Imagem ex vivo da migração de células granulares cerebelares pós-natais usando macroscopia confocal

Comece com uma fatia cerebelar obtida de um cérebro de filhote de rato pós-natal em uma placa de vários poços contendo meio.

Remova o meio e incube a fatia em uma solução de corante fluorescente citoplasmático para marcar as células granulares (GCs).

Transfira a fatia para uma membrana de inserção transwell e remova o excesso de corante.

Remova o inserto e encha o poço com mídia. Em seguida, substitua a inserção e adicione mídia para cobrir o tecido.

Incube para permitir que o tecido se fixe à membrana de inserção.

Transfira a placa para uma incubadora conectada a um macroscópio confocal e coloque uma tampa de vidro sobre a placa.

Defina as condições de cultura, incube ainda mais o tecido e comece a fazer a imagem.

Após a iluminação do laser, os GCs rotulados fluorescem.

Capture imagens de lapso de tempo para visualizar a migração radial dos GCs através da camada molecular do cerebelo.

Usando software de imagem, analise a distância migratória dos GCs.

Depois de fatiar a amostra, use uma pipeta de bulbo branco truncado para transferi-la com um pouco de HBSS para uma placa de seis poços. Carregue até três fatias em cada poço. Em seguida, depois de esvaziar a mídia em cada poço carregado, adic