Summary
Aquí, probamos la disolución de gránulos de Rhodiola (RG) in vitro, dibujamos curvas de disolución de salidroside, ácido gálico y galato de etilo en agua ultrapura, y ajustamos las curvas a diferentes modelos matemáticos. Este protocolo proporciona información y orientación para la bioequivalencia in vivo y los estudios de correlación in vivo-in vitro de RG.
Abstract
La composición de la medicina tibetana Rhodiola granules (RG) es compleja, y la calidad general de RG es difícil de determinar. Por lo tanto, establecer un método para determinar la disolución in vitro multicomponente de RG es de gran importancia para el control de calidad. Este estudio utiliza el segundo método de remo de la cuarta regla general 0931 de la Farmacopea China (edición 2020), compatible con el aparato 2 de la Farmacopea de los Estados Unidos (USP). El aparato de disolución se ajustó a una velocidad de rotación de 100 rpm con agua ultrapura como medio de disolución. Se recogió un volumen de muestra de 1 ml en cada punto temporal. Además, la disolución acumulativa de ácido gálico, salidrosido y ácido gálico etílico en RG en diferentes puntos de tiempo se determinó mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). Finalmente, se dibujaron las curvas de disolución y las curvas se ajustaron a las ecuaciones de GompertzMod, Gompertz, Logistic y Weibull. Los resultados mostraron que la disolución acumulada del ácido gálico en RG fue superior al 80% a 1 min, la disolución acumulada de salidroside y ácido etil gálico fue superior al 65% a los 5 min, y la disolución acumulada de cada componente del índice disminuyó después de 30 min. El ajuste de curva demostró que la ecuación de GompertzMod era el modelo de mejor ajuste para cada componente de índice de RG. En conclusión, el método de prueba de disolución descrito en este protocolo es simple, preciso y confiable. Se puede caracterizar el comportamiento de disolución de los componentes del índice en RG in vitro, lo que proporciona una referencia metodológica para el control de calidad de RG y la evaluación de la calidad de otros compuestos étnicos.
Introduction
En China, la prevalencia de enfermedades cardiovasculares sigue aumentando, y las tasas de morbilidad y mortalidad de las enfermedades cardiovasculares ocupan el primer lugar entre los residentes chinos1. La angina de pecho de la enfermedad coronaria es causada por estenosis luminal debido a aterosclerosis coronaria, que conduce a un suministro de sangre coronaria relativamente insuficiente e isquemia miocárdica e hipoxia2. En los últimos años, el efecto curativo de la medicina tradicional china en el tratamiento de la enfermedad coronaria ha sido reconocido por muchos médicos3.
La medicina tradicional china juega un papel importante en el alivio de los síntomas clínicos y la mejora de la calidad de vida de los pacientes4. Los gránulos de Rhodiola (RG) se extraen y refinan de la planta medicinal de la meseta tibetana Rhodiola rosea L. Los principales componentes de RG son salidroside, rhodiosin, y flavonoides 5,6. RG tiene el efecto de complementar Qi7 y activar y promover la circulación sanguínea para aliviar el dolor. Clínicamente, se utiliza para tratar obstrucciones torácicas causadas por deficiencia de Qi y estasis sanguínea, enfermedad coronaria, angina de pecho8. La determinación del contenido por sí sola no refleja completamente la calidad intrínseca de los medicamentos, ya que tanto la desintegración como la disolución in vitro pueden afectar la biodisponibilidad y eficacia de los medicamentos 9,10. Los métodos de inspección para la disolución de la medicina china incluyen el método de la cesta giratoria, el método de la paleta y el método de la taza pequeña. La desventaja del método de la cesta giratoria es que solo la parte exterior de la cesta giratoria entra en contacto con el medio de disolución durante la rotación, lo que no refleja el comportamiento de disolución del mundo real. El método del remo puede superar las deficiencias anteriores, lo que lo hace más adecuado que el método de la canasta para algunas preparaciones sólidas de medicina china11. En la actualidad, no hay ningún informe sobre el análisis de disolución in vitro de RG. Con el fin de controlar la calidad de RG de manera más integral, se investigó el comportamiento de disolución de los tres componentes del índice (ácido gálico, salidroside y galato de etilo) en RG. Este estudio proporciona datos para el control de calidad de RG y una referencia metodológica para la evaluación de la calidad de otras preparaciones de compuestos étnicos.
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Protocol
1. Preparación de la solución
- Preparar la solución madre de la sustancia de referencia: Pesar 10,6 mg de salidroside, 5,24 mg de ácido gálico y 5,21 mg de ácido etílico gálico por separado en una balanza analítica electrónica y añadirlos individualmente en un matraz aforado de 5 ml. Luego, agregue metanol de grado HPLC para disolver y diluir a 5 ml. Finalmente, agitar bien para obtener la solución madre de la sustancia de referencia con concentraciones másicas de 2,120 mg/ml, 1,048 mg/ml y 1,042 mg/ml, respectivamente.
NOTA: La solución madre de la sustancia de referencia contiene 2,120 mg/ml de salidroside, 1,048 mg/ml de ácido gálico y 1,042 mg/ml de galato de etilo como solución madre de cada solución en la curva patrón siguiente. - Prepare la solución de muestra de prueba. Extraiga 2,8 g de RG (Tabla de materiales) con 10 ml de metanol de grado HPLC utilizando una máquina de limpieza ultrasónica (potencia: 200 W, frecuencia: 40 kHz) durante 30 min, y luego filtre con un filtro de 0,22 μm para la prueba de adaptabilidad del sistema.
- Prepare una solución mixta de referencia que contenga 0,590 mg/ml de salidroside, 2,030 mg/ml de ácido gálico y 1,930 mg/ml de galato de etilo.
NOTA: Cada patrón (2,950 mg de salidroside, 10,150 mg de ácido gálico y 9,650 mg de ácido gálico etílico) se disuelve en un matraz aforado de 5 ml en metanol de grado HPLC como medio de disolución. - Obtener el contenido teórico de cada componente característico de RG para la extracción de agua ultrapura.
- Introducir 2,8 g de RG en un matraz cónico de 500 ml, añadir 200 ml de agua ultrapura y extraer por ultrasonidos (potencia: 200 W, frecuencia: 40 kHz) durante 60 min. Luego, fílvelo con un filtro de 0.22 μm.
- Determine el contenido de la solución de prueba de acuerdo con la ecuación lineal obtenida en el siguiente experimento.
2. Estado cromatográfico
- Establezca las condiciones cromatográficas como se muestra en la Tabla 1 para la cromatografía líquida de alta resolución. Para obtener detalles sobre el instrumento utilizado, consulte la Tabla de materiales.
3. Prueba de adaptabilidad del sistema
- Investiga la relación lineal.
- Diluir las soluciones madre de referencia de ácido gálico y galato de etilo en 5, 10, 25, 50 y 125 veces, y las soluciones madre de referencia de salidroside en 2, 4, 8, 16 y 32 veces para obtener la solución de concentración de gradiente para dibujar una curva estándar.
NOTA: Ajuste la relación de dilución de la curva estándar de acuerdo con el experimento preliminar del tratamiento de la muestra. En el experimento preliminar, las soluciones madre de los tres patrones se diluyeron primero 5, 10, 25, 50 y 125 veces, y luego se trazó la primera curva estándar. Sin embargo, cuando se detectó la concentración de la muestra problema, se encontró que las concentraciones de salidroside no caían dentro del rango lineal de esta curva estándar y, por lo tanto, las concentraciones se ajustaron para incluirlas en la curva. En resumen, los experimentos preliminares anteriores se utilizaron para determinar las concentraciones finales de dilución de las tres muestras de prueba para estudios experimentales posteriores.
- Diluir las soluciones madre de referencia de ácido gálico y galato de etilo en 5, 10, 25, 50 y 125 veces, y las soluciones madre de referencia de salidroside en 2, 4, 8, 16 y 32 veces para obtener la solución de concentración de gradiente para dibujar una curva estándar.
- Pruebas de precisión: Inyecte 10 μL de la solución de referencia mezclada en el sistema de HPLC seis veces al día y ejecute las muestras con las mismas condiciones de HPLC descritas en el paso 2.1. Registre el área máxima de cada componente de entidad.
- Experimentos de pruebas de estabilidad: Inyectar 10 μL de la solución de muestra preparada y determinar las áreas pico de la HPLC de acuerdo con las condiciones cromatográficas después de 0 h, 6 h, 10 h, 12 h, 14 h, 16 h, 18 h, 20 h y 24 h, respectivamente.
NOTA: Las áreas pico son registradas automáticamente por el sistema HPLC. - Prueba de reproducibilidad: Tomar seis muestras del mismo lote de RG para preparar la solución de muestra de ensayo según el método del paso 1.2. Inyecte 10 μL de cada muestra en el sistema de HPLC. Ejecute los ejemplos como se describe en el paso 2.1 y determine la reproducibilidad.
NOTA: La repetibilidad se evaluó comparando las diferencias de concentración entre las seis muestras. - Experimento de recuperación
- Prepare seis porciones del mismo lote de RG para la solución de prueba. Luego, agregue aproximadamente el 50% de la sustancia de referencia de cada componente del índice en la solución de prueba para calcular la tasa de recuperación. Ejecute estos ejemplos en el sistema HPLC con las mismas condiciones descritas en el paso 2.1.
- Calcule la tasa de recuperación.
NOTA: Tasa de recuperación = (C - A) / B x 100, donde A es la cantidad de componente que debe medirse en la solución de ensayo, B es la cantidad de sustancia de referencia añadida y C es el valor medido de la solución que contiene la sustancia de referencia y la muestra RG. Consulte el paso 2.1 para conocer las condiciones cromatográficas para realizar los pasos anteriores (es decir, los pasos 3.1-3.5).
4. Ensayo de disolución in vitro
- Realizar la prueba de disolución utilizando el método de paleta del segundo método de la regla general 0931 de la Farmacopea China (edición 2020)12.
NOTA: Técnica y equipo de muestreo: El aparato de disolución de fármacos (Tabla de materiales) tiene una copa de disolución, una paleta, un sistema de control de temperatura y un sistema de ajuste de velocidad. Antes de comenzar el experimento de disolución, el agua se precalienta a una temperatura establecida y luego se establece la velocidad correspondiente. Comience a registrar el tiempo inmediatamente después de agregar RG. - Añadir 100 ml de agua ultrapura en el vaso de disolución del aparato de disolución del fármaco y mantener la temperatura a 37 °C ± 0,5 °C. Ajuste la velocidad de rotación a 100 rpm.
NOTA: El aparato de disolución tiene un dispositivo de calentamiento que permite ajustar la temperatura dentro del sistema. No hubo diferencia significativa en la velocidad de disolución de salidroside en agua, jugo gástrico artificial (16,4 mL de ácido clorhídrico diluido [234 mL de ácido clorhídrico concentrado diluido a 1000 mL con agua] con aproximadamente 800 mL de agua y 10 g de pepsina, bien agitada, y diluida con agua a 1.000 mL), y jugo intestinal artificial (tampón fosfato [pH 6,8] que contiene tripsina)13. El agua más fácilmente disponible (ultrapura) fue seleccionada como medio de disolución. - Agregue 2.8 g de RG en una taza de disolución y comience a registrar la duración de la disolución inmediatamente. Recoja un total de 1 ml de la muestra con un inyector (consulte la Tabla de materiales) a 1 min, 5 min, 10 min, 20 min, 30 min y 60 min, y enrase el volumen en la taza de disolución con el medio de disolución a la misma temperatura inmediatamente.
NOTA: El tubo de muestreo en la copa de disolución no puede recoger pequeños volúmenes de muestra, por lo que el inyector se utiliza para recoger la muestra. Las muestras deben recogerse rápidamente para evitar perder puntos de tiempo de recolección especificados. - Filtrar inmediatamente las muestras recogidas a través de una membrana microporosa de 0,22 μm y tomar el filtrado posterior. Determine el contenido de cada componente en cada punto de tiempo mediante HPLC (según el paso 2.1) y calcule la disolución acumulativa.
- Para calcular la disolución acumulativa, calcule la disolución de cada punto de tiempo (Xn):
Xn = A / B x 100, donde A es la cantidad de componentes medida en cada punto de tiempo y B es el contenido teórico de cada componente. - Luego, calcule la disolución acumulativa (Y):
Y = X n + (X 1 + ... + X n-1) x V 2 / V 1, donde V1 es el volumen total del medio de disolución y V 2 es el volumen de soluto agregado después de cada muestreo.
NOTA: Debido a los bajos valores de respuesta de salidroside y ácido gálico en el cromatograma, la disolución acumulada de salidroside y galato de etilo en el punto de tiempo de 1 min no se trazó en la curva de disolución.
- Para calcular la disolución acumulativa, calcule la disolución de cada punto de tiempo (Xn):
5. Ajuste del modelo de disolución
- Importe los datos de disolución acumulativos en cada punto de tiempo en el software de análisis de datos.
- Utilice el complemento de análisis de disolución de fármacos en el software de análisis de datos para ajustarse a la ecuación de GompertzMod, la ecuación de Gompertz, la ecuación logística y la ecuación de Weibull14. Cuanto mayor sea el valor de R2, mejor será el efecto de ajuste de la curva.
- Inicie el software, seleccione la ventana Book1 para ingresar a la ventana Edición de datos de origen .
- En la primera columna A(X)-Tiempo de entrada de nombre largo, defina Tiempo como tiempo e ingrese cada tiempo de determinación de disolución. Datos de entrada en la segunda columna B(Y)-Nombre largo, defina Datos como la disolución acumulativa, introduzca el porcentaje de disolución acumulativa de cada tiempo de determinación de disolución.
- Después de la entrada de datos, seleccione la columna A (X) y B (Y), seleccione el complemento Análisis de disolución de medicamentos en la barra de menú del software y haga clic en Ajustar datos de disolución > Concatenar ajuste > Aceptar. El software genera los resultados de ajuste de cada modelo.
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Representative Results
En este estudio, la precisión, estabilidad, repetibilidad y recuperación de la muestra de RG estaban dentro del rango metodológico especificado en la Farmacopea China (Volumen 4, 2020)12, lo que indica que el método era factible. Después de repetidas depuraciones, se determinó que el gradiente de elución utilizado en este estudio tenía buena resolución (Figura 1) para los tres componentes del índice en RG. Los tres componentes índice en RG tuvieron una buena relación lineal dentro de un rango de concentración específico (Tabla 2). Los resultados de las pruebas de precisión (Tabla 3) mostraron que la desviación estándar relativa (DSR) de las áreas pico de salidroside, ácido gálico y galato de etilo fueron 1,95%, 2,83% y 1,42%, respectivamente, lo que indica que la precisión del instrumento fue buena. Los resultados de la prueba de estabilidad (Tabla 4) mostraron que la DSR de las áreas pico de salidroside, ácido gálico y galato de etilo fueron 2,37%, 2,47% y 2,82%, respectivamente, lo que sugiere que la solución de muestra fue estable dentro de las 24 h. Los resultados de la prueba de repetibilidad (Tabla 5) mostraron que las DSR de las áreas pico de salidroside, ácido gálico y galato de etilo fueron 2.79%, 2.67% y 1.55%, respectivamente, mostrando que la repetibilidad de este método fue buena. Los resultados del experimento de recuperación indicaron que las recuperaciones promedio de salidroside, ácido gálico y galato de etilo fueron 99.91%, 100.40% y 102.80%, respectivamente (Tabla 6).
El experimento de disolución in vitro en este estudio consistió en determinar el contenido de tres componentes característicos (salidroside, ácido gálico y galato de etilo) en muestras de RG en cada punto de tiempo por HPLC, y luego calcular la disolución acumulativa. Las curvas de disolución de cada componente se muestran en la Figura 2. Después de colocar la muestra en la copa de disolución, la disolución acumulada de ácido gálico en RG fue superior al 80% después de 1 minuto. La disolución acumulada de salidroside y ácido gálico etílico fue superior al 65% después de 5 min, lo que se reflejó en los datos de que cada componente del índice podía disolverse más del 60% después de 5 min. Sin embargo, la disolución acumulada de cada componente del índice disminuyó después de 30 minutos. Además, las curvas de disolución se ajustaron a la ecuación de GompertzMod, la ecuación de Gompertz, la ecuación logística y la ecuación de Weibull. Los resultados mostraron que la ecuación de GompertzMod fue el modelo más adecuado para los tres componentes del índice (salidroside, ácido gálico y galato de etilo) en RG. Los resultados del ajuste del modelo de disolución de tres componentes índice en RG se muestran en la Tabla 7.
Figura 1: Cromatogramas representativos de los tres componentes característicos después de ajustar las condiciones cromatográficas mencionadas en el paso 2.1 (n = 1). (A) El cromatograma de la solución de muestra. El pico 1 es ácido gálico, el pico 2 es salidroside y el pico 3 es galato de etilo. B) El cromatograma de la solución de referencia. El pico 1 es ácido gálico, el pico 2 es salidroside y el pico 3 es galato de etilo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: Curva de disolución de componentes característicos (n = 4). (A) Disolución acumulativa de ácido gálico a 1 min, 5 min, 10 min, 20 min, 30 min, y 60 min después de la administración. (B) Disolución acumulativa de salidroside a los 5 min, 10 min, 20 min, 30 min, y 60 min después de la administración. (C) Disolución acumulativa de galato de etilo a los 5 min, 10 min, 20 min, 30 min y 60 min después de la administración. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
| Condición | Parámetro |
| Columna cromatográfica | C18 (4,6 mm x 250 mm, 5 μm) |
| Fase móvil | Acetonitrilo (A)-0,2% Ácido acético (B) |
| Elución de gradiente | 0–5min, 0%–4%A; 5–15min, 4%–5%A; 15–20min, 5–7%A; 20–30min, 7–14%A; 30–40min, 14%–13%A; 40–45min, 13%–4%A |
| Gasto | 1,0 ml/min |
| Temperatura de la columna | 30 °C |
| Detección de longitud de onda | 275 nm |
| Volumen de muestra | 10 μL |
Tabla 1: Las condiciones cromatográficas establecidas en este experimento. La tabla enumera los detalles de la columna cromatográfica, la fase móvil, la elución de gradiente, el caudal, la temperatura de la columna, la longitud de onda de detección y el volumen de la muestra.
| Componentes del índice | Ecuación lineal | R2 | Rango de linealidad (mg/ml) |
| Salidroside | Y = 2221X - 19,742 | 0.9996 | 0.06625–2.12 |
| Ácido gálico | Y = 29497X - 224 | 0.9997 | 0.008384–1.048 |
| Galato de etilo | Y = 28902X - 86,171 | 0.9999 | 0.008336–1.042 |
Tabla 2: La relación lineal de los componentes del índice en RG. Los tres componentes del índice en RG tenían una buena relación lineal en un rango de concentración específico.
| Área máxima de los componentes del índice | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD % |
| Salidroside | 900.6 | 917.4 | 899.8 | 917.4 | 940.1 | 890.5 | 1.95 |
| Ácido gálico | 6430.2 | 6544.2 | 6281.2 | 6327.7 | 6142.5 | 6636.9 | 2.83 |
| Galato de etilo | 12748.9 | 12833.1 | 13190.4 | 13152.3 | 13128.3 | 13090.5 | 1.42 |
Tabla 3: Los resultados de la medición de precisión. Las DSR de las áreas máximas de salidroside, ácido gálico y galato de etilo fueron 1.95%, 2.83% y 1.42% (n = 6).
| Área máxima de los componentes del índice | 0 h | 6 h | 12 h | 18 h | 21 h | 24 h | RSD % |
| Salidroside | 486.6 | 509 | 479 | 505.1 | 502.8 | 492 | 2.37 |
| Ácido gálico | 3236.5 | 3359.8 | 3152.2 | 3347.6 | 3337 | 3319.9 | 2.47 |
| Galato de etilo | 442 | 413 | 421 | 429 | 443.8 | 436 | 2.82 |
Tabla 4: Resultados de la prueba de estabilidad. Las DSR de las áreas pico de salidroside, ácido gálico y galato de etilo fueron 2,37%, 2,47% y 2,82% (n = 6).
| Área máxima de los componentes del índice | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD % |
| Salidroside | 1337.3 | 1276.5 | 1283.7 | 1286.8 | 1242.6 | 1237.2 | 2.83 |
| Ácido gálico | 8432.1 | 8976.1 | 8792 | 9083.1 | 9040.2 | 8751.4 | 2.74 |
| Galato de etilo | 422.8 | 415.3 | 421.9 | 416.3 | 428.9 | 406.1 | 1.87 |
Tabla 5: Resultados de la prueba de reproducibilidad. Las DSR de las áreas máximas de salidroside, ácido gálico y galato de etilo fueron 2.83%, 2.74% y 1.87% (n = 6).
| Contenido conocido (mg) | Adición de cantidad (mg) | Cantidad de medición (mg) | Recuperaciones (%) | Recuperaciones medias (%) | DSR (%) |
| 0.5838 | 0.406 | 0.9783 | 97.18 | 99.91 | 2.70 |
| 0.5743 | 0.406 | 0.9984 | 104.47 | ||
| 0.5751 | 0.406 | 0.9755 | 98.63 | ||
| 0.5764 | 0.406 | 0.9776 | 98.81 | ||
| 0.5906 | 0.406 | 0.991 | 98.6 | ||
| 0.5802 | 0.406 | 0.9934 | 101.77 | ||
| 0.1234 | 0.118 | 0.2424 | 100.87 | 100.4 | 1.67 |
| 0.1214 | 0.118 | 0.2428 | 102.85 | ||
| 0.1216 | 0.118 | 0.2396 | 100 | ||
| 0.1218 | 0.118 | 0.2389 | 99.19 | ||
| 0.1249 | 0.118 | 0.2406 | 98.09 | ||
| 0.1226 | 0.118 | 0.2423 | 101.4 | ||
| 0.0221 | 0.386 | 0.4232 | 103.91 | 103.8 | 2.02 |
| 0.0218 | 0.386 | 0.4115 | 100.97 | ||
| 0.0218 | 0.386 | 0.4176 | 102.55 | ||
| 0.0218 | 0.386 | 0.4337 | 106.7 | ||
| 0.0224 | 0.386 | 0.4302 | 105.65 | ||
| 0.022 | 0.386 | 0.4198 | 103.05 |
Tabla 6: Los resultados de la medición de la tasa de recuperación de la muestra. La DSR de la tasa de recuperación de salidroside, ácido gálico y galato de etilo fue de 2,70%, 1,67% y 2,02%, respectivamente.
| Componentes del índice | Ecuación de disolución | R2 |
| Ácido gálico | GompertzMod | 0.4978 |
| Gompertz | 0.3740 | |
| Logístico | 0.3739 | |
| Weibull | 0.3739 | |
| Salidroside | GompertzMod | 0.9894 |
| Gompertz | 0.9783 | |
| Logístico | 0.9781 | |
| Weibull | 0.9781 | |
| Galato de etilo | GompertzMod | 0.9895 |
| Gompertz | 0.9852 | |
| Logístico | 0.9853 | |
| Weibull | 0.9853 |
Tabla 7: Resultados de ajuste de curvas del modelo de disolución de tres componentes índice en agua ultrapura. Los resultados de ajuste de cada componente del índice de RG fueron los mejores con la ecuación de GompertzMod.
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Discussion
La prueba de disolución es un método in vitro ideal para simular la desintegración y disolución de preparaciones orales sólidas en el tracto gastrointestinal15. Es un índice importante para evaluar y controlar la calidad de las preparaciones orales sólidas. Por lo tanto, la prueba de disolución juega un papel esencial en el desarrollo de preparaciones orales de fármacos sólidos16. En particular, con el desarrollo de la tecnología de control de calidad de la medicina tradicional china (MTC), la determinación de la disolución se ha aplicado gradualmente a los estudios de detección de preparaciones compuestas de medicina china y étnica17,18.
Actualmente, la determinación de la disolución de la MTC y la medicina étnica in vitro se basa principalmente en la detección de un único componente índice. Sin embargo, la preparación sólida de la medicina tradicional china y la medicina étnica es compleja, y su disolución se ve afectada por muchos factores (por ejemplo, temperatura, medio de disolución, etc.) y su compleja composición química19,20. Por lo tanto, la detección de componentes multiíndice puede reflejar mejor la influencia mutua y la diferencia de disolución de diferentes componentes. En este trabajo, se midió la prueba de disolución in vitro de los tres componentes índice (ácido gálico, salidroside y galato de etilo) en RG, y se trazaron las curvas de disolución de estos tres componentes característicos, lo que proporcionó una referencia para el control de calidad de RG.
Durante el experimento, los siguientes dos puntos deben tenerse particularmente en cuenta. En primer lugar, al muestrear para la prueba de disolución de acuerdo con la Farmacopea China 2020 edición12, se debe reponer un volumen igual de medio de disolución a una temperatura de 37 °C ± 0,5 °C inmediatamente después de la recolección de la muestra, que es el paso clave en el proceso experimental. En segundo lugar, las muestras deben recogerse de un área a medio camino entre la parte superior de la cuchilla y la superficie del medio de disolución, ~ 10 mm de la pared interna de la copa de disolución. Esto se debe a que hay un gradiente de concentración desde el inicio de la disolución del fármaco hasta el momento de la disolución completa. El gradiente de concentración es inversamente proporcional a la velocidad de agitación, por lo que la concentración del fármaco disuelto es más alta cerca del fármaco no disuelto y la más baja donde la agitación es débil. Por lo tanto, debe evitarse el muestreo en estos dos extremos21.
Aunque la detección de componentes de múltiples índices puede reflejar mejor la variación de disolución de diferentes componentes de las formulaciones compuestas de MTC / medicina étnica en comparación con la detección de componentes de índice único, tiene ciertas limitaciones. Existe la posibilidad de error humano cuando se usa una jeringa para recolectar las muestras. La precisión y exactitud de la medición pueden mejorarse si se pueden implementar mediciones automáticas de disolución de fármacos22.
En resumen, hemos establecido un método de disolución in vitro para determinar componentes multiíndice en RG, que proporciona una base para estudios posteriores de RG. Este experimento puede proporcionar información y orientación para estudios de bioequivalencia in vivo y estudios de correlación in vivo-in vitro de otras medicinas étnicas23.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Este trabajo fue financiado por el Programa Nacional Clave de Investigación y Desarrollo de China (2017YFC1703904), la Universidad (Universidad de Chengdu de TCM) - proyecto de cooperación empresarial (Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co. LTD) (1052022040101); el Proyecto Regional de Innovación y Cooperación del Departamento de Ciencia y Tecnología de la Provincia de Sichuan (2020YFQ0032); y el Programa Clave de Investigación y Desarrollo y Transformación del Departamento de Ciencia y Tecnología de la provincia de Qinghai (2020-SF-C33).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Chromatographic column | ZORBAX Eclipse | XDB-C18 | 4.6 mm x 250 mm, 5 µm |
| Drug dissolution tester | Shanghai Huanghai Pharmaceutical Inspection Instrument Co., Ltd. | RCZ-6B3 | |
| Electronic analytical balance | Shanghai Liangping Instruments Co., Ltd. | FA1004 | |
| Ethyl gallate (HPLC, ≥98%) | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. | DSTDM006301 | |
| Function drawing software | OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA | 2022 | |
| Gallic acid (HPLC, ≥98%) | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. | DSTDM000802 | |
| High performance liquid chromatography | Agilent Technologies Singapore (International) Pte. Ltd. | Agilent 1260 Infinity  |
|
| HPLC grade methanol | Thermo Fisher Scientific (China) Co., Ltd. | 216565 | |
| Injector | Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus & Instrument Co., Ltd. | 0.7 (22 G) | |
| Millipore filter | Tianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd | φ13 0.22 Nylon66 | |
| Rhodiola granules | Tibet Nodikang Pharmaceutical Co., Ltd. | 210501 | |
| Salidroside (HPLC, ≥98%) | Chengdu Desite Biotechnology Co., Ltd. | DST200425-037 | |
| Ultra pure water systemic | Merck Millipore Ltd. | Milli-Q | |
| Ultrasonic cleansing machine | Ningbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., Ltd | SB-8200 DTS |
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