Cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa: um método robusto para quantificação de ácidos siálicos marcados com fluorescência e derivatizados isolados de fígado de camundongo

Os ácidos siálicos, como o ácido N-acetilneuramínico e o ácido N-glicolilneuramínico, são porções de carboidratos carregadas negativamente encontradas nas extremidades distais das cadeias de oligossacarídeos na superfície celular de mamíferos.

Para quantificar as quantidades relativas desses ácidos siálicos no tecido hepático de camundongos usando cromatografia líquida de alta eficiência de fase reversa ou RP-HPLC, primeiro trate a mistura isolada de ácido siálico com agente de derivatização. O agente de derivatização interage com os grupos funcionais dos ácidos siálicos, gerando derivados estáveis e fluorescentes do ácido siálico.

Monte uma coluna RP-HPLC, conectada a um detector de fluorescência. A coluna compreende fase estacionária à base de sílica porosa ligada a ligantes de cadeia alquílica hidrofóbicos não polares para facilitar interações seletivas com derivados de ácido siálico durante a execução cromatográfica.

Equilibre a coluna usando a fase móvel polar aquosa contendo baixas concentrações de acetonitrila, um solvente orgânico menos polar, para um condicionamento ideal da coluna.

Colocar a mistura de ácido siálico derivatizado na coluna.

O ácido N-acetilneuramínico, con