Geração de neurônios simpáticos pós-ganglionares a partir de células-tronco pluripotentes humanas

Pegue uma microplaca revestida com matriz extracelular e adicione células-tronco pluripotentes humanas suspensas em um meio de diferenciação.

O meio contém moléculas de sinalização que influenciam as vias de sinalização celular, direcionando a diferenciação em células progenitoras neurais.

Introduza outro meio de diferenciação contendo moléculas de sinalização que induzem a diferenciação em células da crista neural, ou NCCs, precursores de células neuronais e não neuronais.

Adicione enzimas para romper a matriz, dissociando assim as células.

Lave para neutralizar as enzimas, depois centrifugue e descarte o sobrenadante. Ressuspenda os NCCs em um meio esferóide e transfira-os para uma microplaca.

Os fatores de crescimento do meio e as pequenas moléculas induzem a formação de esferóides.

Suplemento com ácido retinóico, que promove a diferenciação em neurônios progenitores simpáticos.

Transfira o esferóide para uma microplaca revestida com proteína de adesão em um meio de maturação do neurônio simpático, causando a ligação do esferóide.

Os fatores de crescimento neural e o ácido retinóico no meio promovem a maturação em neurônios simpáticos pós-ganglionares, que fazem parte do sistema