Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:29 min. • July 8th, 2025
Pegue uma lâmina de fluxo contendo uma bicamada lipídica suportada, ou SLB.
O SLB é conjugado a ligantes específicos - molécula de adesão intercelular 1 ou anticorpos ICAM-1 e anti-CD3 - marcados com fluoróforos.
Adicione células T e anti-CD107a Fab marcado com fluoróforo - o fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo contra o marcador de degranulação.
O complexo receptor de células T-CD3 ou TCR-CD3 se liga ao anticorpo anti-CD3, desencadeando o TCR.
A sinalização de dentro para fora induzida pelo gatilho ativa as integrinas na superfície, que se ligam ao ICAM-1 imobilizado.
A conjugação induz a reorganização do citoesqueleto - rearranjo de microtúbulos e polimerização de actina que leva ao espalhamento lateral da célula na superfície do SLB.
O espalhamento permite que mais interações ligante-receptor formem um cluster de ativação supramolecular ou SMAC, criando uma sinapse imunológica.
Os grânulos líticos de células T se movem ao longo dos microtúbulos e se fundem com a membrana plasmática, expondo marcadores de degranulação na superfície da célula, que se ligam ao anti-CD107a Fab.
Usando um microscópio de fluorescência, visualize a sinapse imune enriquecida em complexos TCR
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