Fixação de etanol e coloração DAPI: um método para visualizar o DNA em C. elegans

- Comece com uma gota de solução tampão em uma lâmina de microscópio e transfira os vermes intactos para a gota. Assim que os vermes estiverem no lugar, use um lenço de papel sem fiapos para absorver e remover o tampão. Fixe a amostra banhando os espécimes com etanol a 90% várias vezes, permitindo que evapore após cada aplicação.

Uma vez evaporado o etanol após o enxágue final, adicione uma solução contendo o corante de ácido nucleico, DAPI, à amostra. O DAPI liga-se preferencialmente às bases adenina e timina no sulco menor do DNA. Quando ligado, o complexo DAPI-DNA absorve a luz UV e emite luz azul visível.

Em seguida, adicione um conservante anti-desbotamento para prolongar a vida útil da amostra. Aplique uma lamínula e sele-a na lâmina. Em seguida, use um microscópio fluorescente com um filtro azul para visualizar os corpos DAPI, que, dependendo da célula e de seu status de ciclo, podem representar cromossomos únicos, pares de cromátides irmãs ou núcleos inteiros. Neste experimento, contaremos pares de cromátides irmãs coradas com DAPI em oócitos, para identificar cepas tetraplóides de Caenorhabditis elegans.

- As cepas tetraplóides têm 12 pares de cromossomos, que podem ser va