Summary
Detta protokoll beskriver implantation och utvärdering av melanom i murin choroid med hjälp av optisk koherenstomografi.
Abstract
Att etablera experimentella koroidala melanommodeller är utmanande när det gäller förmågan att inducera tumörer vid rätt lokalisering. Dessutom begränsar svårigheter att observera bakre koroidalt melanom in vivo tumörplats och tillväxtutvärdering i realtid. Tillvägagångssättet som beskrivs här optimerar tekniker för att etablera koroidalt melanom hos möss via en flerstegs subkoroidal B16LS9-cellinjektionsprocedur. För att möjliggöra precision vid injektion i de små dimensionerna av musuvea, utförs hela proceduren under ett mikroskop. Först bildas en konjunktival peritomi i ögats dorsala temporala område. Därefter skapas ett område i det subkoroidala utrymmet genom att sätta in en nål genom den exponerade sclera. Detta följs av införandet av en trubbig nål i kanalen och injektionen av melanomceller i choroid. Omedelbart efter injektion används icke-invasiv optisk koherenstomografi (OCT) avbildning för att bestämma tumörens plats och framsteg. Retinal frigöring utvärderas som en prediktor för tumörplats och storlek. Den presenterade metoden möjliggör reproducerbar induktion av koroid-lokaliserat melanom hos möss och levande avbildning av tumörtillväxtutvärdering. Som sådan ger det ett värdefullt verktyg för att studera intraokulära tumörer.
Introduction
Uvealt melanom (UM) är den vanligaste intraokulära primära maligniteten hos vuxna. Cirka 90% av okulära melanom härrör från melanocyter i choroidregionen i uvealkanalen1. UM är en viktig orsak till sjuklighet och dödlighet, eftersom det uppskattas att nära 50% av patienterna utvecklar metastaserad sjukdom, med levern som den viktigaste platsen för metastasering2. Tidig behandling av primära lesioner kan minska risken för metastaser, men ingen effektiv behandling förhindrar bildning av metastaser3.
Standardbehandlingen av uvealt melanom inkluderar bestrålningsbehandling, som är förknippad med synförlust på grund av optisk neuropati, retinopati, torra ögonsyndrom och grå starr. Kirurgisk resektion fördröjs typiskt tills tillväxten av lesionen känns igen och karakteriseras. En sådan fördröjning kan dock möjliggöra metastaserad sjukdomsutveckling4. I vissa fall krävs meningslös enukleation. Naturligtvis äventyrar detta radikala förfarande synen och resulterar i dramatisk estetisk försämring.
Det har gjorts många ansträngningar för att utveckla experimentella modeller för att studera uvealt melanom. Prekliniska djurmodeller som möjliggör noggrann bedömning av denna malignitet är nyckeln till att undersöka nya diagnostiska och terapeutiska strategier för uvealt melanom. Experimentella djurmodeller av okulärt melanom baseras huvudsakligen på inokulering av tumörceller hos möss, råttor och kaniner 5,6. Musmodeller är kostnadseffektiva och används ofta för melanomstudier på grund av deras snabba reproduktionshastighet och höga genomlikhet med människor. Den murina kutana melanomcellinjen B16 används ofta för att inokulera C57BL6-möss och inducera syngena tumörer. När man använder denna modell för att inducera uvealt melanom måste tumörbärande ögon vanligtvis enukleeras 7-14 dagar efter inokulering. Vidare är B16 en mycket invasiv modell. Ögats immunprivilegierade natur stöder metastaser, och metastaser kan vanligtvis detekteras 3-4 veckor efter tumörcellsinokulering. Subkulturer av den ursprungliga B16-linjen visar distinkta metastatiska egenskaper6. Till exempel har Queens melanomlinje en hög metastatisk hastighet 7,8. B16LS9-cellinjen har dendritisk cellmorfologi och härleddes från levermetastaser av C57BL / 6-möss injicerade med föräldrakutan melanomlinje B16F19. När de injicerades i ögats bakre fack visade sig dessa celler bilda intraokulära tumörer, som histologiskt liknar humant uvealt melanom och bildar leverspecifika metastaser i C57BL / 6, men inte Balb / C, möss10,11,12. Genetiskt kännetecknas cellerna av högre uttryck av c-met proto-onkogen, som fungerar som en cellulär receptor för hepatocyttillväxtfaktor13. Däremot metastaserar B16F10, den 10: e passagen av föräldern B16, främst till lungorna när de inokuleras intraokulärt14. Både B16F10 och B16LS9 är pigmenterade12.
Flera viktiga utmaningar begränsar framgången för murina uveala melanommodeller. För det första kan tumörcellreflux leda till extraokulärt eller subkonjunktivalmelanom. För det andra är tumörtillväxt efter intraokulär inokulering av melanomceller ofta mycket varierande, vilket medför svårigheter att utvärdera behandling och framsteg. En annan stor svårighet är den begränsade förmågan att följa tumörtillväxt in vivo. Medan bioluminescerande avbildning, såsom av luciferasuttryckande tumörer, vanligtvis används för att övervaka okulär tumörtillväxt15,16, kan den inte ge information om tumörens intraokulära placering. Därför utförs utvärdering av tumören typiskt efter enukleation av ögat10,17. Detta begränsar kraftigt förmågan att karakterisera tumörprogression och svar på behandlingar i stor utsträckning. Ett annat stort hinder för att studera uvealt melanom är svårigheten att övervaka lesioner hos pigmenterade möss. Nya tillvägagångssätt, som övervinner dessa svårigheter, krävs för att främja forskning av uvealt melanom i djurmodeller.
Optisk koherenstomografi (OCT) ger distinkta möjligheter att avbilda djupt in i de olika delarna av ögat i hög upplösning, vilket är oöverträffat av andra metoder, inklusive ultraljud18,19. OCT-avbildning har använts i djurmodeller för att studera olika ögonsjukdomar20. Nyligen demonstrerades OCT-avbildning som icke-invasivt medel för att utvärdera intraokulär tumörtillväxt21. Protokollet som beskrivs här visar implantation av melanomceller i murin choroid och användningen av OCT för att förutsäga intraokulär tumörlokalisering och storlek vid tidpunkten för cellinokulering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Experimenten i protokollet godkändes av Israels nationella råd för djurförsök och överensstämmer med ARVO-uttalandet för användning av djur i oftalmisk och synforskning. Honmöss av typen C57BL/6 i åldern 8-10 veckor användes i den aktuella studien och utsattes för 12/12 timmar ljus-mörka cykler. Djuren erhölls från en kommersiell källa (se Materialförteckning).
1. Cellodling
- Odla B16LS9-celler i RPMI 1640-medium, kompletterat med 10% fetalt bovint serum, 2 mM L-glutamin, 1 mM natriumpyruvat, 25 mM HEPES, 1% essentiell vitaminblandning, 200 U / ml penicillin och 200 mg / ml streptomycin (se materialtabell), i en fuktad 37 ° C inkubator med 5% CO2.
- Skörda cellerna för injektion vid 70% -80% sammanflöde.
2. Beredning av djur
- Bered en bedövningsblandning av ketamin (75 mg/kg kroppsvikt) och medetomidin (0,5 mg/kg kroppsvikt). Bedöva mössen genom att injicera bedövningsblandningen intraperitonealt i en enda injektion.
- Applicera topisk oftalmisk bedövningsmedel oxybuprokain (0,4%) på båda ögonen.
- Vidga muspupillerna genom topisk applicering av tropikamid (0,5 %).
3. Skapa en konjunktival peritomi och skleral kanal i subkoroidalt utrymme
- Applicera 1,4% hydroxietylcellulosa (se Materialförteckning) som smörjmedel på båda ögonen för att undvika torkning. Applicera 0,5% tropicamid på höger öga.
- Observera musens opererade öga under ett fungerande mikroskop (se materialförteckning). Håll ögonlocken öppna med sterila intraokulära pincett.
- Använd intraokulära pincett, håll den supero-temporala limbala konjunktiva och dra mot en infra-nasal position22. Säkra denna position genom att hålla den under hela proceduren (figur 1A).
- Använd en 30 G nålspets och gör en liten (1-2 mm) konjunktival peritomi i det dorsala temporala området, ungefär 1-2 mm bakom limbus.
OBS: Användning av finare nålar kan förhindra överdriven punktering och möjliggöra bättre precision av tumörplatsen. - Ta bort överskott av Tenons kapsel från peritomiöppningen.
OBS: Tenons kapsel är ett lager av tät bindväv som omger ögats glob22. - På denna plats, sätt in nålspetsen för att tränga igenom sclera. Gör en excision för att skapa en kanal i det subkoroidala utrymmet tills den bruna färgen på choroid framträder genom den exponerade vita substansen i sclera (figur 1B).
Figur 1: Inokulering av tumörceller . (A) Den supero-temporala limbala bindhinnan hålls med hjälp av intraokulära pincett och dras mot en infra-nasal position. (B) Spetsen på en 30 G nål sätts in för att tränga igenom sclera, och excision görs för att skapa ett spår in i det subkoroidala utrymmet. (C) En spruta laddad med celler och monterad med en 32 G nål sätts in i spåret och cellerna injiceras. Klicka här för att se en större version av denna figur.
4. Inokulering av melanomceller
- Resuspendera 70 000 B16LS9-celler i 2 μL PBS. Denna mängd uppskattas per öga.
- Fyll cellerna i en steril 10 μL Hamilton-spruta av glas (se Materialförteckning) monterad med en 32 G trubbig nål vriden i 45° vinkel.
- För in den laddade sprutnålen ca 2 mm i spåret som skapades i steg 3.
- Injicera 2 μl cellsuspension.
- Håll nålen på plats efter injektionen i 2-3 sekunder tills all vätska har läkt.
- Ta bort nålen genom att dra ut den försiktigt och långsamt för att undvika läckage från spåret (figur 1C).
ANMÄRKNINGAR: Justering av injektionshastigheten och injektionskraften kan påverka mönstret för tumörutveckling. Det föreslås att dessa parametrar kalibreras av individer som experimenterar för att identifiera rätt kraft och hastighet som tillämpas. Totalt 70 000 celler bestämdes i preliminära experiment. Eftersom det kan finnas variationer i cellodlingstyper eller cellodlingssatser eller mellan musstammar är kalibrering av detta antal nödvändigt.
5. Bedömning av injektionens placering
- Observera det injicerade ögat genom OCT-skanningar omedelbart efter melanomcellinokulering för att identifiera utseendet på näthinneavlossning (RD), näthinneskada och / eller celler vid glaskroppen23.
ANMÄRKNINGAR: Applicera tropicamid, oxybuprokain och etylcellulosa igen vid behov. - Baserat på OCT-skanningarna från steg 5.1 klassificerar du RD-mönstren21 enligt: (1) lokal RD-one-plats för RD; 2) läckage till cellmaterial som observerar glaskroppen i glaskroppen, (3) utökade RD-multipla platser för RD.
- Förutsäga tumörlokaliseringen baserat på: (1) lokala RD-förväntade koroidala tumörer; (2) läckage i glaskroppsförväntade tumörer i glaskroppen; (3) utökade RD-förväntade variabla och dispergerade tumörer (figur 2).
OBS: Endast möss med lokal RD (cirka 50%) förväntas utveckla tumörer som är begränsade till åderhinnan.
6. Förutsäga tumörstorlek baserat på RD-höjd
- Mät höjden på lokal RD i OCT-skanningarna med hjälp av en OCT-segmenterings- / analysprogramvara (se materialförteckning) och klassificera enligt följande grupper: liten = < 300 μm; medium = 300-400 μm; stor = >400 μm.
- Bedöm volymen som tumörerna förväntas nå inom 5 dagar från injektion enligt följande kriterier:
En liten RD-höjd observeras typiskt i små tumörer (tumörvolym från 0,0059 mm 3 till 0,07 mm 3 med en genomsnittlig volym på 0,027 ± 0,005 mm3).
En medium RD-höjd finns i både små och medelstora tumörer (tumörvolym från 0,015 mm 3 till 0,15 mm 3 med en genomsnittlig volym på 0,056 ± 0,016 mm3).
En stor RD-höjd är förknippad med ett brett spektrum av tumörvolymer upp till 0,36 mm3.
OBS: Intervallet av förväntade tumörstorlekar erhölls från tidigare resultat och delades in i tre grupper av små, medelstora och stora tumörer.
7. Postoperativa förfaranden
- Applicera oftalmisk ofloxacin 0,3% lokalt.
- Vänd bedövningen genom att injicera atipamezolhydroklorid (3 mg/kg) subkutant.
- Injicera buprenorfin subkutant (0,05 mg/kg kroppsvikt) två gånger dagligen i 3 dagar för att minska djurens smärta och lidande.
- Vid 5 dagar efter melanomcellinjektion, utvärdera tumörstorlek genom att följa stegen nedan.
- Bedöva mössen enligt beskrivningen i steg 2.1. Applicera tropikamid (0,5%).
- Undersök ögonen genom longitudinella och sagittala OCT-skanningar och använd OCT-segmentering / analysprogramvara för att mäta tumörvolym och lokalisering.
- Beräkna tumörvolymen med formeln24: V = a * b * c * 6 / π (a, b och c = längd, bredd respektive höjd).
- Undersök tumörstorlek var 2-3: e dag som beskrivs i steg 7.4.1-7.4.3.
OBS: Proceduren måste optimeras om du använder olika musstammar eller cellinjer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ögon undersöktes via OCT omedelbart efter injektion av B16LS9-cellerna. Lokal näthinneavlossning observerades efter injektion. Mössen uppvisade tre mönster av RD: fokal (figur 2, övre panel), läckage till glaskroppen (figur 2, mittpanel) och utökad RD (figur 2, nedre panelen). Förlängd RD orsakas sannolikt av skador från injektionen. Det fanns ett samband mellan mönstret av RD omedelbart efter injektion och lokaliseringen av tumörerna 5-7 dagar efter injektionen. Som visas i figur 2 var fokal RD associerad med tumörcelltillväxt som var begränsad till åderhinnan. Observation av celler i glaskroppen efter injektion hos djur som visade fokal RD indikerade emellertid tumörtillväxt i vitrealhålan utöver koroid. Slutligen, när förlängd RD, eller RD på flera ställen, observerades efter injektion, dispergerades tumörer i hela åderhinnan och glaskroppen efter 5 dagar. Tidigare studier visade att karakteriseringen av tumörer med OCT helt korrelerade med den histologiska undersökningen21.
Figur 2: OCT-baserad prediktion av tumörtillväxt efter subkoroidal cellinjektion. Totalt 7 × 104 B16LS9-celler i 2 μL PBS injicerades i musögonens sub-choroidutrymme. Injektionsstället visualiserades genom OCT- och fundusavbildning omedelbart efter cellinjektion (vänster). Streckade linjer anger detektering av fokal RD (överst), cellmaterial vid glaskroppen (mitten) och förlängd RD (botten). Till höger indikerar streckade linjer tumörmassan 5 dagar efter injektionen. Denna siffra är anpassad från Zaks et al.21. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Utbudet av tumörstorlekar inducerade i denna modell kan delas in i små, medelstora och stora (figur 3). Höjden på RD efter injektion var associerad med tumörstorleken 5 dagar efter injektionen, mätt med horisontella och vertikala OCT-skanningar (figur 4). RD-höjderna associerade med tumörstorlekarna visas i tabell 1.
Figur 3: Bestämning av tumörstorlek. Tumörtillväxt utvärderades genom OCT-skanningar (vänster) och realtidskameravy av fundus (höger) 5-7 dagar efter inokulering. Visas är representativa bilder av små, medelstora och stora tumörer. Denna siffra är anpassad från Zaks et al.21. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 4: Klassificering av tumörstorlek baserat på OCT levande avbildning. Tumörer inducerades genom subkoroidal injektion av 7 × 104 B16LS9-celler. Tumörtillväxt utvärderades vid levande OCT-avbildning omedelbart och 5 dagar efter injektion. (A) En representativ OCT-mätning av RD-höjd efter injektion (dag 0, vänster, gul linje indikerar höjd), tumörhöjd och bredd i en horisontell OCT-skanning (dag 5, mellersta, gula linjer indikerar höjd och bredd) och en H&E-färgad ögonsektion (höger). Infälld: fundusbild av RD-området. (B) Utbudet av inducerade tumörstorlekar delades in i tre grupper. Tumörvolymmätningar av möss som presenterade små (S, n = 15), medelstora (M, n = 9) eller stora (L, n = 7) RD omedelbart efter cellinjektion representeras. *p < 0,05. Denna siffra är anpassad från Zaks et al.21. Klicka här för att se en större version av denna figur.
| RD-höjd | Tumörvolym |
| <300 μm (liten) | 0,0059 mm 3 till 0,07 mm 3 (medelvärde 0,027 ± 0,005 mm3) |
| 300-400 μm (medium) | 0,015 mm 3 till 0,15 mm 3 (medelvärde 0,056 ± 0,016 mm3) |
| > 400 μm (stor) | 0,05 mm 3 till 0,36 mm 3 (medelvärde 0,017 ± 0,06 mm3) |
Tabell 1: De associerade RD-höjderna med tumörstorleken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Uvealt melanom är en förödande sjukdom för vilken nya terapeutiska metoder är mycket nödvändiga. Forskning om uvealt melanom och potentiella behandlingar begränsas dock av de tekniska utmaningarna med uvealt melanom djurmodeller 1,25. Okulära tumörer, som induceras genom intraokulär injektion av cancerceller, är mycket varierande i både lokalisering och storlek, troligen på grund av musögats små dimensioner. Sådan variabilitet är ett hinder för den omfattande utvärderingen av tumörprogression. Det experimentella tillvägagångssättet som beskrivs här gör det möjligt att bedöma intraokulär tumörlokalisering och förutsagd storlek omedelbart efter subkoroidal B16LS9 melanomcellinjektion, baserat på levande OCT-avbildning21. Under årens lopp har utvecklingen av levande avbildningstekniker gett fördelar inom cancerforskning genom att tillåta att följa tumörprogression genom experiment, inte bara vid fördefinierade slutpunkter. Sådana metoder inkluderar till exempel bioluminescerande avbildning med hjälp av reporterceller, vilket möjliggör övervakning av placeringen av tumörer och metastaser hos levande djur, inklusive identifiering av okulära tumörer16. En annan sofistikerad metod är fotoakustisk avbildning, som möjliggör högupplöst avbildning av celler och särskiljer melanomceller från friska celler26,27. Den distinkta fördelen med OCT är emellertid förmågan att identifiera tumörernas intraokulära placering och utvärdera deras storlek hos levande djur.
Protokollet som beskrivs här visar intraokulär inokulering av melanomceller genom att bilda en peritomi och ett område i det subkoroidala utrymmet, följt av den mjuka införandet av en trubbig nål till spetsen av kanalen och cellinjektion. Detta eliminerar överdriven punktering och styr placeringen av cellinokulering. Injektionen inducerar retinalavskiljning, vilket återspeglar lokaliseringen och storleken på tumören som kommer att utvecklas. Våra observationer tyder på att tumörer som bildas vid positionen för en lokal RD tenderar att vara fokala, och deras storlek motsvarar höjden på RD efter injektion. Däremot resulterar flera RD, eller detekterande celler vid glaskroppen efter injektion, vanligtvis i dispergerade tumörer21.
Det är troligt att fokal RD återspeglar att injektionen komprimerade de flesta celler på en viss plats, vilket möjliggör bildandet av en lokaliserad tumör. Å andra sidan innebär flera RD-platser att injektionen nådde flera platser över näthinnan, vilket ökar sannolikheten för att tumörceller implanterades på många platser och bildade dispergerade tumörer.
Att utvärdera lokalisering och förväntad tumörstorlek tidigt efter injektion är särskilt viktigt vid bedömning av tumörprogressioner, såsom att undersöka effekten av specifika faktorer eller potentiella behandlingar. Tidig bestämning kan möjliggöra inkludering av en homogen studiegrupp, vilket förbättrar modellens reproducerbarhet, vilket förbättrar studiens noggrannhet och sparar värdefull tid och kostnader. Eftersom OCT-avbildning av intraokulära tumörer ger korrekt information om både tumörernas placering och storlek hos levande djur, kan möss övervakas för långsiktiga experiment, till exempel för att utvärdera metastaser. En annan svårighet i musmodeller av melanom är att muspigmentering, såsom hos C57BL / 6-möss, ofta begränsar analysen av pigmenterade tumörer. Därför är en annan fördel med OCT-avbildning att den är oberoende av pigmentering och kan appliceras på pigmenterade möss eller lesioner.
Det måste noteras att olika parametrar, såsom musstammen, cellinjen eller injektionstekniken, kan påverka tumörinitiering och tillväxt. Därför rekommenderas optimering av modellen för specifika stammar eller celler. Det måste också beaktas att sekundär grå starr kan utvecklas över tid1, vilket begränsar förmågan att använda OCT. Även om detta sannolikt inte kommer att inträffa inom den korta tidsram som beskrivs häri, bör man överväga att öka gruppstorleken om man utför längre experiment för att möjliggöra uteslutning av gråstarrögon.
Sammanfattningsvis använder det beskrivna protokollet en gemensam modell av B16LS9-melanom, bedömd genom levande OCT-avbildning, för att utveckla en reproducerbar modell för utvärdering av koroidala tumörer hos levande djur. Detta tillvägagångssätt kan användas för framtida studier som undersöker de underliggande mekanismerna för uvealt melanom, nya experimentella modeller och potentiella nya terapier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Marcovich A.L.: Steba Biotech (P), Yeda Weizmann (P), EyeYon Medical (C, P), Mor Isum (P). c) = konsult, (P) = Patent. Alla andra författare har inga konkurrerande intressen.
Acknowledgments
Denna studie stöddes delvis av bidrag 1304/20 från Israel Science Foundation (ISF), Israel, för Arie Marcovich. Vi tackar Shahar Ish-Shalom och Ady Yosipovich, från Institutionen för patologi, Kaplan Medical Center, Rehovot, Israel, för histologianalys.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10 μL glass syringe (Hamilton Co., Bonaduz, Switzerland) | Hamilton | 721711 | |
| 30 G needles | BD Microbalance | 2025-01 | |
| Atipamezole hydrochloride | Orion Phrma | ||
| B16LS9 cells | from Hans Grossniklaus USA | ||
| Buprenorphine | richter pharma | 102047 | |
| C57BL/6 female mice | Envigo | ||
| Essential vitamin mixture | satorius | 01-025-1A | |
| Fetal bovine serum | rhenium | 10270106 | |
| HEPES | satorius | 03-025-1B | |
| Hydroxyethylcellulose 1.4% eye drops | Fisher Pharmaceutical | 390862 | |
| InSight OCT segmentation software | Phoenix Micron, Inc | ||
| Ketamine | bremer pharma GMBH (medimarket) | 17889 | |
| L-glutamine | satorius | 03-020-1B | |
| Medetomidine | zoetis (vetmarket) | 102532 | |
| Ofloxacin 0.3% eye drops | allergan | E92170 | |
| Optical coherence tomography | Phoenix Micron, Inc | ||
| Oxybuprocaine 0.4% | Fisher Pharmaceutical | 393050 | |
| Penicillin-streptomycin-amphoteracin | satorius | 03-033-1B | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | satorius | 02-023-1a | |
| RPMI cell media | satorius | 01-104-1A | |
| Sodium pyruvate | satorius | 03-042-1B | |
| Surgical microscope | Zeiss | OPMI-6 CFC | |
| Tropicamide 0.5% | Fisher Pharmaceutical | 390723 |
References
- Jager, M. J., et al.
- Bustamante, P., Piquet, L., Landreville, S., Burnier, J. V. Uveal melanoma pathobiology: Metastasis to the liver. Seminars in Cancer Biology. 71, Academic Press. 65-85 (2021).
- Damato, B. Ocular treatment of choroidal melanoma in relation to the prevention of metastatic death-A personal view. Progress in Retinal and Eye Research. 66, 187-199 (2018).
- Jouhi, S., et al. The small fatal choroidal melanoma study. A survey by the European Ophthalmic Oncology Group. American Journal of Ophthalmology. 202, 100-108 (2019).
- Cao, J., Jager, M. J. Animal eye models for uveal melanoma. Ocular Oncology and Pathology. 1 (3), 141-150 (2015).
- Uner, O. E., Gandrakota, N., Azarcon, C. P., Grossniklaus, H. E.
- Yang, H., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. Interferon alpha 2b decreases hepatic micrometastasis in a murine model of ocular melanoma by activation of intrinsic hepatic natural killer cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 45 (7), 2056-2064 (2004).
- Yang, H., Grossniklaus, H. E. Combined immunologic and anti-angiogenic therapy reduces hepatic micrometastases in a murine ocular melanoma model. Current Eye Research. 31 (6), 557-562 (2006).
- Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M.
- Diaz, C. E., Rusciano, D., Dithmar, S., Grossniklaus, H. E. B16LS9 melanoma cells spread to the liver from the murine ocular posterior compartment (PC). Current Eye Research. 18 (2), 125-129 (1999).
- Rusciano, D., Lorenzoni, P., Burger, M. M.
- Ashur-Fabian, O., et al. Tetrac delayed the onset of ocular melanoma in an orthotopic mouse model. Frontiers in Endocrinology. 12, 632335 (2019).
- Elia, G., et al. Mechanisms regulating c-met overexpression in liver-metastatic B16-LS9 melanoma cells. Journal of Cellular Biochemistry. 81 (3), 477-487 (2001).
- Harning, R., Szalay, Z. Ocular metastasis of in vivo and in vitro derived syngeneic murine melanoma. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 28 (9), 1599-1604 (1987).
- Ezra-Elia, R., et al. Can an in vivo imaging system be used to determine localization and biodistribution of AAV5-mediated gene expression following subretinal and intravitreal delivery in mice. Experimental Eye Research. 176, 227-234 (2018).
- Notting, I. C., et al. Whole-body bioluminescent imaging of human uveal melanoma in a new mouse model of local tumor growth and metastasis. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 46 (5), 1581-1587 (2005).
- Yang, H., et al. In-vivo xenograft murine human uveal melanoma model develops hepatic micrometastases. Melanoma Research. 18 (2), 95-103 (2008).
- Murthy, R. K., Haji, S., Sambhav, K., Grover, S., Chalam, K. V. Clinical applications of spectral domain optical coherence tomography in retinal diseases. Biomedical Journal. 39 (2), 107-120 (2016).
- Drexler, W., et al. Ultrahigh-resolution ophthalmic optical coherence tomography. Nature Medicine. 7 (4), 502-507 (2001).
- Ochakovski, G. A., Fischer, M. D. Phenotyping of mouse models with OCT. Methods in Molecular Biology. 1834, 285-291 (2019).
- Zaks, O., et al. In-vivo imaging for assessing tumor growth in mouse models of ocular melanoma. Experimental Eye Research. 204, 108431 (2021).
- Brar, V. S. American Academy of Ophthalmology 2022-2023 BCSC. 2. Fundamentals and principles of ophthalmology. , (2022).
- Duker, J. S., Waheed, N. K., Goldman, D. Handbook of Retinal OCT: Optical Coherence Tomography, 2nd Edition. , Elsevier Health Sciences. (2021).
- Tomayko, M. M., Reynolds, C. P. Determination of subcutaneous tumor size in athymic (nude) mice. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 24 (3), 148-154 (1989).
- Richards, J. R., Yoo, J. H., Shin, D., Odelberg, S. J. Mouse models of uveal melanoma: Strengths, weaknesses, and future directions. Pigment Cell & Melanoma Research. 33 (2), 264 (2020).
- Chen, R., et al. Photoacoustic molecular imaging-escorted adipose photodynamic-browning synergy for fighting obesity with virus-like complexes. Nature Nanotechnology. 16 (4), 455-465 (2021).
- Yu, Q., et al. Label-free visualization of early cancer hepatic micrometastasis and intraoperative image-guided surgery by photoacoustic imaging. Journal of Nuclear Medicine. 61 (7), 1079-1085 (2020).
