Avaliação da atividade de reparo de quebra de fita dupla de DNA usando ensaios repórter de alto rendimento e quantitativos baseados em luminescência

A Artios está desenvolvendo novos medicamentos anticâncer direcionados à resposta a danos no DNA. Para permitir isso, desenvolvemos uma série de novos ensaios para medir a atividade de reparo do DNA celular. Esses ensaios tiveram um grande impacto em nossos programas, levando a ativos em estágio clínico sendo testados em pacientes com altas necessidades médicas não atendidas.

Medir com precisão a atividade celular no alvo é essencial para o progresso de novas terapias direcionadas. A geração de ensaios para fatores de reparo de DNA com as propriedades necessárias para alimentar uma campanha eficiente de descoberta de medicamentos tem sido um desafio, seja a necessidade de alto rendimento, sinal-ruído robusto, retorno rápido e, idealmente, portabilidade para diferentes sistemas biológicos. Desenvolvemos um conjunto de ensaios repórter robustos, quantitativos e tituláveis baseados em luminescência para medir a proficiência de quatro principais vias de reparo de ruptura de fita dupla, recombinação homóloga, junção de extremidade não homóloga, junção de extremidade mediada por microhomologia e recozimento de fita simples.

Esses ensaios repórter são validados como reparo dependente da via de leitura, são sensíveis à modulação farmacológica e têm um tempo de resposta rápido. Os substratos de reparo que desenvolvemos são extracromossômicos, portanto, podem ser transfectados transitoriamente em modelos de interesse e facilmente dimensionados para um formato de alto rendimento. Acreditamos que nossos sistemas de ensaio têm um lugar importante para permitir a descoberta de medicamentos DDR, mas também para aprofundar nossa compreensão da biologia DDR de forma mais ampla.

A este respeito, esperamos que os métodos ajudem a acelerar a identificação e o processamento de novos alvos de drogas, levando a medicamentos para doenças como o câncer, onde há alta necessidade médica não atendida.