Summary
هنا ، نختبر انحلال حبيبات رهوديولا (RG) في المختبر ، ونرسم منحنيات ذوبان الساليدروسيد وحمض الغال وإيثيل غالات في الماء فائق النقاء ، ونلائم المنحنيات مع النماذج الرياضية المختلفة. يوفر هذا البروتوكول معلومات وإرشادات لدراسات التكافؤ الحيوي في الجسم الحي وفي الجسم الحي في المختبر ل RG.
Abstract
تكوين حبيبات رهوديولا الطب التبتي (RG) معقد ، ومن الصعب تحديد الجودة الشاملة ل RG. لذلك ، فإن إنشاء طريقة لتحديد حل RG متعدد المكونات في المختبر له أهمية كبيرة لمراقبة الجودة. تستخدم هذه الدراسة طريقة المجداف الثانية للقاعدة العامة الرابعة 0931 من دستور الأدوية الصيني (إصدار 2020) ، المتوافق مع الجهاز 2 من دستور الأدوية الأمريكي (USP). تم ضبط جهاز الذوبان على سرعة دوران تبلغ 100 دورة في الدقيقة مع ماء فائق النقاء كوسيط ذوبان. تم جمع حجم عينة من 1 مل في كل نقطة زمنية. علاوة على ذلك ، تم تحديد الذوبان التراكمي لحمض الغال والساليدروسيد وحمض الغال الإيثيلي في RG في نقاط زمنية مختلفة بواسطة كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC). أخيرا ، تم رسم منحنيات الذوبان ، وتم تركيب المنحنيات على معادلات GompertzMod و Gompertz و Logistics و Weibull. أظهرت النتائج أن الذوبان التراكمي لحمض الغال في RG كان أكثر من 80٪ عند 1 دقيقة ، وكان الذوبان التراكمي للساليدروسيد وحمض إيثيل الغاليك أكثر من 65٪ عند 5 دقائق ، وانخفض الذوبان التراكمي لكل مكون من مكونات المؤشر بعد 30 دقيقة. أظهر تركيب المنحنى أن معادلة GompertzMod كانت النموذج الأنسب لكل مكون من مكونات مؤشر RG. في الختام ، طريقة اختبار الذوبان الموضحة في هذا البروتوكول بسيطة ودقيقة وموثوقة. يمكن أن يميز سلوك الذوبان لمكونات المؤشر في RG في المختبر ، والذي يوفر مرجعا منهجيا لمراقبة جودة RG وتقييم جودة المركبات العرقية الأخرى.
Introduction
في الصين ، يستمر انتشار أمراض القلب والأوعية الدموية في الارتفاع ، وتحتل معدلات المراضة والوفيات الناجمة عن أمراض القلب والأوعية الدموية المرتبة الأولى بين السكان الصينيين1. الذبحة الصدرية لمرض القلب التاجي ناتجة عن تضيق اللمعية بسبب تصلب الشرايين التاجية ، مما يؤدي إلى عدم كفاية إمدادات الدم التاجية نسبيا ونقص تروية عضلة القلبونقص الأكسجة 2. في السنوات الأخيرة ، تم التعرف على التأثير العلاجي للطب الصيني التقليدي في علاج أمراض القلب التاجية من قبل العديد من الأطباء3.
يلعب الطب الصيني التقليدي دورا مهما في تخفيف الأعراض السريرية وتحسين نوعية حياة المرضى4. يتم استخراج حبيبات رهوديولا (RG) وتكريرها من النبات الطبي لهضبة التبت رهوديولا الوردية L. المكونات الرئيسية ل RG هي ساليدروسيد ، روديوسين ، والفلافونويد 5,6. RG له تأثير مكمل Qi7 وتنشيط وتعزيز الدورة الدموية لتخفيف الألم. سريريا ، يتم استخدامه لعلاج انسداد الصدر الناجم عن نقص Qi وركود الدم ، وأمراض القلب التاجية ، والذبحة الصدرية8. لا يعكس تحديد المحتوى وحده الجودة الجوهرية للأدوية بشكل كامل ، حيث يمكن أن يؤثر كل من التفكك والذوبان في المختبر على التوافر البيولوجي وفعالية الأدوية 9,10. تشمل طرق التفتيش لحل الطب الصيني طريقة السلة الدوارة وطريقة المجداف وطريقة الكوب الصغير. عيب طريقة السلة الدوارة هو أن الجزء الخارجي فقط من السلة الدوارة يتلامس مع وسيط الذوبان أثناء الدوران ، والذي لا يعكس سلوك الذوبان في العالم الحقيقي. يمكن لطريقة المجداف التغلب على النقص أعلاه ، مما يجعلها أكثر ملاءمة من طريقة السلة لبعض مستحضرات الطب الصيني الصلب11. في الوقت الحاضر ، لا يوجد تقرير عن تحليل الذوبان في المختبر ل RG. من أجل التحكم في جودة RG بشكل أكثر شمولا ، تم فحص سلوك الذوبان لمكونات المؤشر الثلاثة (حمض الغال ، الساليدروسيد ، وإيثيل غالات) في RG. توفر هذه الدراسة بيانات لمراقبة جودة RG ومرجع منهجي لتقييم جودة مستحضرات المركبات العرقية الأخرى.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. إعداد الحل
- تحضير محلول مخزون المادة المرجعية: قم بوزن 10.6 مجم من الساليدروسيد و 5.24 مجم من حمض الغاليك و 5.21 مجم من حمض إيثيل غاليك بشكل منفصل على ميزان تحليلي إلكتروني وأضفهم بشكل فردي إلى دورق حجمي سعة 5 مل. ثم أضف الميثانول من فئة HPLC ليذوب ويخفف إلى 5 مل. أخيرا ، رج العبوة جيدا للحصول على محلول مخزون المادة المرجعي بتركيزات كتلة تبلغ 2.120 مجم / مل و 1.048 مجم / مل و 1.042 مجم / مل على التوالي.
ملاحظة: يحتوي محلول مخزون المادة المرجعية على 2.120 مجم / مل ساليدروسيد ، و 1.048 مجم / مل من حمض الغال ، و 1.042 مجم / مل من إيثيل غالات كمحلول مخزون لكل محلول في المنحنى القياسي اللاحق. - تحضير محلول عينة الاختبار. استخرج 2.8 جم من RG (جدول المواد) مع 10 مل من الميثانول من فئة HPLC باستخدام آلة تنظيف بالموجات فوق الصوتية (الطاقة: 200 واط ، التردد: 40 كيلو هرتز) لمدة 30 دقيقة ، ثم قم بترشيحه باستخدام مرشح 0.22 ميكرومتر لاختبار قدرة النظام على التكيف.
- تحضير محلول مرجعي مختلط يحتوي على 0.590 ملغم/مل ساليدروسيد، 2.030 ملغم/مل حمض الغال، و1.930 ملغم/مل من إيثيل غالات.
ملاحظة: يتم إذابة كل معيار (2.950 ملغ من ساليدروسيد ، 10.150 ملغ من حمض الغال ، و 9.650 ملغ من حمض الغال الإيثيل) في دورق حجمي سعة 5 مل في الميثانول من الدرجة HPLC كوسيط ذوبان. - احصل على المحتوى النظري لكل مكون مميز من RG لاستخراج المياه فائقة النقاء.
- ضع 2.8 جم من RG في دورق مخروطي سعة 500 مل ، وأضف 200 مل من الماء عالي النقاء ، واستخلصه بالموجات فوق الصوتية (الطاقة: 200 واط ، التردد: 40 كيلو هرتز) لمدة 60 دقيقة. ثم قم بترشيحه بمرشح 0.22 ميكرومتر.
- حدد محتوى حل الاختبار وفقا للمعادلة الخطية التي تم الحصول عليها في التجربة التالية.
2. حالة الكروماتوغرافيا
- اضبط الظروف الكروماتوغرافية كما هو موضح في الجدول 1 للكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء. للحصول على تفاصيل حول الأداة المستخدمة ، راجع جدول المواد.
3. اختبار قدرة النظام على التكيف
- تحقق من العلاقة الخطية.
- تمييع محاليل المخزون المرجعية لحمض الغال وإيثيل غالات بمقدار 5 و 10 و 25 و 50 و 125 مرة ، ومحاليل المخزون المرجعية للساليدروسيد بمقدار 2 و 4 و 8 و 16 و 32 مرة للحصول على محلول تركيز التدرج لرسم منحنى قياسي.
ملاحظة: اضبط نسبة التخفيف للمنحنى القياسي وفقا للتجربة الأولية لمعالجة العينة. في التجربة الأولية ، تم تخفيف حلول الأسهم للمعايير الثلاثة أولا 5 و 10 و 25 و 50 و 125 مرة ، ثم تم رسم المنحنى القياسي الأول. ومع ذلك ، عندما تم الكشف عن تركيز عينة الاختبار ، وجد أن تركيزات الساليدروسيد لا تقع ضمن النطاق الخطي لهذا المنحنى القياسي ، وبالتالي ، تم تعديل التركيزات لتضمينها في المنحنى. باختصار ، تم استخدام التجارب الأولية المذكورة أعلاه لتحديد تركيزات التخفيف النهائية لعينات الاختبار الثلاثة للدراسات التجريبية اللاحقة.
- تمييع محاليل المخزون المرجعية لحمض الغال وإيثيل غالات بمقدار 5 و 10 و 25 و 50 و 125 مرة ، ومحاليل المخزون المرجعية للساليدروسيد بمقدار 2 و 4 و 8 و 16 و 32 مرة للحصول على محلول تركيز التدرج لرسم منحنى قياسي.
- اختبار الدقة: حقن 10 ميكرولتر من المحلول المرجعي المختلط في نظام HPLC ست مرات يوميا وتشغيل العينات بنفس ظروف HPLC الموضحة في الخطوة 2.1. سجل منطقة الذروة لكل مكون معلم.
- تجارب اختبار الثبات: حقن 10 ميكرولتر من محلول العينة المحضر وتحديد مناطق الذروة في HPLC وفقا للظروف الكروماتوغرافية بعد 0 ساعة و 6 ساعات و 10 ساعات و 12 ساعة و 14 ساعة و 16 ساعة و 18 ساعة و 20 ساعة و 24 ساعة على التوالي.
ملاحظة: يتم تسجيل مناطق الذروة تلقائيا بواسطة نظام HPLC. - اختبار الاستنساخ: خذ ست عينات من نفس الدفعة من RG لإعداد محلول عينة الاختبار وفقا للطريقة الواردة في الخطوة 1.2. حقن 10 ميكرولتر من كل عينة في نظام HPLC. قم بتشغيل العينات كما هو موضح في الخطوة 2.1 وحدد قابلية التكاثر.
ملاحظة: تم تقييم قابلية التكرار من خلال مقارنة فروق التركيز بين العينات الست. - تجربة الاسترداد
- قم بإعداد ستة أجزاء من نفس الدفعة من RG لحل الاختبار. بعد ذلك ، أضف حوالي 50٪ من المادة المرجعية لكل مكون فهرس في حل الاختبار لحساب معدل الاسترداد. قم بتشغيل هذه العينات في نظام HPLC بنفس الشروط الموضحة في الخطوة 2.1.
- احسب معدل الاسترداد.
ملاحظة: معدل الاسترداد = (C - A) / B × 100 ، حيث A هي كمية المكون المراد قياسها في محلول الاختبار ، B هي كمية المادة المرجعية المضافة ، و C هي القيمة المقاسة للمحلول الذي يحتوي على المادة المرجعية وعينة RG. راجع الخطوة 2.1 لمعرفة الظروف الكروماتوغرافية لتنفيذ الخطوات المذكورة أعلاه (أي الخطوات 3.1-3.5).
4. اختبار الذوبان في المختبر
- قم بإجراء اختبار الذوبان باستخدام طريقة مجداف الطريقة الثانية للقاعدة العامة 0931 من دستور الأدوية الصيني (إصدار 2020)12.
ملاحظة: تقنية ومعدات أخذ العينات: يحتوي جهاز إذابة الدواء (جدول المواد) على كوب ذوبان ، مجداف ، نظام للتحكم في درجة الحرارة ، ونظام ضبط السرعة. قبل البدء في تجربة الذوبان ، يتم تسخين الماء إلى درجة حرارة محددة ، ثم يتم ضبط السرعة المقابلة. ابدأ في تسجيل الوقت فورا بعد إضافة RG. - أضف 100 مل من الماء عالي النقاء إلى كوب الذوبان بجهاز إذابة الدواء وحافظ على درجة الحرارة عند 37 درجة مئوية ± 0.5 درجة مئوية. اضبط سرعة الدوران على 100 دورة في الدقيقة.
ملاحظة: يحتوي جهاز الذوبان على جهاز تسخين يسمح بضبط درجة الحرارة داخل النظام. لم يكن هناك فرق كبير في معدل ذوبان الساليدروسيد في الماء ، وعصير المعدة الاصطناعي (16.4 مل من حمض الهيدروكلوريك المخفف [234 مل من حمض الهيدروكلوريك المركز المخفف إلى 1000 مل بالماء] مع حوالي 800 مل من الماء و 10 غرام من البيبسين ، مهتز جيدا ، ومخفف بالماء إلى 1000 مل) ، وعصير الأمعاء الاصطناعي (محلول الفوسفات [درجة الحموضة 6.8] التي تحتوي على التربسين) 13. تم اختيار المياه الأكثر سهولة (فائقة النقاء) كوسيط ذوبان. - أضف 2.8 جم من RG إلى كوب الذوبان وابدأ في تسجيل مدة الذوبان على الفور. اجمع ما مجموعه 1 مل من العينة باستخدام حاقن (انظر جدول المواد) في 1 دقيقة و 5 دقائق و 10 دقائق و 20 دقيقة و 30 دقيقة و 60 دقيقة ، وقم بتكوين الحجم في كوب الذوبان باستخدام وسط الذوبان بنفس درجة الحرارة على الفور.
ملاحظة: لا يمكن لأنبوب أخذ العينات في كوب الذوبان جمع أحجام عينات صغيرة ، لذلك يتم استخدام الحاقن لجمع العينة. يجب جمع العينات بسرعة لتجنب فقدان النقاط الزمنية المحددة للتجميع. - قم بتصفية العينات التي تم جمعها على الفور من خلال غشاء صغير يسهل اختراقه 0.22 ميكرومتر وأخذ المرشح اللاحق. حدد محتوى كل مكون في كل نقطة زمنية بواسطة HPLC (وفقا للخطوة 2.1) واحسب الحل التراكمي.
- لحساب الذوبان التراكمي ، احسب حل كل نقطة زمنية (Xn):
Xn = A / B x 100 ، حيث A هي كمية المكونات المقاسة في كل نقطة زمنية و B هي المحتوى النظري لكل مكون. - ثم احسب الذوبان التراكمي (Y):
Y = X n + (X 1 + ... + X n-1) x V 2 / V 1 ، حيث V1 هو الحجم الكلي لوسط الذوبان و V 2 هو حجم المذاب المضاف بعد كل عينة.
ملاحظة: نظرا لقيم الاستجابة المنخفضة للساليدروسيد وحمض الغال في الكروماتوجرام ، لم يتم رسم الذوبان التراكمي للساليدروسيد والإيثيل غالات عند نقطة زمنية 1 دقيقة في منحنى الذوبان.
- لحساب الذوبان التراكمي ، احسب حل كل نقطة زمنية (Xn):
5. تركيب نموذج الذوبان
- استيراد بيانات الحل التراكمي في كل نقطة زمنية إلى برنامج تحليل البيانات.
- استخدم المكون الإضافي لتحليل إذابة الدواء في برنامج تحليل البيانات لتناسب معادلة GompertzMod ومعادلة Gompertz والمعادلة اللوجستية ومعادلة Weibull14. كلما زادت قيمة R2 ، كان تأثير تركيب المنحنى أفضل.
- ابدأ تشغيل البرنامج ، وحدد نافذة Book1 للدخول إلى نافذة تحرير بيانات الأصل .
- في العمود الأول A (X) - وقت إدخال الاسم الطويل ، حدد الوقت كوقت ، وأدخل كل وقت تحديد الحل. إدخال البيانات في العمود الثاني B (Y) - الاسم الطويل ، وتعريف البيانات على أنها الحل التراكمي ، وإدخال النسبة المئوية للحل التراكمي لكل وقت تحديد الحل.
- بعد إدخال البيانات ، حدد العمود A (X ) و B (Y) ، وحدد المكون الإضافي لتحليل ذوبان الدواء في شريط قائمة البرنامج وانقر فوق Fit Dissolution Data > Concatenate Fit > OK. البرنامج يولد النتائج المناسبة لكل نموذج.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
في هذه الدراسة ، كانت الدقة والاستقرار والتكرار واستعادة عينة RG كلها ضمن النطاق المنهجي المحدد في دستور الأدوية الصيني (المجلد 4 ، 2020) 12 ، مما يشير إلى أن الطريقة كانت ممكنة. بعد تصحيح الأخطاء المتكرر ، تم تحديد أن تدرج الشطف المستخدم في هذه الدراسة كان له دقة جيدة (الشكل 1) لمكونات المؤشر الثلاثة في RG. كان لمكونات المؤشر الثلاثة في RG علاقة خطية جيدة ضمن نطاق تركيز محدد (الجدول 2). أظهرت نتائج اختبار الدقة (الجدول 3) أن الانحراف المعياري النسبي (RSD) لمناطق الذروة من الساليدروسيد وحمض الغال وإيثيل غالات كان 1.95٪ و 2.83٪ و 1.42٪ على التوالي ، مما يشير إلى أن دقة الأداة كانت جيدة. أظهرت نتائج اختبار الثبات (الجدول 4) أن RSD لمناطق ذروة الساليدروسيد وحمض الغال وإيثيل غالات كانت 2.37٪ و 2.47٪ و 2.82٪ على التوالي ، مما يشير إلى أن محلول العينة كان مستقرا خلال 24 ساعة. أظهرت نتائج اختبار التكرار (الجدول 5) أن RSDs لمناطق الذروة من الساليدروسيد وحمض الغال وإيثيل غالات كانت 2.79٪ و 2.67٪ و 1.55٪ على التوالي ، مما يدل على أن تكرار هذه الطريقة كان جيدا. أشارت نتائج تجربة الاسترداد إلى أن متوسط عمليات استرداد الساليدروسيد وحمض الغال وإيثيل غالات كان 99.91٪ و 100.40٪ و 102.80٪ على التوالي (الجدول 6).
كانت تجربة الذوبان في المختبر في هذه الدراسة هي تحديد محتوى ثلاثة مكونات مميزة (ساليدروسيد ، حمض الغال ، وإيثيل غالات) في عينات RG في كل نقطة زمنية بواسطة HPLC ، ثم حساب الذوبان التراكمي. يوضح الشكل 2 منحنيات الذوبان لكل مكون. بعد وضع العينة في كوب الذوبان ، كان الذوبان التراكمي لحمض الغال في RG أكثر من 80٪ بعد 1 دقيقة. كان الذوبان التراكمي للساليدروسيد وحمض إيثيل الغاليك أكثر من 65٪ بعد 5 دقائق ، وهو ما انعكس في البيانات التي تفيد بأن كل مكون من مكونات المؤشر يمكن أن يذوب أكثر من 60٪ بعد 5 دقائق. ومع ذلك ، انخفض الذوبان التراكمي لكل مكون من مكونات المؤشر بعد 30 دقيقة. علاوة على ذلك ، تم تركيب منحنيات الذوبان على معادلة GompertzMod ومعادلة Gompertz والمعادلة اللوجستية ومعادلة Weibull. أظهرت النتائج أن معادلة GompertzMod كانت النموذج الأنسب لمكونات المؤشر الثلاثة (الساليدروسيد وحمض الغال وإيثيل غالات) في RG. يوضح الجدول 7 نتائج تركيب نموذج الذوبان لثلاثة مكونات مؤشر في RG.
الشكل 1: مخططات كروماتوجرام تمثيلية للمكونات الثلاثة المميزة بعد ضبط الشروط الكروماتوغرافية المذكورة في الخطوة 2.1 (ن = 1). أ: المخطط الكروماتوجرافي لمحلول العينة. الذروة 1 هي حمض الغال ، والذروة 2 هي ساليدروسيد ، والذروة 3 هي إيثيل غالات. ب: المخطط الكروماتوجرافي للمحلول المرجعي. الذروة 1 هي حمض الغال ، والذروة 2 هي ساليدروسيد ، والذروة 3 هي إيثيل غالات. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: منحنى انحلال المكونات المميزة (ن = 4). (أ) الذوبان التراكمي لحمض الغال عند 1 دقيقة و 5 دقائق و 10 دقائق و 20 دقيقة و 30 دقيقة و 60 دقيقة بعد تناوله. (ب) الذوبان التراكمي للساليدروسيد في 5 دقائق و 10 دقائق و 20 دقيقة و 30 دقيقة و 60 دقيقة بعد تناوله. (ج) الذوبان التراكمي لإيثيل غالات في 5 دقائق و 10 دقائق و 20 دقيقة و 30 دقيقة و 60 دقيقة بعد تناوله. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| شرط | البارامتر |
| عمود كروماتوغرافي | C18 (4.6 مم × 250 مم، 5 ميكرومتر) |
| المرحلة المتنقلة | الأسيتونيتريل (أ) -0.2٪ حمض الخليك (ب) |
| شطف التدرج | 0-5 دقيقة ، 0٪ -4٪ أ ؛ 5-15 دقيقة ، 4٪ -5٪ أ ؛ 15-20 دقيقة ، 5٪ - 7٪ أ ؛ 20-30 دقيقة ، 7٪ - 14٪ أ ؛ 30-40 دقيقة ، 14٪ - 13٪ أ ؛ 40-45 دقيقة ، 13٪ - 4٪ أ |
| معدل التدفق | 1.0 مل / دقيقة |
| درجة حرارة العمود | 30 درجة مئوية |
| الكشف عن الطول الموجي | 275 نيوتن متر |
| حجم العينة | 10 ميكرولتر |
الجدول 1: الظروف الكروماتوغرافية المحددة في هذه التجربة. يسرد الجدول تفاصيل العمود الكروماتوغرافي ، والطور المتحرك ، وشطف التدرج ، ومعدل التدفق ، ودرجة حرارة العمود ، والطول الموجي للكشف ، وحجم العينة.
| مكونات الفهرس | معادلة خطية | ر2 | نطاق الخطية (ملغم / مل) |
| ساليدروسيد | ص = 2221X - 19.742 | 0.9996 | 0.06625–2.12 |
| حمض الغال | ص = 29497 س - 224 | 0.9997 | 0.008384–1.048 |
| إيثيل غالاتي | ص = 28902X - 86.171 | 0.9999 | 0.008336–1.042 |
الجدول 2: العلاقة الخطية لمكونات المؤشر في RG. كان لمكونات المؤشر الثلاثة في RG علاقة خطية جيدة في نطاق تركيز محدد.
| منطقة الذروة لمكونات المؤشر | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD ٪ |
| ساليدروسيد | 900.6 | 917.4 | 899.8 | 917.4 | 940.1 | 890.5 | 1.95 |
| حمض الغال | 6430.2 | 6544.2 | 6281.2 | 6327.7 | 6142.5 | 6636.9 | 2.83 |
| إيثيل غالاتي | 12748.9 | 12833.1 | 13190.4 | 13152.3 | 13128.3 | 13090.5 | 1.42 |
الجدول 3: نتائج القياس الدقيق. كان RSD لمناطق ذروة الساليدروسيد وحمض الغال وإيثيل غالات 1.95٪ و 2.83٪ و 1.42٪ (ن = 6).
| منطقة الذروة لمكونات المؤشر | 0 ح | 6 ساعات | 12 ساعة | 18 ساعة | 21 ساعة | 24 ساعة | RSD ٪ |
| ساليدروسيد | 486.6 | 509 | 479 | 505.1 | 502.8 | 492 | 2.37 |
| حمض الغال | 3236.5 | 3359.8 | 3152.2 | 3347.6 | 3337 | 3319.9 | 2.47 |
| إيثيل غالاتي | 442 | 413 | 421 | 429 | 443.8 | 436 | 2.82 |
الجدول 4: نتائج اختبار الثبات. كان RSD لمناطق ذروة الساليدروسيد وحمض الغال وإيثيل غالات 2.37٪ و 2.47٪ و 2.82٪ (ن = 6).
| منطقة الذروة لمكونات المؤشر | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD ٪ |
| ساليدروسيد | 1337.3 | 1276.5 | 1283.7 | 1286.8 | 1242.6 | 1237.2 | 2.83 |
| حمض الغال | 8432.1 | 8976.1 | 8792 | 9083.1 | 9040.2 | 8751.4 | 2.74 |
| إيثيل غالاتي | 422.8 | 415.3 | 421.9 | 416.3 | 428.9 | 406.1 | 1.87 |
الجدول 5: نتائج اختبار التكاثر. كان RSD لمناطق ذروة الساليدروسيد وحمض الغال وإيثيل غالات 2.83٪ و 2.74٪ و 1.87٪ (ن = 6).
| المحتوى المعروف (ملغ) | إضافة الكمية (ملغ) | قياس الكمية (ملغ) | حالات الاسترداد (٪) | متوسط حالات الاسترداد (٪) | تحديد وضع اللاجئ (٪) |
| 0.5838 | 0.406 | 0.9783 | 97.18 | 99.91 | 2.70 |
| 0.5743 | 0.406 | 0.9984 | 104.47 | ||
| 0.5751 | 0.406 | 0.9755 | 98.63 | ||
| 0.5764 | 0.406 | 0.9776 | 98.81 | ||
| 0.5906 | 0.406 | 0.991 | 98.6 | ||
| 0.5802 | 0.406 | 0.9934 | 101.77 | ||
| 0.1234 | 0.118 | 0.2424 | 100.87 | 100.4 | 1.67 |
| 0.1214 | 0.118 | 0.2428 | 102.85 | ||
| 0.1216 | 0.118 | 0.2396 | 100 | ||
| 0.1218 | 0.118 | 0.2389 | 99.19 | ||
| 0.1249 | 0.118 | 0.2406 | 98.09 | ||
| 0.1226 | 0.118 | 0.2423 | 101.4 | ||
| 0.0221 | 0.386 | 0.4232 | 103.91 | 103.8 | 2.02 |
| 0.0218 | 0.386 | 0.4115 | 100.97 | ||
| 0.0218 | 0.386 | 0.4176 | 102.55 | ||
| 0.0218 | 0.386 | 0.4337 | 106.7 | ||
| 0.0224 | 0.386 | 0.4302 | 105.65 | ||
| 0.022 | 0.386 | 0.4198 | 103.05 |
الجدول 6: نتائج قياس معدل استرداد العينة. كان RSD لمعدل استرداد الساليدروسيد وحمض الغال وإيثيل غالات 2.70٪ و 1.67٪ و 2.02٪ على التوالي.
| مكونات الفهرس | معادلة الذوبان | ر2 |
| حمض الغال | جومبيرتزمود | 0.4978 |
| جومبيرتز | 0.3740 | |
| السوقي | 0.3739 | |
| ويبول | 0.3739 | |
| ساليدروسيد | جومبيرتزمود | 0.9894 |
| جومبيرتز | 0.9783 | |
| السوقي | 0.9781 | |
| ويبول | 0.9781 | |
| إيثيل غالاتي | جومبيرتزمود | 0.9895 |
| جومبيرتز | 0.9852 | |
| السوقي | 0.9853 | |
| ويبول | 0.9853 |
الجدول 7: نتائج تركيب المنحنى لنموذج الذوبان لثلاثة مكونات مؤشر في المياه فائقة النقاء. كانت النتائج المناسبة لكل مكون من مكونات مؤشر RG هي الأفضل مع معادلة GompertzMod.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
اختبار الذوبان هو طريقة مثالية في المختبر لمحاكاة تفكك وانحلال المستحضرات الفموية الصلبة في الجهاز الهضمي15. إنه مؤشر مهم لتقييم ومراقبة جودة المستحضرات الفموية الصلبة. لذلك ، يلعب اختبار الذوبان دورا أساسيا في تطوير المستحضرات الفموية للأدوية الصلبة16. على وجه الخصوص ، مع تطور تكنولوجيا مراقبة الجودة في الطب الصيني التقليدي (TCM) ، تم تطبيق تحديد الذوبان تدريجيا على دراسات فحص مستحضرات مركب الطب الصيني والعرقي17,18.
حاليا ، يعتمد تحديد حل الطب الصيني التقليدي والطب العرقي في المختبر بشكل أساسي على اكتشاف مكون مؤشر واحد. ومع ذلك ، فإن التحضير الصلب للطب الصيني التقليدي والطب العرقي أمر معقد ، ويتأثر انحلالهما بالعديد من العوامل (على سبيل المثال ، درجة الحرارة ، ووسط الذوبان ، وما إلى ذلك) وتركيبها الكيميائي المعقد19,20. لذلك ، يمكن أن يعكس اكتشاف المكونات متعددة المؤشرات بشكل أفضل التأثير المتبادل واختلاف الذوبان للمكونات المختلفة. في هذا البحث ، تم قياس اختبار الذوبان في المختبر لمكونات المؤشر الثلاثة (حمض الغال ، والساليدروسيد ، وإيثيل غالات) في RG ، وتم رسم منحنيات الذوبان لهذه المكونات المميزة الثلاثة ، والتي وفرت مرجعا لمراقبة جودة RG.
أثناء التجربة ، يجب ملاحظة النقطتين التاليتين بشكل خاص. أولا ، عند أخذ العينات لاختبار الذوبان وفقا لدستور الأدوية الصيني 2020 الإصدار12 ، يجب تجديد حجم متساو من وسط الذوبان عند درجة حرارة 37 درجة مئوية ± 0.5 درجة مئوية فور جمع العينات ، وهي الخطوة الرئيسية في العملية التجريبية. ثانيا ، يجب جمع العينات من منطقة في منتصف الطريق بين الجزء العلوي من الشفرة وسطح وسط الذوبان ، ~ 10 مم من الجدار الداخلي لكوب الذوبان. وذلك لأن هناك تدرج تركيز من بداية انحلال الدواء إلى وقت الذوبان الكامل. يتناسب تدرج التركيز عكسيا مع سرعة التقليب ، وبالتالي يكون تركيز الدواء المذاب أعلى بالقرب من الدواء غير المذاب وأدنى مستوى حيث يكون التقليب ضعيفا. لذلك ، يجب تجنب أخذ العينات عند هذين النقيضين21.
على الرغم من أن الكشف عن المكونات متعددة المؤشرات يمكن أن يعكس بشكل أفضل تباين ذوبان المكونات المختلفة للتركيبات المركبة للطب الصيني التقليدي / الطب العرقي مقارنة باكتشاف المكونات أحادية المؤشر ، إلا أن له بعض القيود. هناك احتمال حدوث خطأ بشري عند استخدام حقنة لجمع العينات. يمكن تحسين دقة ودقة القياس إذا كان من الممكن تنفيذ قياسات انحلال الدواء التلقائي22.
باختصار ، لقد أنشأنا طريقة حل في المختبر لتحديد المكونات متعددة المؤشرات في RG ، والتي توفر أساسا لمزيد من الدراسات ل RG. يمكن أن توفر هذه التجربة معلومات وإرشادات لدراسات التكافؤ الحيوي في الجسم الحي ودراسات الارتباط في المختبر في الجسم الحي للأدوية العرقية الأخرى23.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
Acknowledgments
تم تمويل هذا العمل من قبل البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2017YFC1703904) ، والجامعة (جامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي) - مشروع تعاون (شركة التبت رهوديولا الدوائية القابضة المحدودة) (1052022040101) ؛ المشروع الإقليمي للابتكار والتعاون التابع لإدارة العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة سيتشوان (2020YFQ0032)؛ وبرنامج البحث والتطوير والتحول الرئيسي لإدارة العلوم والتكنولوجيا في مقاطعة تشينغهاي (2020-SF-C33).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chromatographic column | ZORBAX Eclipse | XDB-C18 | 4.6 mm x 250 mm, 5 µm |
| Drug dissolution tester | Shanghai Huanghai Pharmaceutical Inspection Instrument Co., Ltd. | RCZ-6B3 | |
| Electronic analytical balance | Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd. | FA1004 | |
| Ethyl gallate (HPLC, ≥98%) | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. | DSTDM006301 | |
| Function drawing software | OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA | 2022 | |
| Gallic acid (HPLC, ≥98%) | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. | DSTDM000802 | |
| High performance liquid chromatography | Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. | Agilent 1260 Infinity  |
|
| HPLC grade methanol | Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd. | 216565 | |
| Injector | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instrument Co., Ltd. | 0.7 (22 G) | |
| Millipore filter | Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd | φ13 0.22 Nylon66 | |
| Rhodiola granules | Tibet Nodikang Pharmaceutical Co., Ltd. | 210501 | |
| Salidroside (HPLC, ≥98%) | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. | DST200425-037 | |
| Ultra pure water systemic | Merck Millipore Ltd. | Milli-Q | |
| Ultrasonic cleansing machine | Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd | SB-8200 DTS |
References
- Smith, S. C., Zheng, Z. J. The impending cardiovascular pandemic in China. Circulation Cardiovascular Quality and Outcomes. 3 (3), 226-227 (2010).
- Wang, D., Wang, P., Zhang, R., Xi, X. Efficacy and safety of Xuefu Zhuyu decoction combined with Western medicine for angina pectoris in coronary heart disease: A protocol for systematic review and meta-analysis. Medicine. 99 (50), 23195 (2020).
- Yang, X., et al. The role of traditional Chinese medicine in the regulation of stress in treating coronary heart disease. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2019, 3231424 (2019).
- Yang, J., Tian, S., Zhao, J., Zhang, W. Exploring the mechanism of TCM formulae in the treatment of different types of coronary heart disease by network pharmacology and machining learning. Pharmacological Research. 159, 105034 (2020).
- Pu, W. L., et al. Anti-inflammatory effects of Rhodiola rosea L.: A review. Biomedicine & Pharmacotherapy. 121, 109552 (2020).
- Tao, H., et al. Rhodiola species: A comprehensive review of traditional use, phytochemistry, pharmacology, toxicity, and clinical study. Medicinal Research Reviews. 39 (5), 1779-1850 (2019).
- Li, M., et al. Exploring the biochemical basis of the meridian tropism theory for the qi-invigorating traditional Chinese medicine herb Panax ginseng. Journal of Evidence-Based Integrative Medicine. 26, 2515690 (2021).
- Pang, Y., Liang, J. Q. Effect of Nordicam on hemodynamics in rats with myocardial ischemia-reperfusion injury. Journal of Chinese Medicinal Materials. 36 (2), 276-279 (2013).
- Nickerson, B., Kong, A., Gerst, P., Kao, S. Correlation of dissolution and disintegration results for an immediate-release tablet. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 150, 333-340 (2018).
- Kambayashi, A., Yomota, C. Exploring clinically relevant dissolution specifications for oral solid dosage forms of weak acid drugs using an in silico modeling and simulation approach. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 159, 105728 (2021).
- Meng, S., Jiang, T. Y., Bu, C. J., Liu, J. Q. Research progress on the dissolution of traditional Chinese medicine preparations. Chinese Journal of Clinical Rational Drug Use. 8 (32), 180-181 (2015).
- Chinese Pharmacopoeia Committee. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. 4, Chinese Medical Science and Technology Press. (2020).
- Lin, J. Z. Evaluation on Pre-Preparation of Rhodiola Extract. , Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. (2013).
- Zhou, Y. B., et al. Calculation of drug solubility Weibull distribution parameters by Origin software. Herald of Medicine. 30 (06), 721-723 (2011).
- Hu, C. Q., Pan, R. X. Progress in evaluation/prediction of bioequivalence of solid oral preparations by dissolution test. Chinese Journal of New Drugs. 23 (01), 44-51 (2014).
- Zhang, H., Yu, L. X. Dissolution testing for solid oral drug products: Theoretical considerations. American Pharmaceutical Review. 7 (5), 26-30 (2004).
- Ren, J. L., et al. Analytical strategies for the discovery and validation of quality-markers of traditional Chinese medicine. Phytomedicine. 67, 153165 (2020).
- Li, H., et al. Establishment of modified biopharmaceutics classification system absorption model for oral Traditional Chinese Medicine (Sanye Tablet). Journal of Ethnopharmacology. 244, 112148 (2019).
- Song, X. Y., Li, Y. D., Shi, Y. P., Jin, L., Chen, J. Quality control of traditional Chinese medicines: a review. Chinese Journal of Natural Medicines. 11 (6), 596-607 (2013).
- Wu, X., et al. Quality markers based on biological activity: A new strategy for the quality control of traditional Chinese medicine. Phytomedicine. 44, 103-108 (2018).
- Wei, N. -N., Wang, X., Su, M.
- Chi, Z., Azhar, I., Khan, H., Yang, L., Feng, Y. Automatic dissolution testing with high-temporal resolution for both immediate-release and fixed-combination drug tablets. Scientific Reports. 9 (1), 17114 (2019).
- Haidar, S. H., et al. Bioequivalence approaches for highly variable drugs and drug products. Pharmaceutical Research. 25 (1), 237-241 (2008).
