Estudando a excitabilidade de neurônios fluorescentes usando um grampo de patch de célula inteira

Pegue uma fatia coronal de camundongo transfectado imobilizada em uma câmara de gravação perfundida com aCSF.

A fatia contém uma população esparsa de neurônios piramidais expressando uma enzima alvo e uma proteína fluorescente.

Montar uma pipeta de registo composta por uma solução intracelular e um eléctrodo ligado a um amplificador para medir os sinais neuronais.

Identifique microscopicamente a área do tecido alvo e localize um neurônio fluorescente.

Aplique pressão positiva na pipeta para evitar o entupimento e avance-a para o neurônio-alvo.

A pressão positiva causa um leve recuo na membrana neuronal ao contato.

Libere a pressão, formando uma vedação firme entre a membrana e a ponta.

Defina o potencial de retenção em um valor negativo constante para estabilizar o neurônio.

Aplique uma breve pressão negativa para romper a membrana, conectando o citoplasma ao interior da pipeta e estabelecendo uma configuração de célula inteira.

Mude para o modo de pinça de corrente e aplique pulsos de corrente positiva, gerando potenciais de ação indicativos de excitabilidade neuronal.

Transfira uma fatia para a câmara de gravação usando uma pipeta Pasteur ou um pincel pequeno. Segure a fatia com