Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:59 min. • August 7th, 2025
Encha uma micropipeta com uma mistura de DNA contendo vetores de plasmídeo carregando o gene de interesse e um corante de rastreamento. Prenda-o em um micromanipulador.
Posicione um bloco de agarose sob o microscópio e coloque uma fatia de cérebro embrionário de camundongo embebida em agarose com interneurônios corticais sobre ela.
Abaixe a micropipeta e injete a mistura de DNA na região progenitora do interneurônio. O corante de rastreamento marca o local da injeção.
Posicione outro bloco de agarose em um eletrodo de placa de Petri e uma coluna de agarose no eletrodo de cobertura.
Transfira a fatia para o bloco e alinhe o eletrodo de cobertura sobre o local da injeção.
Aplique breves pulsos elétricos para permeabilizar temporariamente as membranas celulares, permitindo que os plasmídeos entrem no núcleo.
Incube a fatia em um meio para manter a viabilidade celular.
Dentro do núcleo, o plasmídeo desencadeia a expressão gênica, produz a proteína alvo e modula as funções progenitoras do interneurônio.
Para a injeção, misture o DNA do vetor de expressão e controle a uma concentração de 1 micrograma por microlitro para cada vetor e adicione solução estoque verde rápida a uma diluição de 1 a 10
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