Detecção de proteínas príon anormais no tecido cerebral usando imuno-histoquímica

Pegue um slide com uma seção fixa do cérebro de mamíferos exibindo agregados de proteína de príon mal dobrados.

Tratar a secção com ácido fórmico para reduzir a infecciosidade dos agregados de priões.

Trate com um tampão ácido dentro de uma câmara de pressão hidratada. Um pH ácido e de alto calor quebra as reticulações de proteínas induzidas pela fixação, desmascarando os epítopos antigênicos.

Mergulhe em peróxido de hidrogênio para inativar a peroxidase endógena, evitando manchas de fundo indesejadas.

Coloque a lâmina em uma placa de cobertura e adicione um tampão para manter a hidratação do tecido.

Introduzir uma solução de bloqueio, evitando a ligação de anticorpos não específicos.

Adicionar um anticorpo primário específico aos agregados de priões.

Remova as moléculas de anticorpos não ligadas. Introduza um anticorpo secundário biotinilado que se liga ao anticorpo primário.

Remova as moléculas de anticorpos não ligadas. Adicione uma enzima peroxidase biotinilada complexada com avidina que se liga à biotina no anticorpo secundário.

Adicione um substrato cromogênico, que a peroxidase oxida em um produto colorido.

Usando um microscópio, observe os agregados corados.

Mergulhe cuidad