Оценка влияния токсинов на развитие нейронной сети куриного эмбриона с использованием многоэлектродных матриц

Начните с адгезивных культур нейронов ранних эмбрионов цыплят на многоэлектродных матрицах, покрытых внеклеточным матриксом, или MEA.

Основание MEA содержит сетку крошечных электродов, которые регистрируют активность нейронов.

В тестовой культуре нейроны растут в присутствии токсина, в то время как в контрольной культуре нейроны растут без токсина.

Перед записью замените носители в обоих MEA на носители, не содержащие токсинов, и кратковременно инкубируйте.

Затем поместите одну MEA в записывающее устройство и начните запись.

Нейроны общаются с помощью электрических импульсов, называемых потенциалами действия или спайками.

В синапсе эти потенциалы действия запускают высвобождение нейротрансмиттеров, распространяя сигнал на следующий нейрон

Электроды MEA записывают спайки, генерируемые синаптически связанными нейронами.

В контрольных условиях здоровая зрелая нейронная сеть проявляет синхронную спайковую активность.

В тестовой культуре снижение спайков и синхронность указывают на нарушение созревания нейронной сети, вызванное токсином.

В день приобретения замените питательную среду свежей нейробазальной средой и верните матрицы в инкубатор CO₂ минимум за два часа до записи. Запустите программное обеспечение для записи и установите температуру многоэлектродной матрицы на 37 градусов Цельсия, нажав на значок температуры. Задайте параметры захвата, выбрав потоки на панели левого окна и кликнув правой кнопкой мыши по значку музы. Затем выберите «Добавить обработку и детектор шипов» и нажмите «ОК» во всплывающем окне. Spike Detector 6 от STD появится под именем файла.

Затем щелкните правой кнопкой мыши по детектору шипов, выберите «Добавить обработку и детектор всплесков» и нажмите «ОК» во всплывающем окне. Burst Detector ISI появится под значком музы. Затем щелкните правой кнопкой мыши по Детектору пакетов, выберите «Добавить обработку и компилятор нейронной статистики». Убедитесь, что во всплывающем окне выбраны параметры «Заголовок файла», «Агрегированная статистика скважины» и «Синхронность». Нажмите OK.

Компилятор статистики появится ниже. Нажмите на значок часов в нижней части экрана и измените информацию в разделе «Настройки» на запись каждые 5,1 минуты и запись на пять минут. Это будет запущено немедленно и выполнено один раз. После извлечения многоэлектродной матрицы из инкубатора поместите ее на записывающее устройство и зафиксируйте на месте. Начните запись сетевой активности, нажав на кнопку «Начать запись» в разделе запланированной записи.