Name: Um método simples e rápido para isolamento simultâneo de ilhotas primárias e células acinares pancreáticas primárias de camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 39 s
Description: Aprenda um método simplificado para isolar simultaneamente ilhotas pancreáticas e células acinares de camundongos sem necessidade de perfusão especializada. Esta técnica acessível permite estudar a comunicação intercelular na patogênese do diabetes.

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<ol><li>Manrai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+as+a+consequence+of+acute+severe+pancreatitis%3A+unraveling+the+mystery%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus as a consequence of acute severe pancreatitis: unraveling the mystery.</a> World J Diabetes. 14 (8), 1212-1225 (2023).</li>
<li>García-Compeán, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-acute+pancreatitis+diabetes%3A+a+complication+waiting+for+more+recognition+and+understanding%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Post-acute pancreatitis diabetes: a complication waiting for more recognition and understanding.</a> World J Gastroenterol. 29 (28), 4405-4415 (2023).</li>
<li>Shen, H. N., Yang, C. C., Chang, Y. H., Lu, C. L., Li, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+diabetes+mellitus+after+first-attack+acute+pancreatitis%3A+a+national+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Risk of diabetes mellitus after first-attack acute pancreatitis: a national population-based study.</a> Am J Gastroenterol. 110 (12), 1698-1706 (2015).</li>
<li>Hohmeier, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+INS-1-derived+cell+lines+with+robust+ATP-sensitive+K%E2%81%BA+channel-dependent+and+-independent+glucose-stimulated+insulin+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Isolation of INS-1-derived cell lines with robust ATP-sensitive K⁺ channel-dependent and -independent glucose-stimulated insulin secretion.</a> Diabetes. 49 (3), 424-430 (2000).</li>
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<li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> J Vis Exp. (88), e50374(2014).</li>
<li>Villarreal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-efficiency+protocol+for+pancreatic+islet+isolation+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple high-efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice.</a> J Vis Exp. (150), e57048(2019).</li>
<li>Huang, C., Gu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+isolation+of+functional+islets+from+neonatal+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Effective isolation of functional islets from neonatal mouse pancreas.</a> J Vis Exp. (119), e55160(2017).</li>
<li>Petrov, M. S., Yadav, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+epidemiology+and+holistic+prevention+of+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global epidemiology and holistic prevention of pancreatitis.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (3), 175-184 (2019).</li>
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<li>Modenbach, J. M., Möller, C., Asgarbeik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+analyses+of+cystatin-C+dimers+and+cathepsin-B+reveals+a+trypsin-driven+feedback+mechanism+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Biochemical analyses of cystatin-C dimers and cathepsin-B reveals a trypsin-driven feedback mechanism in acute pancreatitis.</a> Nat Commun. 16 (1), 1702(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0,22 & mu; Filtro M</td><td>Millex</td><td>SLGPR33RB</td><td>Filtre a solução preparada de P de colanase</td></tr><tr><td>0,25 M cloreto de cálcio (Estéril)</td><td>Beyotime</td><td>ST365</td><td>Via de sinalização dependente de cálcio para ativar a secreção de insulina</td></tr><tr><td>1 ml de seringa</td><td>Jierui</td><td>10084692516405</td><td>Usado para perfusão de colagenase P no tecido pancreático.</td></tr><tr><td>Solução de tribromoetanol 1,25%</td><td>Beijing Yosida Biotechnology Co., Ltd.</td><td>JT0781</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Tubo centrífugo de 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30121589</td><td>Colete o supernadante da célula para centrifugação e armazenamento.</td></tr><tr><td>1x Hank' Solução salina balanceada</td><td>Biosharp</td><td>BL561A</td><td>Prepare a solução de colagênase P e enxágue o tecido pancreático</td></tr><tr><td>Placa de cultura celular de 12 poços</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3921</td><td>Segure o tecido pancreático e a acina extraída da cultura</td></tr><tr><td>Tubo centrífugo de 15 mL</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-15A</td><td>Segurando soluções durante o experimento</td></tr><tr><td>Placa de cultura celular de 24 poços</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3922</td><td>Cultura dos ilhéus extraídos</td></tr><tr><td>40-mesh&nbsp; Peneira</td><td>Instrumentos Weidan</td><td>N/A</td><td>Filtro do tecido pancreático</td></tr><tr><td>Pipeta Pasteur de 5 mL</td><td>Biosharp</td><td>BS-XG-03L</td><td>Pipetar líquidos e perturbar fisicamente o tecido pancreático</td></tr><tr><td>Tubo centrífuga de 50 mL</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>CT-002-50A</td><td>Segurar as soluções durante o experimento, contendo tecidos e centrifugar</td></tr><tr><td>Pratos de cultura celular de 60 mm</td><td>Beijing Labgic Technology Co., Ltd.</td><td>12211</td><td>Recipiente para armazenar meio de cultura contendo ilhotas para fácil colheita</td></tr><tr><td>Solução de etanol 75%</td><td>HYNAUT</td><td>N/A</td><td>Deixe os camundongos de molho para desinfecção.</td></tr><tr><td>Adobe Photoshop 2023</td><td>Adobe Inc.</td><td>N/A</td><td>Gerar imagens.</td></tr><tr><td>Centrífuga Beckman Allegra X-12/X-12R</td><td>BECKMAN</td><td>Allegra X-12/X-12R</td><td>Centrífuga</td></tr><tr><td>Albumina sérica bovina (BSA)-V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td>Mantenha a função fisiológica normal das ilhotas e use (it/this) para preparar soluções de glicose de diferentes concentrações.</td></tr><tr><td>Mouses C57BL/6J, grau SPF, 6&ndash; 8 semanas, pesando 18 e traço; 25 g</td><td>Centro de Animais de Laboratório da Universidade Médica Naval &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit de Ensaio de Viabilidade e Citotoxicidade das Células de Calceína/PI</td><td>Beyotime</td><td>C2015L</td><td>Detectar a viabilidade celular e a citotoxicidade das células animais com base na coloração de dupla fluorescência de Calcein-AM (Calcein AM) e Propidium iodeto (PI) de células viáveis e mortas simultaneamente.</td></tr><tr><td>Cloreto de cálcio (anidro)</td><td>Sangon Biotech</td><td>10043-52-4</td><td>Prepare a solução de colagenose P</td></tr><tr><td>Filtro celular (100 & mu; m)</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-XBS</td><td>Filtragem de células acinares</td></tr><tr><td>Colagenase P</td><td>Sigma</td><td>11213857001</td><td>Tecido pancreático digerido</td></tr><tr><td>Solução de D-(+)-glicose (20%, Estéril)</td><td>Beyotime</td><td>ST491</td><td>Estimule a secreção de insulina dos ilhéus.</td></tr><tr><td>DMEM básico (1x) (Dulbecco' s Eagle Medium modificado)</td><td>Gibco</td><td>C11995500BT</td><td>Cultura de células acinares</td></tr><tr><td>Soro fetal bovino (FBS)</td><td>Biowest</td><td>S140B-500</td><td>Prepare o meio de cultura</td></tr><tr><td>Solução estéril PREMIUM da Ficoll-Paque</td><td>Cytiva</td><td>17544203</td><td>Meio do gradiente de densidade para estratificação do gradiente de densidade</td></tr><tr><td>GraphPad Prism 8.0.1</td><td>GraphPad Software, LLC</td><td>N/A</td><td>Gerar imagens e realizar análises estatísticas.</td></tr><tr><td>Solução HEPES (1 M)</td><td>Biosharp</td><td>BL1061A</td><td>Prepare a solução de colagenose P</td></tr><tr><td>Centrífuga de alta velocidade/refrigerada</td><td>Sigma</td><td>3K15</td><td>Centrífuga</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Laboratório de Instrumentação Óptica e Computacional dos Institutos Nacionais de Saúde (LOCI)</td><td>N/A</td><td>Analise imagens de fluorescência celular e calcule a viabilidade celular.</td></tr><tr><td>Microscópio Biológico Invertido</td><td>Leica</td><td>N/A</td><td>Observe a morfologia celular e selecione as ilhotas.</td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência invertida</td><td>OLYMPUS</td><td>IX73</td><td>Observe os sinais fluorescentes celulares e capture imagens fluorescentes.</td></tr><tr><td>Buffer de bicarbonato de Krebs-Ringer HEPES</td><td>LEAGENE</td><td>CZ0103</td><td>Mantenha a função fisiológica normal das ilhotas e use (it/this) para preparar soluções de glicose de diferentes concentrações.</td></tr><tr><td>Kit ELISA INS (Insulina) de Mouse</td><td>Wuhan Fine Biotech Co., Ltd.</td><td>EM0260</td><td>Detecte o nível de secreção de insulina nos ilhéus.</td></tr><tr><td>Pinça oftalmologista (10 cm, curva com gancho)</td><td>Dispositivos Médicos Qingyi</td><td>N/A</td><td>Auxiliar na dissecação</td></tr><tr><td>Pinça oftalmologista (10 cm, reta com o dente)</td><td>Dispositivos Médicos Qingyi</td><td>N/A</td><td>Auxiliar na dissecação e separação repentina do tecido pancreático e na extração do tecido pancreático</td></tr><tr><td>Solução de estreptomicina para penicilina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Prepare o meio de cultivo para evitar contaminação</td></tr><tr><td>RPMI-1640 médio,</td><td>KeyGEN BioTECH</td><td>KGL1501-500</td><td>Termine a solução digestiva P da colagênase e cultive as ilhotas</td></tr><tr><td>Inibidor de tripsina a partir de Glycine max (soja)</td><td>Sigma</td><td>T6522</td><td>Prepare a solução de colagenose P</td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica (10 cm, ponta reta)</td><td>Dispositivos Médicos Qingyi</td><td>N/A</td><td>Assistência na anatomia e corte do tecido pancreático em pequenos pedaços</td></tr><tr><td>Banho-maria</td><td>OAICLAB</td><td>AI-HF</td><td>Mantenha a temperatura de digestão.</td></tr><tr><td>Kit de ensaio de atividade de &alfa;-amilase e &beta;-amilase</td><td>Elabscience</td><td>E-BC-K006-M</td><td>Detectar os níveis de amilase secretada pelas células acinares sob diferentes condições</td></tr></tbody></table>

um método simples e rápido para isolamento simultâneo de ilhotas primárias e células acinares pancreáticas primárias de camundongos

A Simple and Rapid Method for Simultaneous Isolation of Primary Islets and Primary Pancreatic Acinar Cells from Mice

Um método simples e rápido para isolamento simultâneo de ilhotas primárias e células acinares pancreáticas primárias de camundongos

In the research on the pathogenesis of post-acute pancreatitis diabetes mellitus (PPDM-A), abnormal bidirectional communication between pancreatic acinar ...

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Medicine

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Uma descrição detalhada de isolamento de ilhotas do rato está descrito por meio da técnica de canulação na pancreático ductal in situ e a perfusão de uma combinação de colagenase purificados e protease neutra.

Rato Ilhéu de Langerhans isolamento usando uma combinação de colagenase purificada e Protease Neutra

Este vídeo descreve a técnica usada para isolar células acinares pancreáticas - células exócrinas - contendo uma variedade de enzimas digestivas. As células acinares primárias são úteis no estudo ex vivo da metaplasia acinar-ductal (ADM) - um evento precoce no desenvolvimento do câncer de pâncreas.

Isolamento primário de células acinares: um método para isolar células acinares do pâncreas de camundongos

As ilhotas pancreáticas, também chamadas de ilhotas de Langerhans, são um aglomerado de células endócrinas que produzem hormônios para a regulação da glicose e outras funções biológicas importantes. Este protocolo explica um método para isolar ilhotas pancreáticas pela primeira vez perfundindo colagenase via ampola de Vater para digerir o tecido pancreático exócrino e uma centrifugação simplificada com gradiente de densidade para purificar as ilhotas de camundongos.

Isolamento de ilhotas pancreáticas por meio de perfusão de colagenase: um método enzimático para isolar células de ilhotas pancreáticas

Ensaiando in vitro a função das células β usando o mouse ilhotas isoladas de Langerhans é um componente importante no estudo da fisiopatologia do diabetes e terapêutica. Embora muitas aplicações a jusante estão disponíveis, este protocolo descreve especificamente a medida da intracelular monofosfato cíclico de adenosina (AMPc) como um parâmetro essencial para definir a função das células β.

Um Método para Mouse ilhotas pancreáticas Isolamento e intracelular cAMP Determinação

Nesta publicação, é descrito um procedimento rápido e conveniente para o isolamento e cultura de células acinares pancreáticas primárias do pâncreas murino. Este método constitui uma ferramenta valiosa para o estudo da fisiologia das células primárias normais do pâncreas fresco / não transformada exócrinas.

Isolamento e Cultura do mouse primárias células pancreáticas acinares

Apresentamos aqui um protocolo para o isolamento de ilhotas do modelo de camundongo com diabetes tipo 2, Leprdb e detalhes de um ensaio de células vivas para medição da secreção de insulina de ilhotas intactas que utiliza microscopia de 2 fótons.

Lepr<sup&gt; Db</sup&gt; Mouse Modelo de Diabetes Tipo 2: Isolamento de ilhotas pancreáticas e células vivas 2-Photon Imagens de ilhotas intactas

Nós descrevemos um protocolo aqui para isolar ilhotas intactas de ratos recém-nascidos. Pâncreas foi parcialmente digerido com colagenase, seguido por lavagem e colheita manual. 20 - 80 agrupamentos de ilhéus podem ser obtidos por pâncreas de ratinhos recém-nascidos, que são adequados para vários estudos da ilhota.

Isolamento eficaz de ilhotas funcionais a partir de ratinho neonato Pâncreas

Este protocolo da isolação da ilhotas descreveu uma rota nova da injeção do colagenase para digerir o tecido exócrina e um procedimento simplificado do inclinação para purificar os ilhotas dos ratos. Envolve a digestão enzimática, separação de gradiente/purificação, e Islet mão-picking. O isolamento bem-sucedido pode produzir 250 – 350 de alta qualidade e ilhotas totalmente funcionais por mouse.

Um protocolo de alta eficiência simples para isolamento de Islet pancreático de camundongos

Aqui nós apresentamos um protocolo para isolar células de ilhotas pancreáticas do mouse para as induções ROS de triagem pelos xenobióticos para identificar os potenciais químicos xenobióticos de diabetogenic.

Um rastreio de baseada em célula de murino ilhotas pancreáticas para produtos químicos ambientais Diabetogenic

Aqui, apresentamos um protocolo para imagens e quantificar a dinâmica do cálcio em populações heterogêneas de células, como células de ilhotas pancreáticas. Os repórteres fluorescentes são entregues na camada periférica de células dentro da ilhota, que é então imobilizada e imagemda, e a análise por célula da dinâmica da intensidade da fluorescência é realizada.

Dinâmica de cálcio de imagem em subpopulações de células de ilhotas pancreáticas do rato

Este protocolo descreve um método padronizado para colheita cirúrgica, digestão enzimática e purificação por gradiente de densidade de ilhéus pancreáticos de rato Lewis, permitindo preparações de alto rendimento e alta pureza para uso direto em transplantes ou estudos in vitro .

Isolamento e purificação de ilhotas pancreáticas a partir de ratos Lewis usando digestão enzimática e separação por gradiente de densidade

Aprenda um método simplificado para isolar simultaneamente ilhotas pancreáticas e células acinares de camundongos sem necessidade de perfusão especializada. Esta técnica acessível permite estudar a comunicação intercelular na patogênese do diabetes.

Um método simples e rápido para isolamento simultâneo de ilhotas primárias e células acinares pancreáticas primárias de camundongos (Vídeo) | JoVE Journal

Um método simples e rápido para isolamento simultâneo de ilhotas primárias e células acinares pancreáticas primárias de camundongos

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