Avaliação das interações bactéria-célula hospedeira usando esferas biomiméticas

Pegue uma placa de vários poços contendo uma cultura de células epiteliais de mamíferos.

Nos poços de teste, adicione um patógeno bacteriano junto com grânulos de polímero acoplados a proteínas de superfície bacteriana.

Nos poços de controle, adicione o patógeno e as esferas sem proteínas de superfície bacteriana. Incubar.

Nos poços de teste, os grânulos imitam a superfície bacteriana e competem com o patógeno pela ligação ao ácido fosfatídico da membrana celular epitelial, reduzindo a fixação bacteriana.

Nos poços de controle, os grânulos não afetam a fixação bacteriana.

Remova a mídia e lave com tampão para eliminar os componentes não ligados.

Incube com um detergente não iônico para lisar as células, liberando bactérias e grânulos ligados à membrana.

Pipetar o lisado para criar uma suspensão homogénea e diluir em série o homogeneizado utilizando tampão.

Transfira as diluições para placas de ágar, incube para permitir a formação de colônias e conte as colônias.

A placa de teste exibe menos colônias do que os controles, indicando interações bactéria-hospedeiro reduzidas.

Prepare o meio de infecção diluindo culturas bacterianas em DMEM incolor sem aditivos.

Pré-aquecido a 37 graus