Фиксация этанола и окрашивание DAPI: метод визуализации ДНК у C. elegans

- Начните с капли буферного раствора на предметном стекле микроскопа и перенесите неповрежденных червей в каплю. Как только черви окажутся на месте, используйте безворсовую ткань, чтобы впитать и удалить буфер. Закрепите образец, несколько раз промыв образцы 90% этанолом, давая ему испариться после каждого нанесения.

После того как этанол испарится после окончательной промывки, добавьте в образец раствор, содержащий краситель нуклеиновой кислоты DAPI. DAPI связывается преимущественно с адениновыми и тиминовыми основаниями в малой борозде ДНК. При связывании комплекс DAPI-DNA поглощает ультрафиолетовый свет и излучает видимый синий свет.

Затем добавьте консервант против выцветания, чтобы продлить срок хранения образца. Наклейте защитный лист и приклейте его к слайду. Затем используйте флуоресцентный микроскоп с синим фильтром для визуализации телец DAPI, которые, в зависимости от клетки и ее циклического статуса, могут представлять собой отдельные хромосомы, сестринские пары хроматид или целые ядра. В этом эксперименте мы будем подсчитывать окрашенные DAPI пары сестринских хроматид в ооцитах, чтобы идентифицировать тетраплоидные штаммы Caenorhabditis elegans.

- Тетраплоидные штаммы