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DOI: 10.3791/3791-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study presents an enhanced protocol for a multiplexed high-throughput antibody microarray with lectin detection, aimed at glycosylation profiling of specific proteins. The new method offers reliable reagents and significantly reduces time, cost, and equipment needs compared to previous techniques.
Neste estudo, nós descrevemos um protocolo melhorado para um microarray anticorpo multiplexado de alto rendimento com o método de detecção de lectina que pode ser usado em perfil de glicosilação de proteínas específicas. Este protocolo apresenta novos reagentes fiáveis e reduz significativamente o tempo, custo e requisitos de equipamento de laboratório, em comparação com o procedimento anterior.
Este artigo em vídeo descreve um procedimento para obter perfis de glicosilação de 20 glicoproteínas diferentes em uma amostra de soro de paciente com carcinoma hepatocelular usando uma primeira glicoproteína de microarray de anticorpos bloqueados quimicamente Anticorpos específicos são impressos diretamente em lâminas de microarray e glicanos de anticorpos são bloqueados para evitar a ligação à lectina. Quando as amostras de soro do paciente são aplicadas, as glicoproteínas da amostra são capturadas pelos anticorpos. Proteínas de ligação de glicanos biotiniladas são então adicionadas para detectar os glicanos e a neu travain di conjugada é adicionada para marcar as lectinas biotiniladas.
A lâmina de microarray é então escaneada para detectar a análise de fluorescência dos dados resultantes revela os perfis de glicosilação das proteínas da amostra. Esta técnica tem várias vantagens sobre o método existente, como a HPLC. Este método permite a detecção de glicoproteínas individuais em seu status nativo.
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