Um ensaio baseado em fluorescência usando linfócitos projetados para triagem de compostos imunomoduladores

Comece com uma placa de vários poços compatível com fluorescência contendo uma suspensão de linfócitos T derivados de camundongos transgênicos.

Esses linfócitos contêm uma proteína fluorescente verde ou de expressão de GFP, controlada pelo receptor de células T ou envolvimento do TCR com compostos imunomoduladores.

Trate cada poço com uma solução contendo compostos imunomoduladores com diferentes potenciais.

Durante a incubação, os compostos imunomoduladores interagem com os TCRs nos linfócitos T.

A interação do TCR com um composto estimulante desencadeia a ativação do do gene, elevando a expressão de GFP.

Em contraste, a interação do TCR com um composto inibitório inibe o do gene e reduz a expressão de GFP.

Em seguida, cubra as células com corante fluorescente de ácido nucleico para manchar os núcleos.

Centrifugue a placa para assentar as células para uma medição precisa da fluorescência.

Sob um microscópio de fluorescência, os linfócitos T viáveis exibem dois sinais de fluorescência correspondentes aos núcleos celulares e às proteínas fluorescentes verdes.

A fluorescência verde intensificada significa estimulação bem-sucedida dos linfócitos T, enquanto um fraco sinal de fluorescê