Microscopia microfluídica de lapso de tempo para estudar a persistência de antibióticos em bactérias
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 5:02 min. • October 30th, 2025
Comece com células bacterianas em crescimento exponencial expressando uma proteína de fusão de ligação ao DNA marcada com fluorescência para visualizar o nucleóide.
Adicione as células às entradas de células de uma placa microfluídica pré-preparada.
Em seguida, introduza meios contendo antibióticos e meios livres de antibióticos em entradas de solução separadas.
Sele a placa, monte-a na platina do microscópio e inicie a imagem de lapso de tempo.
Primeiro, carregue as células na câmara de cultura.
Em seguida, perfunda meios livres de antibióticos na câmara para apoiar o crescimento celular exponencial.
Por fim, introduza o meio contendo antibióticos.
O antibiótico induz quebras de DNA de fita dupla, matando células suscetíveis. Essas células exibem nucleóides compactados e não replicantes com fluorescência estável.
Volte para meios livres de antibióticos para promover a recuperação.
As células persistentes - uma pequena subpopulação que sobrevive ao tratamento com antibióticos - retomam a replicação, alongam e dividem o DNA.
Essa recuperação leva ao aumento da fluorescência nas células persistentes, permitindo que elas sejam visualmente distinguidas das células suscetíveis.
Remova a solução de
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