Encyclopedia of Experiments: Biology
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- M9 बफर युक्त ट्यूब में, विकास के वांछित चरण में 150 हर्मेफ्रोडिट कीड़े तक एकत्र करें। M9 बफर के साथ धोने और नमूने को अपकेंद्रित्र करके कीड़े से बैक्टीरिया को हटा दें।
नमूने के नुकसान को रोकने के लिए सुपरनेटरी को हटाते समय ट्यूब को विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे देखें। कीड़े को एम9 बफर की न्यूनतम मात्रा के साथ ग्लास डिश में स्थानांतरित करें। कीड़े को एनेस्थेटाइज करने के लिए लेवांमिसोल जोड़ें।
कीड़ा और फरीनक्स या फोर्जट के सिर का पता लगाएं, जिसमें दो बल्ब के आकार की संरचनाएं होती हैं। फरीनेक्स के पीछे कीड़ा के माध्यम से काटने के लिए दो सुइयों का उपयोग किया जाता है। सुनिश्चित करें कि आप ऊतक को प्रभावित करने से बचने के लिए विच्छेदन को तेजी से पूरा करें।
एक बार क्यूटिकल बाधित होने के बाद कीड़ा के आंतरिक दबाव के कारण दो गोनाड हथियारों को शरीर से बाहर निकाल दिया जाता है या धक्का दे दिया जाता है।
इस उदाहरण में, हम इम्यूनोफ्लोरेसेंस विश्लेषण के लिए वयस्क कीड़े से गोनाड को विच्छेदन करेंगे।
- वांछित विकास के स्तर पर 100 से 150 कीड़े चुनें और उन्हें एम9 बफर के 100 माइक्रोलीटर युक्त 1.5 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में एकत्र करें। इसके बाद, एम9 बफर के 900 अधिक माइक्रोलीटर के साथ माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब भरें और इसे कमरे के तापमान पर 1 मिनट के लिए 1,000 गुना ग्राम पर केंद्रित करें।
एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, धीरे से M9 बफर के 900 माइक्रोलीटर को हटा दें। इसके बाद, अधिकांश संलग्न बैक्टीरिया को हटाने के लिए दो बार धोएं दोहराएं।
इसके बाद, एक चौड़े बोर के साथ 200 माइक्रोलीटर माइक्रोपिपेट टिप का उपयोग करके, M9 बफर के 100 माइक्रोलीटर में कीड़े को एक फ्लैट बॉटम ग्लास वॉच डिश में स्थानांतरित करें। 0.1 मोलर लेविमिसोल के 1 से 3 माइक्रोलीटर को डिश में जोड़ें और इसे धीरे-धीरे घूमता है। अब, प्रत्येक हाथ के लिए एक विच्छेदन उपकरण बनाने के लिए दो सिरिंज में दो 25 गेज सुई संलग्न करें।
एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, प्रत्येक सुई के नीचे और ऊपर प्रत्येक कीड़ा की स्थिति और गति की तरह एक कैंची का उपयोग कर दूसरे pharyngeal बल्ब के पास प्रत्येक कीड़ा पर एक ठीक कटौती करते हैं । लेविसोल के प्रभावी रहने के लिए पांच मिनट के भीतर सभी जानवरों को कम से एक बार काट लें ।
- यह बहुत महत्वपूर्ण है कि पकवान में जानवरों का विच्छेदन पांच मिनट के तहत पूरा किया जाए।
- यदि एक बाहरी गोनाड दिखाई नहीं देता है, तो बस उस जानवर पर छोड़ दें। यहां उचित रूप से निकाले गए गोनाड दिखाई दे रहे हैं।
