Colheita de subpopulações leucêmicas: um método para separação espacial de subpopulações de células leucêmicas da co-cultura 2D

- Quando as células leucêmicas são co-cultivadas com células estromais mesenquimais, elas interagem com as células estromais e formam três subpopulações. Células suspensas flutuantes livremente, células brilhantes de fase aderentes à superfície da monocamada mesenquimal e células de fase fraca abaixo da monocamada mesenquimal. Para separar cada subpopulação, pegue uma placa de cultura de tecidos com uma monocamada de células estromais mesenquimais.

Semeie células leucêmicas presentes em meios de cultura específicos do tumor na monocamada e incube a placa pela duração desejada. Em seguida, colete as células tumorais em suspensão, pipetando as células flutuantes em um tubo separado. Agora, adicione o meio fresco à placa e pipete vigorosamente para desalojar as células tumorais brilhantes da superfície da monocamada mesenquimal.

Colete essas células pipetando-as em um tubo separado. Adicione tripsina à placa para remover as células mesenquimais aderentes. Adicione soro fetal bovino, ou FBS, para interromper a ação da tripsina e quebrar os agregados celulares. Agora, colete as células de fase fraca em um tubo. Centrifugue os três tubos contendo diferentes subpopulações celulares indivi