Una introducción a la micropipeta

General Laboratory Techniques

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Summary

La micropipeta es un instrumento común del laboratorio utilizado para la transferencia de microvolúmenes de soluciones líquidas. Micropipettors vienen en una gama de tamaños para el movimiento exacto de los volúmenes entre 0,5 y 5000 μl y cada instrumento requiere uno de tres diferentes tamaño de puntas desechables. Micropipettors trabajo por desplazamiento de aire del vástago de la pipeta, permitiendo que el líquido impregne el vacío resultante. Sus usos incluyen transferencia de suspensiones celulares para una variedad de ensayos de la célula, cargando muestras de diferentes técnicas analíticas y alterar mecánicamente los tejidos en suspensiones celulares solo. Micropipettors son una herramientas muy útiles de laboratorio que son fáciles de usar con un poco de instrucción y práctica. En este video, Zeus muestran al usuario de primera vez todos los consejos, trucos y entresijos de utilizando una micropipeta en el laboratorio.

Cite this Video

JoVE Science Education Database. Técnicas generales de laboratorio. Una introducción a la micropipeta. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

La micropipeta es un instrumento importante utilizado para medir pequeños volúmenes de líquido con precisión. Esta herramienta de investigación, que puede encontrarse en numerosos laboratorios de investigación en todo el mundo, viene en varios formas y tamaños. Sin embargo, a pesar de la variación entre micropipettors, todos ellos funcionan de forma similar para medir con precisión las cantidades de microlitros de líquido. Micropipettors se utilizan con puntas desechables, que, como micropipettors, vienen en una gama de tamaños.

Micropipettors todos comparten los mismos componentes básicos para aspirar y dispensar líquidos. El émbolo se encuentra en la parte superior de la pipeta y se utiliza para elaborar o expulsión de líquido dependiendo de la posición que es presionado o liberado.

El dial de ajuste de volumen se utiliza para cambiar al volumen de líquido que se transferirá.

La pantalla de lectura de volumen se lee de arriba a abajo. Dependiendo de la micropipeta utilizada los números reflejan diferentes órdenes de magnitud para la medición de su volumen. Aquí puede ver una medición de 370 microlitros.

Puntas desechables se cargan en la parte inferior de la micropipeta.

Botón de expulsión de la punta y punta extraer trabajo de eje para puntas de pipeta de expulsión cuando tienen que ser desechados.

La familia de micropipeta incluye a varios miembros de diferentes tamaños que un rango preciso de volúmenes de transferencia.

Aquí puede ver la alineación familiar según los rangos de volumen que puede transferir cada uno de ellos. Por ejemplo, Papa P-1000 ofrece entre μl de 200-1000, mientras el bebé del grupo, P-2, transferencias entre 0.2-2 μl.

Cada uno de los miembros de la familia es reconocible por un número en la parte superior del émbolo, y por el color, que deja en claro quiénes son y cuánto volumen puede cómodamente transfieren.

En ocasiones, otros parientes de la micropipeta se mostrarán para un experimento, como tío P5000 P100 tía y primo de P10. Juntos, pueden ayudar esta familia extendida pasar líquido de 0.2-5000 μL en el volumen.

Para asegurar a una transferencia precisa y exacta de líquido, diferentes tamaños de puntas de pipetas, a menudo, pero no siempre, están codificados por color para facilitar su reconocimiento y se utilizan para diferentes tamaños de pipetas. Con respecto a volumen transferido, puntas micropipeta blanco de transferencia típicamente entre 0.5-2.5 μl, puntas amarillas son para 1-200 μl y puntas azules de 200 a 1000 μl.

Cuando se utiliza una micropipeta, primero escoge el instrumento con el rango apropiado para el volumen que desea transferir. Correcta elección de la pipeta puede significar la diferencia entre un experimento exitoso o fallido.

Para empezar, ajuste el control en el volumen deseado. Para aumentar el volumen de aspiración, gire el dial hacia la izquierda, pasando el volumen deseado por la tercera vuelta y luego disminuir lentamente hasta la marca final. Para disminuir el volumen, gire el dial hacia la derecha.

Tenga en cuenta que estos dígitos en la lectura de volumen tienen diferentes órdenes de magnitud dependiendo de la micropipeta. Por ejemplo, a la izquierda, vemos el P1000, 370 μl de la lectura. Hay un cero en miles lugar, 3 en los cientos de lugar y un 7 en las decenas del lugar. A la derecha es la P200, mostrando 159 μl con un 1 en las centenas el lugar, un 5 en las decenas lugar y un 9 en el lugar.

Una vez ajustado el volumen, seleccionar una punta.

Ahora, mantenga la micropipeta en posición vertical con la parte estrecha del cuerpo en la palma de su mano y la proyección sobre el dedo índice,

Ejerciendo una ligera presión para presionar el émbolo aproximadamente a mitad de camino la primera parada, o cuando usted comienza a sentirse más resistencia.

Esta acción desplaza el aire de la punta de la pipeta.

Mantener el émbolo presionado, sumerja la punta entre 1-3 mm en la muestra. Liberar suavemente el émbolo en la posición de reposo, esperar un segundo para que el líquido se desplace hacia la punta y luego extraiga la pipeta de la muestra.

Cuando el émbolo se suelta en la posición de reposo, el líquido se dibuja en el vacío creado por el aire desplazado.

Inspeccione la punta para confirmar la cantidad deseada de líquido fue elaborada y que la punta no contiene burbujas de aire.

Al transferir la muestra en el recipiente deseado, sostenga la micropipeta en un ángulo de 10-45° contra el interior pared de los vasos receptores. Esto evitará que las burbujas formando en la punta. Para expulsar el líquido Presione el émbolo suavemente hasta la parada 1 sin problemas, para comenzar a dispensar el líquido y luego, aplicando una resistencia más fuerte, presione el émbolo hasta el segundo tope para "soplar" la última gota de líquido desde la punta.

Retire completamente la punta de la nave y luego suelte el émbolo a la posición de reposo.

Ahora utilice el botón de expulsión para descartar cuidadosamente la punta de la pipeta en el receptáculo apropiado. Preste atención a lo que está haciendo, porque consejos expulsados pueden actuar como proyectiles y potencialmente pueden dañar a tus compañeros compañeros de laboratorio.

Para mantener funcionando bien micropipettors y preservar el mecanismo de ajuste de volumen interno, nunca gire el volumen por encima o por debajo del rango específico de la micropipeta. Usted puede romper el instrumento.

Para evitar la contaminación cruzada entre muestras, cambiar la punta después de cada transferencia de volumen.

Consistencia del operador es importante cuando se trabaja con micropipetters. Una presión de émbolo suave dará óptimos resultados experimentales. Finalmente, recuerda que para mantener su micropipettors en mejores condiciones, guarde siempre los instrumentos en posición vertical cuando no no estén en uso.

Ahora que hemos cubierto la operación básica y principios de la utilización de micropipettors, vamos a discutir algunas aplicaciones comunes de laboratorio para microvolume transferencias, así como las variaciones de este instrumento.

Micropipettors se utilizan con frecuencia para la transferencia de suspensiones celulares a las placas de cultivo para una variedad de experimentos.

En conjunto con consejos especializados, micropipettors puede utilizarse para cargar cuidadosamente las muestras para técnicas analíticas, como la electroforesis en gel de DNA.

Micropipettors puede utilizarse también para mechanichally la ruptura del tejido, para obtener suspensiones de la célula.

Variantes de la micropipeta, que funcionan basado en desplazamiento de aire, pueden también encontrarse en el laboratorio.

Pipetas de repetición permiten pipetear serie de volúmenes más pequeños después de una aspiración inicial de un mayor volumen de solución. Las pipetas son muy útiles para transferir el mismo volumen de muestra a un gran número de recipientes.

Pipetas multicanales se utilizan generalmente para transferir volúmenes en el rango 20-200 μl y son útiles para cargar filas enteras de 96 placas bien.

Sólo ha visto introducción de Zeus a la micropipettors.

En este video repasamos: una micropipeta de qué es y cómo funciona, cómo aspirar y dispensar una volumen líquido de muestra, algunas medidas de seguridad y diferentes aplicaciones de su micropipettors. Gracias por ver y recuerda escoger la pipeta adecuada para sus experimentos.

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