Summary
Olfactorische zintuiglijke neuronen vormen een grote verscheidenheid aan axon-sorterende moleculen om een goede neurale schakeling te vormen. Dit protocol beschrijft een immunohistochemische kleuring methode om combinatorische expressies van axon-sorterende moleculen te visualiseren bij de axon termini van olfactorische sensorische neuronen.
Abstract
Het muisolfactorische systeem wordt vaak gebruikt om mechanismen van neurale circuitvorming te bestuderen door zijn eenvoudige anatomische structuur. Een Olfactory Sensory Neuron (OSN) is een bipolaire cel met een enkel dendriet en een enkele onbewerkte axon. Een OSN expresseert slechts één Olfactor Receptor (OR) gen, OSN's die een bepaald type OR uitdrukken, convergeren hun axonen naar een paar sets van invariant glomeruli in de Olfactory Bulb (OB). Een opvallend kenmerk van OSN-projectie is dat de uitgedrukte OR's instructieve rollen spelen in axonale projectie. OR's regelen de expressie van meerdere axon-sorteermoleculen en genereren de combinatorische moleculaire code van axon-sorteermoleculen bij de OSN axon termini. Om de moleculaire mechanismen van OR-specifieke axonbegeleidingsmechanismen te begrijpen is het daarom van vitaal belang om hun expressieprofielen op de OSN axon termini te identificeren binnen dezelfde glomerulus. Het doel van dit artikel was om methoden voor het verzamelen van zoveel glomeruli als mogelijk te introducerenE op een enkele OB-sectie en voor het verrichten van immunostaining met behulp van meerdere antilichamen. Dit zou de vergelijking en analyse van de expressiepatronen van axon-sorterende moleculen mogelijk maken zonder kleurvariatie tussen OB-secties te verklaren.
Introduction
Tijdens de ontwikkeling zijn neuronen precies verbonden met elkaar om de juiste neurale circuits te vormen, die kritiek is voor de normale hersenfunctie. Aangezien afwijkende neurale circuits in de hersenen vermoedelijk de oorzaak zijn van psychische stoornissen zoals autisme en schizofrenie, is het begrip van de mechanismen van neurale circuitvorming een van de belangrijkste uitdagingen op het gebied van neurowetenschappen.
In het olfactorische systeem van de muis vertoont elke Olfactory Sensory Neuron (OSN) in het Olfactory Epithelium (OE) slechts één functioneel Olfactor Receptor (OR) gen en OSN's die hetzelfde uitdrukken of hun axonen convergeren naar een specifiek paar glomeruli op stereotiepe locaties in de Olfactory Bulb (OB) 1 , 2 . Het muisolfactorische systeem is een uitstekend model systeem voor het bestuderen van de moleculaire mechanismen van neurale circuitvorming omdat onderzoekers de OR-expressie kunnen gebruiken om een specifieke s te identificerenUbtype van OSN's en visualiseer de projectiesites van OSN axons als duidelijke glomerulaire structuren. Een opvallend kenmerk van OSN-projectie is dat OR's instructieve rollen spelen bij het projecteren van OSN-axons naar de OB 3 , 4 , 5 , 6 . Meer specifiek, nadat OSN-axonen worden geleid om de doelgebied te benaderen, worden ze gescheiden om glomerulus op een OR-afhankelijke manier te vormen. Vorige onderzoeken hebben aangetoond dat OR moleculen de expressie van axon-sorterende moleculen regelen, die glomerulaire segregatie 7 , 8 regelen. Bovendien suggereert accumulerende bewijs dat OR moleculen de neuronale identiteitscode genereren door een unieke combinatie van axon-sorterende moleculen 9 . Om het mechanisme van OR-afhankelijke glomerulaire segregatie te begrijpen, is het daarom nodig om de expressieprofielen van axon-sorterende moleculen te karakteriserenEcules in OSN's.
Fluorescerende immunostaining is een gebruikelijke methode om de expressie van specifieke genen te visualiseren. Aangezien eiwitten van axon-sorterende moleculen overwegend gelokaliseerd zijn aan OSN-axonen, moeten onderzoekers OB-afdelingen gebruiken om hun expressiepatronen in OSN's te karakteriseren. Coronale doorsnede van de OB is routinematig gebruikt voor immunostaining. Deze voorbereiding verliest echter de topografische informatie langs de voor- en achterste as in dezelfde OB-sectie. We ontwikkelden daarom een parasagittale voorbereiding van de mediale zijde van de OB, die zo veel mogelijk glomeruli op de zelfde OB-sectie kan monteren. Gecombineerd met immunostaining met behulp van meerdere antilichamen, maakt dit preparaat de vergelijking en analyse van de expressiepatronen van axon-sorterende moleculen zonder kleursvariatie tussen OB-secties mogelijk.
Verder is een immunohistochemische kleuring methode gepresenteerd zonder postfixatie met PFA aEn sucrose behandeling. Met deze methode kunnen onderzoekers voldoende kwalitatief goede kleurdata verkrijgen voor multivariabele data-analyse. De hier beschreven protocollen geven details van krachtige methoden voor onderzoekers die de olfactieve neurale kringvorming bestuderen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle experimentele procedures werden uitgevoerd met goedkeuring van het ethiekcomité voor dierproeven aan de Universiteit van Tokio en volgens de richtlijnen van de Universiteit van Tokio voor de verzorging en het gebruik van laboratoriumdieren.
1. Bereiding van oplossingen
- Bereid 0,01 M fosfaatbufferde zoutoplossing (PBS) op: Voeg een PBS-tablet (0,14 M NaCl, 0,0027 M KCl, 0,010 M PO 4 3- , pH 7,4) toe aan 1 liter gedistilleerd water en roer bij kamertemperatuur totdat het volledig is opgelost.
- Bereid 4% paraformaldehyde (PFA) in PBS: voeg 4 g PFA toe aan 100 ml PBS. Roer de oplossing bij 60 ° C tot het volledig is opgelost.
- Na het oplossen van de PFA in PBS, pas de pH van de oplossing aan op 7.4 met 1 N natriumhydroxide (NaOH). Dan afkoelen op ijs en filter de oplossing door een filterpapier om eventuele deeltjes te verwijderen. Bewaren bij 4 ° C.
Let op: Neem de nodige zorg bij gebruik van deze reagentia. HandvatMet zorg en handschoenen, veiligheidsbril en laboratoriumjas onder een chemische kap.
OPMERKING: Gebruik verse 4% PFA oplossing bereid binnen 2 d.
- Na het oplossen van de PFA in PBS, pas de pH van de oplossing aan op 7.4 met 1 N natriumhydroxide (NaOH). Dan afkoelen op ijs en filter de oplossing door een filterpapier om eventuele deeltjes te verwijderen. Bewaren bij 4 ° C.
- Bereid 0,01 M PBS aangevuld met 0,3% Triton X-100 (PBST): voeg 3 ml Triton X-100 tot 997 ml PBS toe. Roer de oplossing bij RT totdat het volledig is opgelost.
- Bereid 1% en 5% blokkerende oplossing op: voeg 10 g schuimmelk toe aan 200 ml PBST om 5% blokkerende oplossing voor te bereiden. Roer bij RT totdat het volledig is opgelost. Verdun 5% blokkerende oplossing vijf keer met PBST om 1% blokkerende oplossing te bereiden.
2. Voorbereiding van parasitaire OB secties
- Gebruik dieren tussen 1-2 weken oud. Deze leeftijdsgroepen zijn geschikt voor de volgende experimenten omdat glomeruli duidelijk zichtbaar zijn en de hersenen met de schedel kunnen worden gesneden.
- Verdoof het dier met een intraperitoneale injectie van pentobarbital (50 mg / kg lichaamsgewicht). Perfectioneer het dier transcardiaal met ijskoud 4% PFA in PBS. Hanteer voorzichtig en gebruik handschoenen, veiligheidsbril en laboratoriumjas onder een chemische kap.
- Na perfusie, snijd het hoofd met een schaar en verwijder de huid zorgvuldig. Zet dan een mes van de schaar in de ruimte tussen de bovenste en onderste tanden en snijd horizontaal om de onderste kaakbeen te verwijderen. Trim het overtollige weefsel met pincet en een schaar om het olfactieve weefsel te verlaten, inclusief de OB en OE.
OPMERKING: Verwijder niet de schedel rondom de OB omdat dit de mediale glomeruli rechtop rechtop houdt. - Dompel het olfactieve weefsel in PBS om de lucht in de neusholte te verwijderen. Knip het achterste gedeelte van de hersenen verticaal af en plaats het olfactieve weefsel op de bodem van de embeddingvorm met het snijvlak naar beneden. Vul de schimmel met Optimal Cutting Temperature (OCT) compound en doei de vorm dan in vloeibare stikstof.
- Nadat het weefsel in de verbinding volledig is bevroren, incubeer het in de cryosTat bij -20 ° C gedurende 1 uur.
- Maak seriële parasagittale secties (10 μm) van de OB met een cryostat en verzamel ze door vast te houden aan MAS-gecoate glazen glijbanen. Na het plakken, droog de dia's onmiddellijk met een droogtrommel.
3. Dag 1: Quadruple Immunostaining van de OB Slices
- Was de glijbanen gedurende 5 minuten met PBS bij RT. Herhaal 3 keer.
- Blok de niet-specifieke bindingsplaatsen door de glijbanen 1 uur in te incuberen met de 5% blokkeringsoplossing bij RT.
- Incubeer de dia's O / N met een cocktail van primaire antilichamen (400 μl elke dia) in de 1% blokkerende oplossing bij RT. Gebruik de volgende primaire antilichamen: antilichaam anti-Kirrel2-antilichaam (1: 1000), geit anti-semaforine-7A (Sema7A) antilichaam (1: 500), anti-OL-protocadherine (OLPC) antilichaam (1: 500) En anti-vesiculaire glutamaat transporter2 van de muis (VGLUT2) antilichaam (1: 500).
4. Dag 2: Quadruple Immunostaining van de OBSlices
- Gooi de primaire antilichaamoplossing weg en doe de glijbanen gedurende 5 minuten met PBST bij RT. Herhaal 3 keer.
- Incubeer de dia's gedurende 1 uur met een cocktail van secundaire antilichamen (400 μl elke dia) in PBS bij RT. Gebruik de volgende secundaire antilichamen: Alexa anti-mousse Alexa Fluor 405 (1: 400), ezel anti-geiten Alexa Fluor 488 (1: 400), Donkere anti-cavia Alexa Fluor 555 (1: 400) Ratten Alexa Fluor 647 (1: 400).
OPMERKING: Alle secundaire antilichamen zouden afkomstig moeten zijn van dezelfde gastheersoort. Kies een andere golflengte van fluorescentie van secundaire antilichamen voor elk primair antilichaam om te voorkomen dat de golflengtes overlappen. - Gooi de oplossing weg en doe de glijbanen gedurende 5 minuten met PBS bij RT. Herhaal 3 keer.
- Monteer de deklagen op de glijbanen met het montagemedium. Zet hiervoor 2 druppels van het montagemedium op elke dia, en doe dan een deklaag door de luchtbellen te verwijderen.
5. Intensiteit Measurements
- Verkrijg fluorescerende beelden met een fluorescentiemicroscoop. Gebruik de volgende filterblokjes: DAPI filterkubus (360/40 nm excitatie, 460/50 nm emissie en 400 nm dichroische spiegel) voor Alexa Fluor 405 signalen, GFP filterkubus (470/40 nm excitatie, 525/50 nm emissie, En 495 nm dichroische spiegel) voor Alexa Fluor 488, TRITC filterkubus (545/25 nm excitatie, 605/70 nm emissie en 565 nm dichroische spiegel) voor Alexa Fluor 555 en Cy5 filterkubus (620/60 nm excitatie, 700 / 75 nm emissie en 600 nm dichroische spiegel) voor Alexa Fluor 647.
Opmerking: Stel de belichtingstijd in om fluorescerende signalen van de afbeelding te verkrijgen zonder verzadiging. - Definieer de glomerulaire structuur door immunofluorescentie signalen van VGLUT2. Meet vlekintensiteiten van axon-sorterende moleculen binnen glomeruli met ImageJ.
6. Data-analyse
- Subtract achtergrondsignalen van de kleurintensiteiten van axon-sorterende moleculen.
- Bereid thE-expressiedatamatrix, die kolommen bevat die samengesteld zijn uit axon-sorterende moleculen en rijen samengesteld uit de glomeruli.
- Voer een hoofdcomponentanalyse (PCA) uit met behulp van de voorbereide expressie dataset. Krijg dan de PCA scores, bijdrage ratio's en factor loadings van elk hoofdcomponent.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De olfactieve glomerulaire kaart wordt gevormd door initiële globale targeting en daaropvolgende glomerulaire segregatie van OSN axons 1 , 2 . Glomerulaire segregatie wordt gereguleerd door de adhesieve / afstotende axonale interacties gemedieerd door axon-sorterende moleculen waarvan de expressieniveaus worden bepaald door uitgedrukte OR-moleculen 7 . De axon-sorterende moleculen die betrokken zijn bij glomerulaire segregatie worden uitgedrukt in een positie-onafhankelijke mozaïekwijze in de OB 9 . In deze studie hebben we de volgende genen geselecteerd: Kirrel2 , Sema7A , OLPC , BIG-2 en PCDH17 . Sommige van deze axon-sorterende moleculen worden uitgedrukt op een activiteit-afhankelijke wijze 7 , 8 , 10 .
De viervoudige immunostAining methode hier getoond laat de visualisatie van de expressiepatronen van vier moleculen gelijktijdig op dezelfde sectie toe. Deze axon-sorterende moleculen vertoonden positie-onafhankelijke mozaïekuitdrukkingen, maar hun patronen waren niet identiek ( Figuren 1A, B ). De glomerulaire structuur werd gedefinieerd door fluorescerende signalen van VGLUT2 ( Figuur 2A ). Axon-sorterende moleculen (Kirrel2, Sema7A, OLPC) werden differentieel uitgedrukt in elke glomerulus; VGLUT2, die als glomerulaire marker werd gebruikt, werd evenwel uitgedrukt onder glomeruli ( figuren 2B, 2C ).
Een enkele glomerulus kan worden beschouwd als een data-eenheid die wordt weergegeven door meerdere variabelen. Om deze multivariate expressiegegevens te analyseren, werd de belangrijkste componentanalyse (PCA) uitgevoerd. PCA definieert een nieuw coördinatensysteem, zodat de eerste coördinatest de grootste variantdatasets heeft en dat ieder slaagtCoördinaat heeft de grootste restvariantie. De expressie datasets werden onderworpen aan PCA en geplot in de ruimte van de eerste en tweede hoofdcomponent (PC1 en PC2) ( Figuur 3A ). De bijdrage verhouding van elk hoofdcomponent geeft aan hoeveel percentage elk hoofdcomponent in de totale neiging van de variabelen vertegenwoordigt. De bijdrage ratio's van PC1, PC2, PC3, PC4 en PC5 waren respectievelijk 33,4%, 28,2%, 19,8%, 17,3% en 6,3% ( Figuur 3B ). PCA onthulde ook de factorbelastingen in elk hoofdcomponent. De kwadratische factorbelastingen geven aan hoeveel percentage van de variantie in een originele variabele door een factor wordt verklaard. In PC1 werden de factorbelastingen van Sema7A, OLPC en Kirrel2 positief geladen, terwijl die van BIG-2 en PCDH17 niet waren ( Figuur 3C ). Een eerdere studie analyseerde de expressie van deze moleculen in de mutante muizen die gebrekkig waren voor de cyclische nucleoti Ontbinding (CNG) kanaal gen, dat een onderdeel is van de olfactorische signaaltransductie 11 , en toonde dat de patronen van CNG-afhankelijke veranderingen in de expressieniveaus lijken op de factorbelastingen in PC1 9 . Deze resultaten suggereerden dat de verscheidenheid van expressies van deze moleculen werd gegenereerd door CNG-kanaal gemedieerde neurale activiteit.
Figuur 1: Quadruple Immunostaining van een Parasagittale OB sectie. ( A ) Schematisch diagram van de OE & OB. ( B ) Een parasagittale OB-sectie van een 2 week oude muis die immunostained is met antilichamen tegen v GLUT2 (wit), Kirrel2 (rood), Sema7A (groen) en OLPC (blauw). Het samengevoegde beeld van Kirrel2 (rood), Sema7A (groen) en OLPC (blauw) werd rechts weergegeven. Schaalstaven = 100 μm./files/ftp_upload/55893/55893fig1large.jpg "target =" _ blank "> Klik hier om een grotere versie van deze figuur te zien.
Figuur 2: Uitdrukkingsanalyse van Axon-sorteermoleculen. ( A ) Een parasagittale olfactorische bol (OB) sectie die immunostained is met antilichamen tegen VGLUT2 (paars), Kirrel2 (rood), Sema7A (groen) en OLPC (blauw). Elke glomerulus wordt bepaald door fluorescerende signalen van VGLUT2 (pre-synaptische marker). Glomerulaire structuren worden omringd door streepjes. ( B ) Uitdrukkingsniveaus van Kirrel2, Sema7A en OLPC in glomeruli # 1, # 3, # 4 en # 6. Staining intensities van axon-sorterende moleculen werden gemeten in elke glomerulus. ( C ) Uitdrukkingsniveaus van de axon-sorteermoleculen en VGLUT2 vergeleken onder de glomeruli. De signaalintensiteiten van deze moleculen werden gemeten in eaCh glomerulus. Grijze staven op de grafieken geven het gemiddelde aan van het expressieniveau. Schaalbalk = 100 μm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: PCA van expressiedata van Axon-sorteermoleculen. ( A ) Principele component analyse (PCA) score biplots (PC1 Vs. PC2) van de expressie dataset van vijf axon-sorterende moleculen (Kirrel2, Sema7A, OLPC, BIG-2 en PCDH17). In totaal werden 1799 glomeruli geanalyseerd. ( B ) De bijdrage ratio's en cumulatieve bijdrage ratio's van alle vijf hoofdcomponenten. De bijdrage verhoudingen van PC1, PC2, PC3, PC4 en PC5 zijn respectievelijk 0.334, 0.282, 0.198, 0.173 en 0.063. ( C ) De factorbelastingen van Kirrel2, Sema7A, OLPC, BIG-2 en PCDH17 in PC1-3. Eigenwaarden van PC1, PC2 en PC3 zijn respectievelijk 1,67, 1,16 en 0,99. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Viervoudige immunostaining van parasagittale OB-secties heeft de visualisatie en kwantificering van de expressieniveaus van maximaal vier axon-sorteermoleculen gelijktijdig mogelijk gemaakt in een groter aantal glomeruli. Door deze multivariabele gegevens te analyseren met PCA kunnen de kenmerken voor de expressie van die moleculen gespeculeerd worden.
Voor succesvolle kleuring is het weefselmonsterbereiding kritisch belangrijk. Sommige protocollen suggereren dat weefsels moeten worden vastgemaakt met 4% PFA en behandeld met 30% sucrose voor cryoprotectie. Deze stappen zijn echter weggelaten in dit protocol. Dit komt doordat deze stappen in veel gevallen de intensiteit van het kleurensignaal verminderen en de achtergrond vergroten. Bovendien mogen secties niet worden verdroogd bij enige stappen om een hoge achtergrond te voorkomen tijdens het vullen.
De optimale kleuringstoestand is anders, afhankelijk van de soorten weefsels en antilichamen die worden gebruikt. Daarom is het noodzakelijkY om de specifieke kleuringstoestanden voor elk experiment te bepalen. Bovendien is de concentratie van primaire antilichamen ook belangrijk. Wanneer de concentratie te hoog is, verhoogt het de achtergrond. Wanneer de concentratie echter te laag is, vermindert het signaal. Het is daarom belangrijk om de juiste concentratie van primaire antilichamen te identificeren om kwalitatief hoogwaardige kleurresultaten te verkrijgen. Eén beperking is dat deze methode sterk afhankelijk is van de kwaliteit van de primaire antilichamen en de primaire antilichamencombinatie met betrekking tot diersoorten.
Coronale delen van de OB zijn routinematig gebruikt voor immunostaining. In dit protocol werden parasagitale delen van de mediale kant van de OB gebruikt om meer glomeruli op een enkele sectie te plaatsen. Aangezien deze secties de topografische volgorde van de glomeruli langs de dorsale ventrale en anterior-posterior axes behouden, kunnen ze ook gebruikt worden om de verdelingspatronen vanAxon begeleiding moleculen, die de projectie sites van OSN axons bepalen.
In deze studie werden parasagittale delen van de OB bereid om meer glomeruli op een enkele sectie te plaatsen. Verder kunnen horizontale secties ook nuttig zijn voor onderzoekers om de verschillen langs de mediale-laterale of voorste-achterste as te onthullen. Met de ontwikkeling van antilichamen die kunnen worden gebruikt voor meerdere immunostainings, kan deze viervoudige kleurmethode niet alleen toegepast worden op de OB, maar ook op andere hersengebieden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs verklaren geen concurrerende financiële belangen.
Acknowledgments
Dit werk werd ondersteund door de Mitsubishi Foundation, de Takeda Science Foundation, JST PRESTO en JSPS KAKENHI Grant Number 16H06144.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Phosphate-Buffered Saline (PBS) Tablets, pH7.4 | TAKARA BIO | T9181 | |
| Skim Milk | nacalai tesque | 31149-75 | |
| goat anti-Sema7A antibody | R&D Systems | AF2068 | |
| rat anti-OLPC antibody | Merck Millipore | MABT20 | |
| mouse anti-VGLUT2 antibody | Merck Millipore | MAB5504 | |
| goat anti-BIG-2 antibody | R&D Systems | AF2205 | |
| gunea pig anti-Kirrel2 antibody | Operon Biotechnologies | Anti-Kirrel2 antibodies were generated by immunizing guinea pigs with KLH-conjugated synthetic peptides (644-673aa): CRLYRARAGYLTTPHPRAFTSYMKPTSFGP | |
| donkey anti-mouse Alexa Fluor 405 | Abcam | ab175658 | |
| donkey anti-goat Alexa Fluor 488 | Jackson ImmunoResearch | 705-545-003 | |
| donkey anti-guinea pig Alexa Fluor 555 | Thermo Fisher Scientific | A21432 | |
| donkey anti-rat Alexa Fluor 647 | Jackson ImmunoResearch | 712-605-153 | |
| Paraformaldehyde (PFA) | Wako | 162-16065 | |
| MAS coated slide glasses | MATSUNAMI | MAS-01 | |
| forceps | Fine Science Tools | 11253-27 | |
| Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools | 15000-00 | |
| dissecting scissors | Fine Science Tools | 14090-09 | |
| fluorescent microscope | KEYENCE | BZ-X700 | |
| DAPI filter cube | KEYENCE | OP-87762 | |
| GFP filter cube | KEYENCE | OP-87763 | |
| TRITC filter cube | KEYENCE | OP-87764 | |
| Cy5 filter cube | KEYENCE | OP-87766 | |
| filter paper | ADVANTEC | 00011185 | |
| O.C.T compound | Sakura Finetek | M71484 |
References
- Mori, K., Sakano, H. How is the olfactory map formed and interpreted in the mammalian brain? Annu Rev Neurosci. 34, 467-499 (2011).
- Takeuchi, H., Sakano, H. Neural map formation in the mouse olfactory system. Cell Mol Life Sci. 71, 3049-3057 (2014).
- Mombaerts, P., et al. Visualizing an olfactory sensory map. Cell. 87, 675-686 (1996).
- Feinstein, P., Mombaerts, P. A contextual model for axonal sorting into glomeruli in the mouse olfactory system. Cell. 117, 817-831 (2004).
- Ishii, T., et al. Monoallelic expression of the odourant receptor gene and axonal projection of olfactory sensory neurones. Genes Cell. 6, 71-78 (2001).
- Nakashima, A., et al. Agonist-independent GPCR activity regulates anterior-posterior targeting of olfactory sensory neurons. Cell. 154, 1314-1325 (2013).
- Serizawa, S., et al. A neuronal identity code for the odorant receptor-specific and activity-dependent axon sorting. Cell. 127, 1057-1069 (2006).
- Kaneko-Goto, T., Yoshihara, S., Miyazaki, H., Yoshihara, Y. BIG-2 mediates olfactory axon convergence to target glomeruli. Neuron. 57, 834-846 (2008).
- Ihara, N., Nakashima, A., Hoshina, N., Ikegaya, Y., Takeuchi, H. Differential expression of axon-sorting molecules in mouse olfactory sensory neurons. Eur J Neuro. 44, 1998-2003 (2016).
- Williams, E. O., et al. Delta Protocadherin 10 is Regulated by Activity in the Mouse Main Olfactory System. Front Neural Circuits. 5, 9 (2011).
- Brunet, L. J., Gold, G. H., Ngai, J. General anosmia caused by a targeted disruption of the mouse olfactory cyclic nucleotide-gated cation channel. Neuron. 17, 681-693 (1996).
