Name: Rotulagem de cancro da mama xenoenxertos derivados do paciente com rastreáveis Repórteres para o crescimento de tumores e metástases Estudos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 53 s
Description: Aprenda a rotular xenoenxertos derivados do paciente com vetores lentivirais expressando GFP e luciferase para rastreamento de crescimento tumoral e metástases por imagem in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Os autores agradecem ao Dr. Darrel Kotton na Universidade de Boston para fornecer o fago-EF1aL-dsRed-UBC-GFP-W vector e protocolos para a produção lentiviral título elevado usado nestes estudos. Este trabalho foi financiado pelo DOD BCRP W81XWH-11-1-0101 (DMC), ACS IRG # 57-001-53 (DMC), NCI K22CA181250 (DMC) e R01 CA140985 (CAS) concessão .NCI P30CA046934 Centro suportado in vivo de imagens e cultura de tecidos núcleos na Universidade do Colorado AMC.

<ol><li>Jin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+human+tumour+tissue+xenografts+in+immunodeficient+mice%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Transl+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived human tumour tissue xenografts in immunodeficient mice: a systematic review.</a> Clin Transl Oncol. 12 (7), 473-480 (2010).</li>
<li>Siolas, D., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumor+xenografts%3A+transforming+clinical+samples+into+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models.</a> Cancer Res. 73 (17), 5315-5319 (2013).</li>
<li>DeRose, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+grafts+derived+from+women+with+breast+cancer+authentically+reflect+tumor+pathology%2C+growth%2C+metastasis+and+disease+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor grafts derived from women with breast cancer authentically reflect tumor pathology, growth, metastasis and disease outcomes.</a> Nat Med. 17 (11), 1514-1520 (2011).</li>
<li>Kabos, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+luminal+breast+cancer+xenografts+retain+hormone+receptor+heterogeneity+and+help+define+unique+estrogen-dependent+gene+signatures%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+cancer+research+and+treatment%22%5BJournal%5D)">Patient-derived luminal breast cancer xenografts retain hormone receptor heterogeneity and help define unique estrogen-dependent gene signatures.</a> Breast cancer research and treatment. 135 (2), 415-432 (2012).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+renewable+tissue+resource+of+phenotypically+stable%2C+biologically+and+ethnically+diverse%2C+patient-derived+human+breast+cancer+xenograft+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A renewable tissue resource of phenotypically stable, biologically and ethnically diverse, patient-derived human breast cancer xenograft models.</a> Cancer Res. 73 (15), 4885-4897 (2013).</li>
<li>Lum, D. H., Matsen, C., Welm, A. L., Welm, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+human+primary+tumorgraft+models%3A+comparisons+with+traditional+oncology+preclinical+models+and+the+clinical+relevance+and+utility+of+primary+tumorgrafts+in+basic+and+translational+oncology+research%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Overview of human primary tumorgraft models: comparisons with traditional oncology preclinical models and the clinical relevance and utility of primary tumorgrafts in basic and translational oncology research.</a> Curr Protoc Pharmacol. , (2012).</li>
<li>Marangoni, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+model+of+patient+tumor-derived+breast+cancer+xenografts+for+preclinical+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">A new model of patient tumor-derived breast cancer xenografts for preclinical assays.</a> Clin Cancer Res. 13 (13), 3989-3998 (2007).</li>
<li>Garrido-Laguna, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+engraftment+in+nude+mice+and+enrichment+in+stroma-+related+gene+pathways+predict+poor+survival+and+resistance+to+gemcitabine+in+patients+with+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumor engraftment in nude mice and enrichment in stroma- related gene pathways predict poor survival and resistance to gemcitabine in patients with pancreatic cancer.</a> Clin Cancer Res. 17 (17), 5793-5800 (2011).</li>
<li>Landis, M. D., Lehmann, B. D., Pietenpol, J. A., Chang, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+breast+tumor+xenografts+facilitating+personalized+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived breast tumor xenografts facilitating personalized cancer therapy.</a> Breast Cancer Res. 15 (1), 201(2013).</li>
<li>Norum, J. H., Andersen, K., Sorlie, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+learned+from+the+intrinsic+subtypes+of+breast+cancer+in+the+quest+for+precision+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Lessons learned from the intrinsic subtypes of breast cancer in the quest for precision therapy.</a> Br J Surg. 101 (8), 925-938 (2014).</li>
<li>Tentler, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+tumour+xenografts+as+models+for+oncology+drug+development%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development.</a> Nat Rev Clin Oncol. 9 (6), 338-350 (2012).</li>
<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+xenografts+of+triple-negative+breast+cancer+reproduce+molecular+features+of+patient+tumors+and+respond+to+mTOR+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-derived xenografts of triple-negative breast cancer reproduce molecular features of patient tumors and respond to mTOR inhibition.</a> Breast Cancer Res. 16 (2), R36(2014).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+stem+cells+from+human+breast+tumors+are+involved+in+spontaneous+metastases+in+orthotopic+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Cancer stem cells from human breast tumors are involved in spontaneous metastases in orthotopic mouse models.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (42), 18115-18120 (2010).</li>
<li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+cancer+stem+cell+metastasis+in+xenograft+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of cancer stem cell metastasis in xenograft animal models.</a> Methods Mol Biol. 568, 7-19 (2009).</li>
<li>Thibaudeau, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mimicking+breast+cancer-induced+bone+metastasis+in+vivo%3A+current+transplantation+models+and+advanced+humanized+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Mimicking breast cancer-induced bone metastasis in vivo: current transplantation models and advanced humanized strategies.</a> Cancer Metastasis Rev. 33 (2-3), 721-735 (2014).</li>
<li>Francia, G., Cruz-Munoz, W., Man, S., Xu, P., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+advanced+spontaneous+metastasis+for+experimental+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Mouse models of advanced spontaneous metastasis for experimental therapeutics.</a> Nat Rev Cancer. 11 (2), 135-141 (2011).</li>
<li>Powell, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p53+deficiency+linked+to+B+cell+translocation+gene+2+%28BTG2%29+loss+enhances+metastatic+potential+by+promoting+tumor+growth+in+primary+and+metastatic+sites+in+patient-derived+xenograft+%28PDX%29+models+of+triple-negative+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">p53 deficiency linked to B cell translocation gene 2 (BTG2) loss enhances metastatic potential by promoting tumor growth in primary and metastatic sites in patient-derived xenograft (PDX) models of triple-negative breast cancer.</a> Breast Cancer Res. 18 (1), (2016).</li>
<li>DeRose, Y. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-derived+models+of+human+breast+cancer%3A+protocols+for+in+vitro+and+in+vivo+applications+in+tumor+biology+and+translational+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Patient-derived models of human breast cancer: protocols for in vitro and in vivo applications in tumor biology and translational medicine.</a> Curr Protoc Pharmacol. , (2013).</li>
<li>Wang, X., McManus, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lentivirus+production%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Lentivirus production.</a> J Vis Exp. (32), (2009).</li>
<li>Indumathi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lineage+depletion+of+stromal+vascular+fractions+isolated+from+human+adipose+tissue%3A+a+novel+approach+towards+cell+enrichment+technology%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Lineage depletion of stromal vascular fractions isolated from human adipose tissue: a novel approach towards cell enrichment technology.</a> Cytotechnology. 66 (2), 219-228 (2014).</li>
<li>Hines, W. C., Yaswen, P., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+breast+cancer+requires+identification+and+correction+of+a+critical+cell+lineage-dependent+transduction+bias%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Modelling breast cancer requires identification and correction of a critical cell lineage-dependent transduction bias.</a> Nat Commun. 6, 6927(2015).</li>
<li>Campbell, J. P., Merkel, A. R., Masood-Campbell, S. K., Elefteriou, F., Sterling, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+bone+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Models of bone metastasis.</a> J Vis Exp. (67), e4260(2012).</li>
<li>Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+TGFbeta+Signaling+in+Mouse+Models+of+Cancer+Metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Imaging TGFbeta Signaling in Mouse Models of Cancer Metastasis.</a> Methods Mol Biol. 1344, 219-232 (2016).</li>
<li>Jenkins, D. E., Hornig, Y. S., Oei, Y., Dusich, J., Purchio, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+human+breast+cancer+cell+lines+that+permit+rapid+and+sensitive+in+vivo+detection+of+mammary+tumors+and+multiple+metastases+in+immune+deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent human breast cancer cell lines that permit rapid and sensitive in vivo detection of mammary tumors and multiple metastases in immune deficient mice.</a> Breast Cancer Res. 7 (4), R444-R454 (2005).</li>
<li>Lawson, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+reveals+a+stem-cell+program+in+human+metastatic+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis reveals a stem-cell program in human metastatic breast cancer cells.</a> Nature. 526 (7571), 131-135 (2015).</li>
</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

As etapas críticas no âmbito do protocolo: O uso de partículas lentivirais de título elevado (&gt; 10 8 TU / ml) é um passo crítico no sucesso deste protocolo, como permite o controle cuidadoso da composição do meio durante a transdução in vitro. Embora vários métodos para a produção de partículas virais de título elevado têm sido bem descritos 18,19; este protocolo utiliza partículas lentivirais produzidos como descrito em detalhe <a href="htt...

O desenvolvimento de xenoenxertos de tumor derivadas de doentes (PDXs), onde as amostras de tumor cirurgicamente ressecado são enxertadas directamente em ratinhos imunocomprometidos, oferece várias vantagens em relação a modelos de xenoenxerto padrão de linha de célula, e representa um avanço importante na investigação do cancro 1,2. PDXs pode ser mantido e ampliado por passagens sucessivas com alteração mínima das características genéticas e biológicas do tumor cresceu na primeira passagem; e reflectir com maior precisão do que a heterogeneidade do tumor xenotransplantes derivados de linhas celulares de cancro humano 3-8. Estes modelos são agora amplamente utilizado como uma plataforma para personalizar cancro terapêutica 9,10, como uma plataforma pré-clínico no desenvolvimento de medicamentos 6,11 e como uma ferramenta experimental para o estudo da biologia do câncer 4,12. A maioria dos PDXs são implantados e propagadas por via subcutânea, o que permite viabilizar medição do crescimento do tumor ao longo do tempo utilizando um compasso. Contudo, Doença metastática tem sido mais difíceis de modelar utilizando PDXs. Especificamente para o cancro da mama, xenotransplantes com capacidade metastática a diferentes órgãos foram descritas 3,5,13, mas a freqüência de divulgação espontânea para sítios metastáticos é extremamente baixo. Onde relatado, a identificação e quantificação de carga metastático confia no exame histológico laboriosa de órgãos-alvo post-mortem. linhas celulares de cancro que expressam bioluminescente (luciferase, Luc) ou fluorescente (Green Fluorescent Protein, GFP) repórteres genes são comumente usados ​​em modelos experimentais de metástases do cancro da mama para o cérebro, pulmão, ossos e fígado após intracardíaca, tail-veia, intrafemoral e injeção do baço 14-16. Embora estes modelos ignorar disseminação de tumores primários, eles são valiosos para estudar os mecanismos de tropismo do órgão e colonização metastático. No entanto, as células derivadas de tumores de pacientes primários e PDXs pode ter baixa transfecção ou taxas de transdução de using procedimentos padrão. Uma alternativa é estabelecer linhas celulares derivadas PDX-17 in vitro, que pode ser, em seguida, marcada utilizando protocolos de cultura de tecidos convencionais. Esta abordagem, no entanto, não é adequado para etiquetar a maioria dos PDXs, para a qual linha celular de derivação é difícil e pode alterar o fenótipo das células. Aqui é apresentado um protocolo para a transdução de células tumorais dissociadas com PDX-lentivirais adequados para imagiologia in vivo. Além disso, descrevemos a metástase experimental com injeção intracardíaca de células PDX luc-GFP rotulados dissociados em ratinhos imunocomprometidos. Um protocolo de base para a transdução de Organóides PDX-dissociáveis por gene-repórter que expressa lentivírus foi anteriormente descrito 18. No protocolo corrente que descrevem métodos adicionais para enriquecer em células de tumores humanos e obter perto de 100% de eficiência de transdução, bem como o uso de PDXs marcados para a detecção de cancro da mama experimentalmetástases. Este protocolo pode ser adaptado para a marcação de vários tipos de cancro da PDXs com vários marcadores luminescentes e fluorescentes, bem como na modulação da expressão do gene (ou seja, shRNA knockdown de genes de interesse).

<table><tbody><tr><td>DMEM/F12 (1:1)</td><td>Hyclone</td><td>SH30023.01</td><td></td></tr><tr><td>bFGF</td><td>BD Biosciences</td><td>354060</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>BD Biosciences</td><td>354001</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Sigma</td><td>H4784</td><td></td></tr><tr><td>B27</td><td>Gibco/Thermo Fisher</td><td>17504-44</td><td></td></tr><tr><td>Anti-fungos-antibióticos</td><td>Hyclone</td><td>SV30010</td><td></td></tr><tr><td>Accumax</td><td>Innovative Cell Technologies</td><td>AM-105-500</td><td>Tampão de Digestão</td></tr><tr><td>FBS</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>HBSS Red Ca2+/Mg2+ grátis</td><td>Hyclone</td><td>SH30031.02</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10x PBS</td><td>Hyclone</td><td>SH30258.01</td><td></td></tr><tr><td>Cultrex</td><td>Cultrex</td><td>3433-005-01</td><td>Extrato de Matriz de Embasamento (BME)</td></tr><tr><td>30 &#176; Agitador C</td><td>NewBrunswick Scientific CO. INC</td><td>Série 25 Incubadora Agitador</td><td></td></tr><tr><td>70 &#956; m filtros</td><td>Falcon</td><td>7352350</td><td></td></tr><tr><td>bisturis</td><td>Fisher</td><td>22079690</td><td></td></tr><tr><td>Desinfetante de clorexidina</td><td>Durvet&nbsp;</td><td>NDC# 30798-624-35</td><td></td></tr><tr><td>Reagente de lise celular de sangue vermelho</td><td>Sigma</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>Neuraminidase</td><td>Sigma</td><td>N7885-1UN</td><td></td></tr><tr><td>EpCAM (CD326+) microesferas*</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-061-101</td><td></td></tr><tr><td>Kit de depleção de células de linhagem, mouse*</td><td>Miltenyil Biotec</td><td>130-090-858</td><td></td></tr><tr><td>MiniMACS Separator&nbsp;</td>Suporte Magnético Mini MACS <td>Miltenyil Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Colunas Miltenyil Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>MS As</td> colunas <td>Miltenyil Biotec</td><td>130-042-201</td><td>MS ou LS podem ser usadas, ajustam-se ao número de células.</td></tr><tr><td>Sistema de luz sintonizável Illumatool</td><td>Pesquisa Lightools</td><td>Vários</td><td>Para imagem de fluorescência in vivo</td></tr><tr><td>Dispositivo de imagem de IVIS200 Xenogen</td><td>Xenogen</td><td>Vários</td><td>Para imagem de luminiscência in vivo</td></tr><tr><td>Clone de citoqueratina humana MNF116 Anticorpo monoclonal</td><td>DAKO</td><td>M0821</td><td>Pan-citoqueratina&nbsp;</td></tr><tr><td>Anticorpo do receptor do fator de crescimento epidérmico</td><td>Sinalização celular</td><td>4267S</td><td>EGFR</td></tr></tbody></table>

rotulagem de cancro da mama xenoenxertos derivados do paciente com rastreáveis ​​repórteres para o crescimento de tumores e metástases estudos

Labeling of Breast Cancer Patient-derived Xenografts with Traceable Reporters for Tumor Growth and Metastasis Studies

O uso de modelos pré-clínicos para estudar a biologia do tumor e a resposta ao tratamento é fundamental para a pesquisa do câncer. Linhagens de células humanas estabelecidas há muito tempo e muitos modelos de camundongos transgênicos muitas vezes não conseguem recapitular os principais aspectos das malignidades humanas. Assim, modelos alternativos que melhor representam a heterogeneidade dos tumores dos pacientes e suas metástases estão sendo desenvolvidos. Modelos de xenoenxerto derivado de pacientes (PDX) nos quais amostras de tumor ressecadas cirurgicamente são enxertadas em camundongos imunocomprometidos tornaram-se uma alternativa atraente, pois podem ser transplantados por várias gerações e refletem com mais eficiência a heterogeneidade do tumor do que os xenoenxertos derivados de linhagens de células cancerígenas humanas. Uma limitação ao uso de PDXs é que eles são difíceis de transfectar ou transduzir para introduzir repórteres rastreáveis ou para manipular a expressão gênica. O protocolo atual descreve métodos para transduzir células tumorais dissociadas de PDXs com alta eficiência de transdução e o uso de PDXs marcados para modelos experimentais de metástases de câncer de mama. O protocolo também demonstra o uso de PDXs marcados em modelos experimentais de metástase para estudar o processo de colonização de órgãos da cascata metastática. As metástases para diferentes órgãos podem ser facilmente visualizadas e quantificadas usando imagens bioluminescentes em animais vivos ou expressão de GFP durante a dissecção e em órgãos excisados. Esses métodos fornecem uma ferramenta poderosa para estender o uso de vários tipos de PDXs à pesquisa de metástases.

Este método descreve a transdução de células de cancro da mama PDX-dissociadas utilizando título elevado vectores lentivirais pSIH1-H1-copGFP-T2A-puro e fago-EF1aL-luciferase-UBC-W-GFP. Estes vectores expressam um marcador fluorescente que permite estimar a eficiência da transdução in vitro, tão cedo quanto 24 h após a infecção (Figura 1a). Para a maioria das PDXs, expressão de GFP será atrasado até 72 h após a infecção (Figura 1b), neste moment...

Descreve-se um método para rotulagem de xenoenxertos estável derivado do doente (PDXs) com partículas lentivirais que expressam a proteína e repórteres de luciferase fluorescente verde. Este método permite acompanhar o crescimento de PDXs no sítio primário, bem como a detecção de metástases espontâneas e experimentais que utilizam em sistemas de imagem in vivo.

Rotulagem de cancro da mama xenoenxertos derivados do paciente com rastreáveis ​​Repórteres para o crescimento de tumores e metástases Estudos

The use of preclinical models to study tumor biology and response to treatment is central to cancer research. Long-established human cell lines, and many ...

O objetivo geral deste protocolo de transdução é introduzir de forma estável genes repórter em xenografias derivadas de pacientes, ou PDXs, para facilitar seu uso em modelos experimentais e de metástase espontânea. Este método pode ajudar a responder perguntas-chave na pesquisa do câncer, como a extensão da metástase extracutânea a partir de xenografias derivadas de pacientes. A principal vantagem desta técnica é que os PDX marcados podem ser rastreados, por meio de imagem in vivo, facilitando a avaliação de metástases específicas e organizadas sem a necessidade de análise histológica extensiva após a morte.Demonstrará este protocolo Jessica Finlay-Schultz, uma pós-doutoranda, que aplica rotineiramente este protocolo para a marcação de xenografias derivadas de pacientes com câncer de mama. Utilizando técnica asséptica, comece usando um bisturi para cortar a pele ao redor do tumor. Em seguida, puxe a pele com pinça e use um bisturi limpo para separar a pele do tumor.Quando o tumor estiver completamente exposto, utilize um conjunto limpo de pin&ccedil;as e bisturi para transferir o tecido para cinco mililitros de meio de lavagem sobre gelo. Em seguida, descarte o meio e lave o tumor duas ve

labeling-breast-cancer-patient-derived-xenografts-with-traceable

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Tomografia de fluorescência difusa oferece uma abordagem de custo relativamente baixo e com elevado potencial de todo a...

Tomografia Computadorizada guiada por tomografia difusa no domínio do tempo de fluorescência em pequenos animais para localização de biomarcadores de câncer

O vídeo a seguir descreve uma técnica de transdução para rotular células tumorais PDX (xenoenxertos derivados de pacientes), que é usada para introduzir repórteres de proteína fluorescente verde e luciferase que expressam lentivírus na célula tumoral in vitro.

Transdução para Marcar Células Tumorais PDX: Introdução do Marcador Fluorescente que Expressa Lentivírus na Célula Tumoral In Vitro

Este manuscrito detalha um método usado para gerar xenoenxertos derivados de pacientes com câncer de próstata (PDXs) a partir de células tumorais circulantes (CTCs). A geração de modelos PDX a partir de CTCs fornece um modelo experimental alternativo para estudar o câncer de próstata; o tumor mais comumente diagnosticado e uma causa frequente de morte por câncer em homens.

Geração de paciente com câncer de próstata Derivado modelos de xenotransplante de células tumorais circulantes

A metástase do câncer de ovário é caracterizada por numerosas lesões intraperitoneais difusas, de modo que a quantificação visual precisa da carga tumoral é um desafio.  Aqui, descrevemos um método para quantificação in situ e ex vivo da carga tumoral metastática usando células tumorais marcadas com proteína fluorescente vermelha (RFP) e imagens ópticas.

A quantificação da Intra-peritoneal Ovarian Cancer Metástase

Aqui descrevemos o modelo e a abordagem para estudar as funções dos macrófagos alveolares pulmonares na metástase do câncer. Para demonstrar o papel dessas células na metástase, foi utilizado o modelo singênico (4T1) de câncer de mama em conjunto com a depleção de macrófagos alveolares com lipossomas de clodronatos.

Estudar o papel dos macrófagos alveolares em câncer de mama metastático

Descreveremos um protocolo para pré-clínicos em vivo rastreamento de metástases. É baseado em um repórter de radionuclídeos-fluorescência combinando o symporter de iodeto de sódio, detectado pelo não-invasiva [18F] tetrafluoroborate-animal de estimação e uma proteína fluorescente para confirmação simplificada ex vivo . O método é aplicável para pré-clínicos na vivo celular rastreamento além da biologia do tumor.

Radionuclídeo-fluorescência Gene do repórter de imagem para controlar a progressão do Tumor em modelos de roedores Tumor

Aqui, apresentamos um protocolo utilizar injeção guiada por ultra-som de neuroblastoma (NB) e células (ES) de sarcoma de Ewing (estabeleceu linhas celulares e células tumorais do paciente-derivado) biologicamente relevantes locais para criar modelos pré-clínicos confiáveis para câncer pesquisa.

Utilização do ultra-som guiado implantação celular tecido-dirigido para o estabelecimento de Xenografts biologicamente relevantes Tumor metastático

Este trabalho predefine um protocolo avançado para avaliar com precisão o carregamento de tumores por meio da detecção de sinais de proteína fluorescente verde e bioluminescência, bem como a integração da técnica de detecção molecular quantitativa.

Estudando o câncer de mama triplo negativo usando modelo de câncer de mama ortotópico

Aqui apresentamos um protocolo para testar a eficácia de terapias-alvo selecionadas com base na composição genômica de um tumor. O protocolo descreve a identificação e validação de rearranjos estruturais de DNA, o enxerto dos tumores dos pacientes em camundongos e as respostas de teste a medicamentos correspondentes.

Testando terapias-alvo em câncer usando análise estrutural de alteração de DNA e xenoenxertos derivados do paciente

O manuscrito descreve uma metodologia para o estabelecimento, bem como o monitoramento longitudinal do crescimento de metástases pulmonares espontâneas de tumores de mama injetados ortotopicamente, passíveis de intervenção em todos os estágios da cascata metastática.

In vivo Imagem para medir metástase pulmonar espontânea de células tumorais de mama injetadas ortotopicamente

Este protocolo descreve um método eficiente e não cirúrgico para a implantação ortotópica de xenoenxertos derivados de pacientes com câncer de mama em camundongos. A técnica envolve a dissociação enzimática do tumor seguida de injeção direta nas bolsas de gordura mamária, permitindo a implantação de alto rendimento. A validação abrangente garante a fidelidade do modelo, facilitando estudos rigorosos em vários subtipos de câncer de mama.

Dissociação de alto rendimento e implantação ortotópica de xenoenxertos derivados de pacientes com câncer de mama

Aprenda a rotular xenoenxertos derivados do paciente com vetores lentivirais expressando GFP e luciferase para rastreamento de crescimento tumoral e metástases por imagem in vivo.

Rotulagem de cancro da mama xenoenxertos derivados do paciente com rastreáveis ​​Repórteres para o crescimento de tumores e metástases Estudos (Vídeo) | JoVE Journal

Rotulagem de cancro da mama xenoenxertos derivados do paciente com rastreáveis ​​Repórteres para o crescimento de tumores e metástases Estudos

Explorar mais vídeos

Rotulagem de cancro da mama xenoenxertos derivados do paciente com rastreáveis Repórteres para o crescimento de tumores e metástases Estudos