Name: Geração e Rotulagem de murino derivadas da medula óssea Células Dendríticas com Nanocristais Qdot de Estudos de rastreamento (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Aprenda a gerar e rotular células dendríticas murinas derivadas da medula óssea com nanocristais Qdot para estudos de rastreamento por microscopia de fluorescência. Este método permite visualizar a migração celular in vivo.

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Este trabalho apoiado em parte pelo NIH Grant sob CA137499 R15-01 (FB) e um fundo de arranque da Universidade de Ohio (FB).

1. Dissecção dos fêmures e tíbias de rato e cultura de células da medula óssea <ol><li> Sacrifício 2 camundongos por asfixia CO 2 e dissecar cuidadosamente tíbias e fêmures sem cortar as extremidades dos ossos. </li><li> Limpa os ossos de todos os tecidos anexado usando lenço de papel. Tenha cuidado para não quebrar os ossos. </li><li> Esterilizar os ossos por imersão em etanol 70% por 10 min em uma placa de Petri 35 mm. A partir deste momento, o trabalho dentro de uma capa de biossegurança para evitar a contaminação das culturas de células. </li><li> Recuperar os ossos a partir do etanol e deixe-os secar por 5 min em uma placa de Petri dentro do armário de biossegurança. </li><li> Cortar os fêmures no meio, e da tíbia por sua ponta mais fina. Infundir o interior do osso com 1 ml de meio RPMI (sem soro, mas com antibióticos), utilizando uma seringa estéril sobre uma placa de Petri estéril. </li><li> A suspensão de células são coletadas e lavadas em meio RPMI 2X por 10 min de centrifugação em um tubo de centrífuga de 15 ml a 1.100 RPM em uma centrífuga refrigerada (4 ° C) com um rotor de caçamba móvel. </li><li> Após a última lavagem, ressuspender as células em 2 ml de tampão de lise ACK e incubar por 5 min à temperatura ambiente, a fim de eliminar as células vermelhas do sangue. </li><li> Adicionar 13 ml de RPMI com 10% de FBS, ressuspender e lavar 2X neste meio com as mesmas configurações, conforme descrito em 1.6. </li><li> Contagem de células, ajustar a 2 x 10 5 células / ml com RPMI 10% FBS, e adicionar rm-GM-CSF (20 concentração ng / ml final) 5. </li><li> Adicionar 10 ml dessa suspensão para uma qualidade microbiológica estéril, 10 cm placa de Petri, e cultura em uma incubadora de CO 2 (37 ° C CO, 5% 2). </li><li> Três dias depois, adicionar outra de 10 ml de RPMI 10% FBS com 20 ng / l de rmGM-CSF a cada um dos pratos preparados. </li><li> Três dias depois, 10 ml de suspensão de células são recuperados a partir de cada placa de Petri, centrifugados como em 1.6, ressuspendido em igual volume de RPMI com 10% FBS rmGM-CSF e voltou para a placa de Petri. As células são cultivadas por 2 dias adicionais no 2 CO incubadora. </li></ol> 2. Coleta e rotulagem das DCs <ol><li> Depois de 8 dias em cultura de células frouxamente aderente são recuperados pela lavagem das placas de Petri com meio fresco. Este protocolo torna em torno de 2-4 x10 8 DCs em nossas mãos. As células podem ser analisados ​​para DC fenótipo por citometria de fluxo. </li><li> Células coletadas são então rotulados com o Qtracker Labeling Kit 655 celular seguindo estritamente as instruções do fabricante. </li><li> Temos excelentes resultados rotulagem derivadas da medula óssea de camundongos DCs com Qdots em uma concentração 10 nM. Para conseguir isso, alíquotas de Qtracker Celular componentes Kit Labeling A e B são misturados em volumes iguais, incubadas por 5 min à temperatura ambiente, e imediatamente diluído 1 / 100 em meio fresco com vórtex por 30 s. </li><li> Para manchar 5 x 10 6 DCs, mistura de 5 mL de cada componentes do kit A e B em um tubo eppendorf e incubar por 5 min à temperatura ambiente. Em seguida, adicionar 1 ml de RPMI incubar FBS 10%, e vortex por 30 segundos. </li><li> Adicionar 0,5 ml de suspensão de células contendo 5 6 x10 DCs, e incubar a 37 ° C por 60 min. </li><li> Então, lave as células em RPMI 2X 10% FBS (1.100 RPM). As células podem ser ressuspendido em RPMI para cultura, nem em PBS para injeção em camundongos experimental. </li></ol> 3. Avaliação do DC rotulados <ol><li> Rotulagem célula pode ser avaliada por meio de microscopia de fluorescência. Para conseguir isso, uma gota de suspensão de células é adicionado a uma lâmina de microscópio, coberto com uma lamela de vidro, e avaliada com um microscópio fluorescente tendo em conta que estes têm Qdots de emissão e excitação espectros de 565NM e 405-525nm, respectivamente (Fig. 3 ) </li><li> Neste ponto, as células rotuladas podem ser usadas para injetar animais, ou de maturação pode ser induzida pela incubação destas células por 48 h (37 ° C, 5 CO 2) na presença de LPS (100 ng / ml) e TNF-( 20 ng / ml). Fluorescentes de rotulagem não é afetado por DC maturação (Fig. 4). </li></ol> 4. Resultados representativos: Com isto, descrito como preparar derivadas da medula óssea de camundongos DCs e como rotulou-os com Qdots fluorescente. Fig. 1 resume o procedimento para obter as células, enquanto a fig. 2 mostra o procedimento para classificá-los com Qdots. Como mostrado na figura. 3, quase todas as células são rotulados por este procedimento, e este não é afetada pela DC maturação com fatores inflamatórios (Fig. 4). Fig. 5 mostra que Qdot manchada de DCs (Fig.5a) comportam-se semelhante a células não-manchada quando tratados com um cocktail inflamatórias. Ambas as preparações de células de forma semelhante upregulate expressão de moléculas co-estimulatórias (Fig. 5b) e produzir quantidades semelhantes de IL-6 (Fig. 5c) e óxido nítrico (Fig. 5d) sobre os estímulos de maturação. Isto concorda com a PREVIous dados publicados, indicando que a coloração Qdot não afeta a capacidade de DC para se transformar em células maduras capazes de induzir respostas imunes [6]. Estas células podem ser usadas para injetar animais experimentais. Como mostrado na figura. 6, dois dias após a injeção intravenosa de DCs rotulados em camundongos, que foram capazes de detectar Qdot manchada de células do baço. Este também é de acordo com dados publicados previamente mostrando o uso de nanocristais Qdot para avaliar a migração de DC in vivo [6], não-invasivo de imagens e citometria de fluxo. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura Fluxograma 1. DC de geração a partir de medula óssea. Com isto, descrevem o processo para obter derivadas da medula óssea DC. Ambas as tíbias e fêmures são dissecados e limpa do tecido circundante. Dicas óssea são preservadas e do interior dos ossos são lavados com meio. Depois de eliminar os glóbulos vermelhos, células da medula óssea são cultivados por 8 dias na presença de GM-CSF para diferenciá-los em DCs. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura Fluxograma 2. Do procedimento de rotulagem. Alíquotas iguais de Qtracker Celular componentes Kit Labeling A e B são misturados em um tubo eppendorf. As células dendríticas são recolhidos a partir de 8 dias culturas de medula óssea com a GM-CSF e misturado com o corante de rotulagem para os 60 minutos a 37C. Em seguida, as células são lavadas na mídia para eliminar as partículas rotulagem excesso. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Microfotografia fluorescente de DCs imediatamente após rotulagem. Uma gota de células marcadas foi depositado em uma lâmina de vidro e coberto por uma lamínula. Então, as amostras foram avaliadas em um microscópio de fluorescência e as imagens foram adquiridas através de uma câmera digital 5,0 Micropublisher Cor CCD (Qimaging, Surrey, BC Canada). <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Microfotografia fluorescente de DCs após 48 h de maturação in vitro. DCs rotulados foram cultivadas por 48 h com LPS (100 ng / ml) e TNF-α (20 ng / ml) em lâminas de vidro em uma incubadora de CO 2 (37 ° C CO, 5% 2). Então, as amostras foram lavadas com PBS (5 min, 2X), fixado com acetona (15 min, 4 ° C) e contrastado com DAPI. As células foram avaliadas em um microscópio de fluorescência como acima. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig5.jpg" alt="Figura 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 5"> Figura 5. A atividade biológica de Qdot manchada DCs maduras. DCs rotulados maturados in vitro como acima foram analisados ​​por citometria de fluxo (A) e (B). (A) Qdot manchada de células dão um sinal forte no canal FL3 (PerCP). Sombreada histograma: controle imaculada. (B) DCs Qdot manchadas e sem manchas foram adicionalmente corados com anticorpos específicos contra maturação marcadores CD86 e CD40; e controles isotipo. As células foram então analisados ​​em um citômetro de fluxo FACSort (Becton Dickinson, San Jose, CA). Além disso, IL-6 (C) e óxido nítrico (NO) foram determinados em sobrenadantes de madura Qdot manchada de DCs e controles. Níveis de IL-6 e óxido nítrico foi determinada por meio de ELISA análise e ensaio de Griess como temos descrito anteriormente 7, 8. Todos os dados mostraram nesta figura é representativa de dois ou três experimentos independentes mostrando resultados semelhantes. Os dados foram analisados ​​por ANOVA, utilizando o software GraphPad. <img src="/files/ftp_upload/2785/2785fig6.jpg" alt="Figura 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 6"> Figura 6. Detecção de DCs rotuladas de tecidos dissecados. Rotulados DCs maduras (1x10 6 células) foram injetadas em ratos por via intravenosa C57BL / 6. (A) Dois dias depois, os ratos foram sacrificados e os baços coletados, snap congelados, embutidos em outubro e 8 seções mM preparada com a criostato. Em seguida, amostras foram fixadas com acetona (15 min, 4 ° C) e contrastado com DAPI. As células foram avaliadas em um microscópio de fluorescência como acima Fig. 6a:. Ampliação de 40x, Fig. 6b: aumento de 100X, fig. Ampliação, 6C 400X.

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Não há conflitos de interesse declarados.

Murino mielóide) DCs têm sido amplamente utilizados, a fim de determinar a eficácia e melhoria da DC baseado em vacinas; investigar DC: interações de células T ou desenvolvimento DC, e determinar seu papel em várias doenças 9-11. Com isto mostramos como gerar DCs a partir de precursores recuperado de medulas ósseas de tíbias e fêmures. Nós recuperar os ossos sem cortar as pontas, permitindo-nos para esterilizá-los por submersão em etanol 70%, reduzindo assim a probabilidade de contaminação. Para diferenciar CDs a partir de células de medula óssea só usamos GM-CSF como 5 descritos anteriormente. Apesar de alguns protocolos também usar IL-4, tem sido relatado que essa citocina não é necessário quando se trabalha com altos níveis de GM-CSF 12. Na verdade, nós já demonstraram que essas DCs são capazes de induzir respostas imunes 13. Além disso, o cuidado tem que ser tomadas para recuperar as células aderentes apenas vagamente de 8 dias-culturas, lavando os pratos de Petri com meio desde células anexados mostram um fenótipo mais monócitos-like. Aqui nós mostramos a rotulagem de DCs com partículas Qdot fluorescente. Esta rotulagem tem algumas vantagens relativamente a outros métodos. Primeiro, as partículas Qdots são facilmente incorporados nas células. Segundo, o sinal fluorescente é muito alto e não é alterada pela maturação DC. Terceiro, a fluorescência não é perdido quando as células ou tecidos são fixados com solventes, como acetona, ao contrário do que acontece se GFP é utilizada para tag DCs 14, dando mais flexibilidade no momento de escolher protocolos de coloração. Finalmente, o sinal de alta fluorescentes dada por essas partículas permite a visualização das células, apesar de tecidos auto-fluorescência. Como descrito anteriormente 6, coloração Qdot não afetou a capacidade de maturação dessas células. Com isto mostramos que Qdot manchada de DCs se comportam de maneira semelhante como não-manchada DCs, upregulating moléculas co-estimulatórias e produção de IL-6 e óxido nítrico em resposta a estímulos inflamatórios. Embora DCs são células especializadas no desencadear respostas imunes, eles foram mostrados para participar em condições patológicas, como câncer e aterosclerose 4, 15, 16. Eles foram também alegou a participar de processo angiogênico 17, 18, ​​chegou a sugerir como estruturalmente participantes no desenvolvimento de novos vasos 19, 20. Assim, os métodos que permitem o rastreamento de DC in vivo, e determinar a sua localização geográfica em diferentes tecidos 4, 21, 22 são muito valiosos.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentários (opcional) </th></tr><tr><td> Camundongos C57BL / 6 </td><td> Jackson laboratórios </td><td></td><td> Fêmeas, 6-8 semanas de idade </td></tr><tr><td> RPMI </td><td> Invitrogen </td><td> 11875-119 </td><td></td></tr><tr><td> Soro fetal bovino, qualificado </td><td> Invitrogen </td><td> 10437-028 </td><td></td></tr><tr><td> Antibiótico antimicótico </td><td> Invitrogen </td><td> 15240-096 </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10010-049 </td><td></td></tr><tr><td> Tampão de Lise ACK </td><td> Lonza Walkersville, Inc </td><td> 10-548E </td><td></td></tr><tr><td> Recombinante murino GM-CSF </td><td> PeproTech Inc </td><td> 315-03 </td><td></td></tr><tr><td> Qtracker 655 Kit Labeling celular </td><td> Invitrogen </td><td> Q25021MP </td><td></td></tr><tr><td> Lipopolissacarídeo </td><td> Invivogen </td><td> tlrl-eblps </td><td></td></tr><tr><td> Recombinante murino TNF alpha </td><td> Peprotech </td><td> 315-01A </td><td></td></tr><tr><td> CD86 anticorpo </td><td> BD Biosciences </td><td> 553691 </td><td></td></tr><tr><td> CD40 anticorpo </td><td> BD Biosciences </td><td> 553791 </td><td></td></tr><tr><td> Sistema reagente de Griess </td><td> Promega </td><td> G2930 </td><td></td></tr><tr><td> IL-6 anticorpo de captura </td><td> eBioscience </td><td> 13-7061-81 </td><td></td></tr><tr><td> Anticorpo de detecção de IL-6 </td><td> eBioscience </td><td> 13-7062-81 </td><td></td></tr></tbody></table>

geração e rotulagem de murino derivadas da medula óssea células dendríticas com nanocristais qdot de estudos de rastreamento

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

As células dendríticas (DCs) são células antígeno apresentando profissionais (APCs) encontrados em tecidos periféricos e em órgãos imunológicos, como timo, medula óssea, baço, linfonodos e placas de Peyer 1-3. DCs presentes na amostra de tecidos periféricos do organismo para a presença de antígenos, que eles ocupam, processar e apresentar em sua superfície, no contexto de moléculas de histocompatibilidade (MHC). Então, o antígeno-carregado DCs migrar para órgãos imunológicos onde apresentam o antígeno processado aos linfócitos T desencadear respostas imunes específicas. Uma forma de avaliar a capacidade migratória de DCs é classificá-los com corantes fluorescentes 4. Com isto, demonstrar o uso de Qdot nanocristais fluorescentes para rotular derivadas da medula óssea de camundongos DC. A vantagem desta é que a rotulagem Qdot nanocristais possuem estável e de longo fluorescência duradoura que os tornam ideais para a detecção de células marcadas em tecidos recuperados. Para conseguir isso, as primeiras células será recuperado a partir marrows óssea de camundongos e cultivados por 8 dias na presença do fator macrófago-colônia de granulócitos estimulante, a fim de induzir a diferenciação DC. Estas células serão então marcadas com Qdots fluorescentes por curto incubação in vitro. Células coradas podem ser visualizados com um microscópio fluorescente. As células podem ser injetadas em animais experimentais, neste ponto, ou pode ser em células maduras sobre incubação in vitro com estímulos inflamatórios. Em nossas mãos, a maturação DC não determinam a perda do sinal fluorescente nem coloração Qdot afetam as propriedades biológicas dos DCs. Após a injeção, essas células podem ser identificadas em órgãos imune por microscopia fluorescente após dissecção típicos e os processos de fixação.

Dendríticas células antígenos captação e migrar para órgãos imunes a antígenos presentes processados ​​às células T. Qdot nanocristais rotulagem fornece um sinal duradouro e estável fluorescente. Este permite o rastreamento de células dendríticas a diferentes órgãos, por microscopia fluorescente.

Geração e Rotulagem de murino derivadas da medula óssea Células Dendríticas com Nanocristais Qdot de Estudos de rastreamento

As células dendríticas (DCs) são células apresentadoras de antígenos (APCs) profissionais encontradas em tecidos periféricos e em órgãos imunológicos, tais como o timo, a medula...

O objetivo geral deste procedimento é preparar células dendríticas para estudos de imagem utilizando nanocristais de ponto quântico. Isso é realizado primeiramente isolando células da medula óssea de fêmures e tíbias de camundongos. Em seguida, culturas de células da medula óssea são estabelecidas para facilitar a diferenciação celular em células dendríticas na presença de GM-CSF.Em seguida, as células dendríticas são recuperadas dos cultivos de células da medula óssea após oito dias. O passo final do procedimento é corar as células com nanocristais fluorescentes Q. Por fim, células dendríticas intensamente coradas podem ser visualizadas por microscopia de fluorescência.A principal vantagem do uso desta tecnologia em comparação com outros métodos, como o uso de células dendríticas marcadas com GFP, é que os nanocristais de ponto quântico (Q dot) mantêm sua fluorescência mesmo após coloração com solventes orgânicos como acetona. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais para biólogos de células dendríticas, como as propriedades de migração dessas células em diferentes doenças ou no contexto de diversas patologias. A demonstração do procedimento de coloração será realizada por Maria Ali, aluna de pós-graduação do meu laboratório.Após a eutanásia, dissecar cuidadosamente a tíbia e os fêmures de dois camundongos sem cortar as extremidades dos ossos. Em seguida, usar papel-toalha para remover todos os tecidos aderidos aos ossos, tomando cuidado para não quebrá-los. Em uma cabine de segurança biológica.Encha uma placa de Petri de 35 milímetros com etanol a 70% e, em seguida, imerja os ossos no etanol por 10 minutos. Após a esterilização dos ossos, recupere-os do etanol e deixe-os secar ao ar por cinco minutos em uma placa de Petri nova. Agora, corte o fêmur ao meio e a tíbia por sua extremidade mais fina.Infunda o interior dos ossos com um mililitro de meio RPMI utilizando uma seringa estéril. Colete a suspensão celular em um tubo de 15 mililitros e lave-a duas vezes com meio RPMI por meio de uma centrifugação de 10 minutos a 300 ×g a quatro graus Celsius em uma centrífuga com rotor de cesto oscilante. Após a última lavagem, ressuspenda as células em dois mililitros de tampão de lise de CK e incube por cinco minutos à temperatura ambiente para eliminar os glóbulos vermelhos.Em seguida, adicione 13 mililitros de RPMI mais 10% de FBS e lave as células mais duas vezes neste meio com as mesmas configurações de centrífuga que antes. Conte as células e ajuste a concentração para duas vezes 10 à quinta células por mililitro. Com RPMI mais 10% de FBS, adicione G-M-C-S-F murino recombinante a uma concentração final de 20 nanogramas por mililitro.Em seguida, adicione 10 mililitros dessa suspensão a uma placa de Petri estéril de qualidade microbiológica com 10 centímetros de diâmetro e cultive a suspensão celular em uma incubadora de dióxido de carbono. Três dias depois, adicione outros 10 mililitros de RPMI contendo 10% de FBS com 20 nanogramas por mililitro de G-M-C-S-F murino recombinante a cada uma das placas preparadas.Três dias depois, recupere 10 mililitros de suspensão celular de cada placa de Petri, centrifugue as células nas mesmas condições e ressuspenda o pellet no mesmo volume de RPMI acrescido de 10% de FBS, conforme recuperado das placas de Petri, e reponha com nova G-M-C-S-F murina recombinante. Por fim, devolva a suspensão celular a cada placa de Petri original e cultive as células por mais dois dias no incubador de dióxido de carbono. Após oito dias de cultivo, recupere as células flutuantes e fracamente aderentes lavando as placas de Petri com meio fresco.Em seguida, marque as células coletadas com o kit de marcação de células Q tracker 655, seguindo rigorosamente as instruções do fabricante, para rotular cinco vezes 10 à sexta potência de DCs derivadas da medula óssea murina com nanocristais Q numa concentração de 10 nanomolar. Primeiro, misture cinco microlitros de cada um dos componentes do kit, A e B, em um tubo eppendorf, e incube a mistura por cinco minutos à temperatura ambiente. Em seguida, adicione um mililitro de RPMI mais 10% de FBS e vortexe o tubo por 30 segundos.Em seguida, adicione cinco vezes 10 à quinta potência de Dcs suspensas em 0,5 mililitros de RPMI mais 10% de FBS ao tubo einor e incube as células na solução D a 37 graus Celsius por 60 minutos. Em seguida, lave as células duas vezes em RPMI mais 10% de FBS nas mesmas condições que antes e re-suspenda o pellet em RPMI.Esta figura mostra um exemplo de uma microfotografia fluorescente de dcs. Imediatamente após a marcação, uma gota de células marcadas foi depositada sobre uma lâmina de vidro e coberta com uma lamínula. Em seguida, as amostras foram avaliadas utilizando um microscópio fluorescente.Nesta figura, pode-se observar uma microfotografia fluorescente de DCs após 48 horas, identificada como maturação in vitro. As DCs foram cultivadas durante 48 horas com 100 nanogramas por mililitro de LPS e 20 nanogramas por mililitro de TNF alfa em câmaras de cultura sobre lâminas, em incubadora de dióxido de carbono. Em seguida, as amostras foram lavadas com PBS, fixadas com acetona, contra-coloridas com DPI e avaliadas utilizando microscópio fluorescente.Dcs marcadas maduras em cultura foram analisadas por citometria de fluxo. Células coradas com Q dot apresentam um sinal forte no canal FL3. Células coradas e não coradas com Q dot foram adicionalmente coradas com anticorpos específicos contra marcadores de maturação, CD86 e CD40, e controles de isotipo. As células foram então analisadas por citometria de fluxo. Além disso, os níveis de IL-6 e óxido nítrico foram determinados nos sobrenadantes de dcs maduras coradas com Q dot e controles.Aqui é mostrada uma figura representativa de DCs marcadas em um tecido dissecado. DCs maduras foram injetadas intravenosamente em camundongos C57BL/6. Três dias depois, os camundongos foram sacrificados e os baços foram coletados.Cortes de oito mícrons embutidos em OCT e congelados rapidamente foram preparados utilizando um criostato. As amostras foram então fixadas com acetona, contra-coloridas com DPI e avaliadas usando um microscópio de fluorescência. Após esses procedimentos.Outros métodos, como apresentação de antígenos ou maturação com diferentes estímulos, podem ser realizados para responder perguntas adicionais, como a migração de células dendríticas em resposta a diferentes estímulos de maturação.

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Apresentação de antígenos em órgãos linfóides secundários pelas células dendríticas é crucial para o início da célula T mediada resposta imune adaptativa. Aqui demonstramos a cultura de medula óssea células dendríticas derivadas de camundongos, ativação e de rotulagem para os dois fótons de imagem.

Geração de Medula Óssea Derivado Células Dendríticas murino para uso em dois fótons de imagem

Este vídeo descreve um protocolo para a geração de células dendríticas - células-chave apresentadoras de antígenos que ativam as células T - da medula óssea de um camundongo adulto.

Geração de células dendríticas derivadas da medula óssea: um método para gerar células dendríticas a partir da medula óssea de camundongos

Rastreamento de células usando MRI ganhou notável atenção nos últimos anos. Este protocolo descreve a marcação das células dendríticas com flúor...

Monitoramento da Migração de Células dendríticas usando<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Ressonância Magnética

Descreve-se um protocolo para o isolamento e purificação de neutrófilos de medula óssea do rato por centrifugação de gradiente de densidade e de neutrófilos para rotulagem com corantes CellTracker. Isso representa um método simples, rápido, reprodutível e econômica para a obtenção de um grande número de neutrófilos para estudos funcionais a jusante ou de transferência e controle de experimentos adotivos.

Isolamento, purificação e Rotulagem de neutrófilos da medula óssea do rato de Estudos funcionais e Experimentos de transferência adotiva

Combinatória 5 proteínas fluorescentes marcação de células-tronco e progenitoras hematopoiéticas permite in vivo de rastreamento via clonal confocal e microscopia de dois fótons, fornecendo insights sobre medula óssea hematopoiética arquitetura durante a regeneração. Este método permite o mapeamento destino não-invasivo de espectro codificados células hspCs derivados em tecidos intactos por longos períodos de tempo após o transplante.

In vivo Clonal Rastreamento de Stem hematopoiéticas e células progenitoras Marcado por cinco proteínas fluorescentes usando confocal e microscopia multifotônica

Os monócitos são os principais reguladores da imunidade inata e desempenham um papel crítico na renovação do sistema fagocítico mononuclear periférico e em caso de inflamação. Este manuscrito descreve o procedimento de imagem em tempo real da medula óssea da calvária de camundongos para estudar o mecanismo de mobilização de monócitos.

Acompanhando Rato Medula Óssea monócitos<em&gt; In Vivo</em

Seguindo a preparação de um anticorpo monoclonal 64 Cu-modificados se ligar a um receptor de células T de murino transgico, as células T são radiomarcados in vivo, analisadas para a viabilidade, funcionalidade, estabilidade rotulagem e apoptose, e transferidas adoptivamente para ratinhos com uma via aérea hipersensibilidade de tipo retardado reacção para imagem não invasivo por tomografia de emissão de positrões / tomografia computadorizada (PET / CT).

Murino Linfócitos Rotulagem por<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-Antibody Receptor Segmentação para<em&gt; In Vivo</em&gt; Tráfico celular por PET / CT

Aqui nós fornecemos um método para identificar e isolar um grande número de GM-CSF dirigido pilhas myeloid usando a classificação de células de alta velocidade. Cinco populações distintas (comuns progenitores mieloides progenitoras granulócitos/macrófagos, monócitos, macrófagos derivados de monócitos e DCs derivados de monócitos) podem ser identificadas com base na expressão Ly6C e CD115.

Geração de um grande número de progenitores mieloides e células dendríticas precursores de murino medula óssea usando um celular romance classificação estratégia

Neste artigo, nós fornecemos que um protocolo detalhado para a expressão de proteínas da fusão fluorescente em murino medula óssea derivada de macrófagos e células dendríticas. O método é baseado na transdução da medula óssea progenitores com construções retrovirais seguidas por diferenciação em macrófagos e dendríticas células em vitro.

Expressão de proteínas da fusão fluorescente em murino derivadas da medula óssea as células dendríticas e macrófagos

Aqui, apresentamos um protocolo para a determinação na vivo da ativação de células (células T) de T CD4 naïve, proliferação e diferenciação de células Th1 induzida pela medula óssea de GM-CSF (BM)-derivado de células dendríticas (DCs). Além disso, este protocolo descreve isolamento BM e células T, geração de DC e DC e células T transferência adotiva.

Um modelo de rato In Vivo para ativação de células T Naïve CD4 medida, proliferação e diferenciação de células Th1 induzida pelas células dendríticas derivadas de medula óssea

Aqui, apresentamos um método econômico e eficiente para isolar e gerar células dendríticas derivadas da medula óssea de camundongos após 7 dias de cultura com 10 ng/mL GM-CSF/IL-4.

Protocolo Econômico e Eficiente para Isolar e Culturing Células Dendríticas Derivadas da Medula Óssea de camundongos

Aprenda a gerar e rotular células dendríticas murinas derivadas da medula óssea com nanocristais Qdot para estudos de rastreamento por microscopia de fluorescência. Este método permite visualizar a migração celular in vivo.

Geração e Rotulagem de murino derivadas da medula óssea Células Dendríticas com Nanocristais Qdot de Estudos de rastreamento

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