי ראשוני הפרדה glomerular הבאים של אקסונים OSN 1 , 2 . הפרדה גלומרולרית מוסדרת על ידי אינטראקציות אקסונאל דבק / דוחה בתיווך של מולקולות מיון האקסון אשר רמות הביטוי נקבעים על ידי ביטוי או מולקולות 7 . מולקולות מיון האקסון המעורבות בהפרדה גלומרולארית מתבטאות בצורה פסיפסית עצמאית של מיקום ב- OB 9 . במחקר זה, בחרנו את הגנים הבאים: Kirrel2 , Sema7A , OLPC , BIG-2 ו- PCDH17 . חלק ממולקולות המיון של האקסון מתבטאות באופן תלוי-פעילות 7 , 8 , 10 .
את החיסון ארבעAining השיטה המוצגת כאן מותר להדמיה של דפוסי הביטוי של ארבע מולקולות בו זמנית על אותו סעיף. המולקולות של מיון האקסון הראו ביטויי פסיפס ללא תלות במיקומים, אך הדפוסים שלהם לא היו זהים ( תרשימים 1 א ', ב' ). המבנה glomerular הוגדר על ידי אותות ניאון של VGLUT2 ( איור 2 א ). אקסון מיון המולקולות (Kirrel2, Sema7A, OLPC) הובעו באופן דיפרנציאלי בכל glomerulus; עם זאת, VGLUT2, אשר שימש כסמן glomerular, היה לידי ביטוי אחיד בין glomeruli ( תרשימים 2B, 2C ).
גלומרולוס יחיד יכול להיחשב כיחידת נתונים המיוצגת על ידי משתנים מרובים. כדי לנתח את הנתונים ביטוי רב משתנים, ניתוח רכיב ראשי (PCA) בוצעה. PCA מגדיר מערכת קואורדינטות חדשה, כך שלקואורדינטת הראשונה יש את הנתונים העיקריים של השונות, וכל אחד מהם מצליחלתאום יש את השונות השיורית הגדולה ביותר. הנתונים datasets היו נתונים PCA ו זממו במרחב של הרכיב העיקרי הראשון והשני (PC1 ו- PC2) ( איור 3 א ). יחס התרומה של כל רכיב עיקרי מציין כמה אחוזים כל רכיב עיקרי מייצג בסך הכל את הנטייה של המשתנים. יחסי התרומה של PC1, PC2, PC3, PC4 ו- PC5 היו 33.4%, 28.2%, 19.8%, 17.3% ו -6.3%, בהתאמה ( איור 3 ב ). PCA גם חשף את גורם טוען בכל רכיב העיקרי. הטעינה של גורם הריבוע מציינת כמה אחוז מהשונות במשתנה המקורי מוסבר על ידי גורם. ב PC1, גורם העמסה של Sema7A, OLPC, ו Kirrel2 הועלו חיובי, ואילו אלה של BIG-2 ו PCDH17 לא היו ( איור 3 ג ). מחקר קודם ניתח את הביטוי של מולקולות אלה בעכברים המוטנטים שחסרו עבור נוקלאוטי מחזורית De-gated (CNG) ערוץ גן, שהוא מרכיב של התמרה האות חוש הריח 11 , והראה כי דפוסי שינויים תלויי CNG ברמות הביטוי דומים גורם טוען ב PC1 9 . תוצאות אלו הציעו כי מגוון הביטויים של מולקולות אלה נוצר על ידי CNG ערוץ בתיווך הפעילות העצבית.
איור 1: 4 אימונוסטטינג של סעיף פרזגיטל OB. ( א ) תרשים סכמטי של OE & OB. ( ב ) סעיף OB parasagittal של עכבר בן שבועיים immunostained עם נוגדנים נגד GLUT2 (לבן), Kirrel2 (אדום), Sema7A (ירוק), ו OLPC (כחול). התמונה הממוזגת של Kirrel2 (אדום), Sema7A (ירוק) ו OLPC (כחול) הוצג בצד ימין. סולם ברים = 100 מיקרומטר./ אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו. "Target =" _ blank "
איור 2: ביטוי הביטוי של אקסון מיון מולקולות. ( א ) נורת חוש הריח parasagittal (OB) סעיף immunostained עם נוגדנים נגד VGLUT2 (סגול), Kirrel2 (אדום), Sema7A (ירוק), ו OLPC (כחול). כל glomerulus מוגדר על ידי אותות ניאון של VGLUT2 (סמן מראש סינפטי). מבנים גלומרולריים מוקפים בקווים מקווקווים. ( ב ) ביטוי רמות של Kirrel2, Sema7A, ו OLPC ב glomeruli # 1, # 3, # 4, # 6. עוצמות מכתים של מולקולות מיון האקסון נמדדו בכל glomerulus. ( ג ) רמות הביטוי של מולקולות מיון האקסון ו VGLUT2 לעומת glomeruli. עוצמת האותות של המולקולות הללו נמדדה ב- EAChromeulus ch. פסי אפור על הגרפים מצביעים על הממוצע של רמת הביטוי. סולם בר = 100 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 3: PCA של ביטוי נתונים של אקסון מיון מולקולות. ( א ) ניתוח רכיב ראשי (PCA) ציון biplots (PC1 לעומת PC2) של מערך הביטוי של חמישה מולקולות מיון האקסון (Kirrel2, Sema7A, OLPC, BIG-2 ו- PCDH17). סך של 1799 glomeruli נותחו. ( ב ) יחסי התרומה ושיעורי התרומה המצטברת של כל חמשת המרכיבים העיקריים. יחסי התרומה של PC1, PC2, PC3, PC4 ו- PC5 הם 0.334, 0.282, 0.198, 0.173 ו- 0.063 בהתאמה. ( ג ) גורם טוען של Kirrel2, Sema7A, OLPC, BIG-2 ו- PCDH17 ב- PC1-3. Eigenvalues של PC1, PC2 ו- PC3 הם 1.67, 1.16 ו- 0.99, בהתאמה. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Quadostple immunostaining של parasagittal סעיפים OB אפשרה להדמיה וכימות של רמות ביטוי של רבים כמו ארבעה מולקולות מיון האקסון בו זמנית במספר גדול יותר של glomeruli. על ידי ניתוח נתונים אלה רב משתנים עם PCA, את המאפיינים של הביטוי של מולקולות אלה ניתן לשער.
לקבלת מכתים מוצלח, הכנת דגימות רקמות חשוב ביותר. פרוטוקולים מסוימים מציעים כי רקמות צריך להיות שלאחר קבוע עם PFA 4% ו טופלו סוכרוז 30% עבור cryoprotection. עם זאת, שלבים אלה הושמטו בפרוטוקול זה. הסיבה לכך היא, במקרים רבים, צעדים אלה להפחית את עוצמת האות מכתים להגדיל את הרקע. יתר על כן, חלקים לא צריך להיות יבשים בכל השלבים כדי למנוע רקע גבוה במהלך מכתים.
מצב מכתים אופטימלי שונה בהתאם לסוגים של רקמות ונוגדנים בשימוש. לכן, זה הכרחיY כדי לקבוע את תנאי מכתים ספציפיים עבור כל ניסוי. יתר על כן, הריכוז של נוגדנים ראשוניים גם הוא חשוב. כאשר הריכוז גבוה מדי, הוא מגדיל את הרקע. עם זאת, כאשר הריכוז הוא נמוך מדי, זה מקטין את האות. לכן, חשוב, לזהות את הריכוז המתאים של נוגדנים ראשוניים כדי להשיג תוצאות באיכות גבוהה מכתים. מגבלה אחת היא כי שיטה זו תלויה באופן משמעותי על איכות הנוגדנים העיקריים ואת שילוב נוגדנים ראשוניים ביחס מיני בעלי חיים.
חלקים העטרה של OB שימשו באופן שגרתי immunostaining. עם זאת, בפרוטוקול זה, חלקים parasagittal של הצד המדיאלי של OB שימשו כדי להיות מסוגל מקום glomeruli יותר על סעיף אחד. מאז חלקים אלה לשמור על הסדר הטופוגרפי של glomeruli לאורך הצירים הגבי-הגחון הקדמי-האחורי, הם יכולים לשמש גם כדי לנתח את דפוסי ההפצה שלמולקולות הדרכה האקסון, אשר קובעים את אתרי ההקרנה של האקסונים OSN.
במחקר זה, חלקים parasagittal של OB היו מוכנים לאפשר הצבת glomeruli יותר על סעיף אחד. יתר על כן, חלקים אופקי יכול להיות שימושי גם עבור החוקרים כדי לחשוף את ההבדלים לאורך ציר המדיאלי לרוחב או הקדמי-האחורי. עם התפתחותם של נוגדנים שיכולים לשמש עבור immunostainings מרובים, שיטה זו מכתים מרובעת ניתן ליישם לא רק OB, אלא גם לאזורים אחרים במוח.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אינם מכריזים על אינטרסים פיננסיים מתחרים.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי קרן מיצובישי, קרן המדע של Takeda, JST PRESTO ו- JSPS KAKENHI Grant מספר 16H06144.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phosphate-Buffered Saline (PBS) Tablets, pH7.4 | TAKARA BIO | T9181 | |
| Skim Milk | nacalai tesque | 31149-75 | |
| goat anti-Sema7A antibody | R&D Systems | AF2068 | |
| rat anti-OLPC antibody | Merck Millipore | MABT20 | |
| mouse anti-VGLUT2 antibody | Merck Millipore | MAB5504 | |
| goat anti-BIG-2 antibody | R&D Systems | AF2205 | |
| gunea pig anti-Kirrel2 antibody | Operon Biotechnologies | Anti-Kirrel2 antibodies were generated by immunizing guinea pigs with KLH-conjugated synthetic peptides (644-673aa): CRLYRARAGYLTTPHPRAFTSYMKPTSFGP | |
| donkey anti-mouse Alexa Fluor 405 | Abcam | ab175658 | |
| donkey anti-goat Alexa Fluor 488 | Jackson ImmunoResearch | 705-545-003 | |
| donkey anti-guinea pig Alexa Fluor 555 | Thermo Fisher Scientific | A21432 | |
| donkey anti-rat Alexa Fluor 647 | Jackson ImmunoResearch | 712-605-153 | |
| Paraformaldehyde (PFA) | Wako | 162-16065 | |
| MAS coated slide glasses | MATSUNAMI | MAS-01 | |
| forceps | Fine Science Tools | 11253-27 | |
| Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 15000-00 | |
| dissecting scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| fluorescent microscope | KEYENCE | BZ-X700 | |
| DAPI filter cube | KEYENCE | OP-87762 | |
| GFP filter cube | KEYENCE | OP-87763 | |
| TRITC filter cube | KEYENCE | OP-87764 | |
| Cy5 filter cube | KEYENCE | OP-87766 | |
| filter paper | ADVANTEC | 00011185 | |
| O.C.T compound | Sakura Finetek | M71484 |
References
- Mori, K., Sakano, H. How is the olfactory map formed and interpreted in the mammalian brain? Annu Rev Neurosci. 34, 467-499 (2011).
- Takeuchi, H., Sakano, H. Neural map formation in the mouse olfactory system. Cell Mol Life Sci. 71, 3049-3057 (2014).
- Mombaerts, P., et al. Visualizing an olfactory sensory map. Cell. 87, 675-686 (1996).
- Feinstein, P., Mombaerts, P. A contextual model for axonal sorting into glomeruli in the mouse olfactory system. Cell. 117, 817-831 (2004).
- Ishii, T., et al. Monoallelic expression of the odourant receptor gene and axonal projection of olfactory sensory neurones. Genes Cell. 6, 71-78 (2001).
- Nakashima, A., et al. Agonist-independent GPCR activity regulates anterior-posterior targeting of olfactory sensory neurons. Cell. 154, 1314-1325 (2013).
- Serizawa, S., et al. A neuronal identity code for the odorant receptor-specific and activity-dependent axon sorting. Cell. 127, 1057-1069 (2006).
- Kaneko-Goto, T., Yoshihara, S., Miyazaki, H., Yoshihara, Y. BIG-2 mediates olfactory axon convergence to target glomeruli. Neuron. 57, 834-846 (2008).
- Ihara, N., Nakashima, A., Hoshina, N., Ikegaya, Y., Takeuchi, H. Differential expression of axon-sorting molecules in mouse olfactory sensory neurons. Eur J Neuro. 44, 1998-2003 (2016).
- Williams, E. O., et al. Delta Protocadherin 10 is Regulated by Activity in the Mouse Main Olfactory System. Front Neural Circuits. 5, 9 (2011).
- Brunet, L. J., Gold, G. H., Ngai, J. General anosmia caused by a targeted disruption of the mouse olfactory cyclic nucleotide-gated cation channel. Neuron. 17, 681-693 (1996).
