הליך כירורגי עבור משלוח של תא גזע עובריים שמקורם בתאי האנדותל כדי hindlimb איסכמי הוא הוכיח, עם מעקב פולשני על ידי הדמיה פליטת אור.
Abstract
עורקים היקפית (PAD) המחלה נובעת היצרות של העורקים ההיקפיים המספקים דם מחומצן וחומרים מזינים ברגליים ובכפות הרגליים, פתולוגיה זו גורמת לתופעות כגון צליעה לסירוגין (כאב בהליכה), כיבים כואבים איסכמי, או אפילו איבר סכנת נמק. מקובל לחשוב כי האנדותל של כלי הדם, monolayer של בתאי האנדותל המשקיעה את פני השטח luminal של כל כלי הדם הלימפה, משחקת תפקיד דומיננטי הומאוסטזיס של כלי הדם ואת התחדשות כלי הדם. כתוצאה מכך, גזע מבוססי תאים התחדשות של האנדותל עשויה להיות גישה מבטיחה לטיפול PAD.
בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את השתלת תא גזע עובריים (ESC), שמקורם בתאי האנדותל לטיפול איסכמיה hindimb חד צדדית כמודל של PAD, ואחריו מעקב פולשני של התא הישרדות ביות ועל ידי הדמיה פליטת אור. החומרים הספציפיים ונהלים למסירה תא הדמיה יתוארו. פרוטוקול זה עוקב אחר פרסום בתיאור אינדוקציה של איסכמיה hindlimb ידי Niiyama ואח' 1.
Protocol
1. דיפרנציאציה של ESCs Murine לתאי אנדותל פרוטוקול עבור המבדילים ESCs לתאי אנדותל מתואר במקומות אחרים ולא מוקד בפרוטוקול זה 2,3. בקצרה, התאים מותר להבדיל, ואת התאים חיובית עבור סמנים האנדותל כגון CD31 או cadherin אנדותל כלי הדם…
Discussion
ESCs הם מקור התא מבטיח לטיפול איסכמיה רקמות בגלל הפלסטיות של בידול שלהם ויכולתם להצמיח שושלות תאים הכולל את כל שלוש שכבות נבט, כולל בתאי האנדותל. כדי להתגבר על חששות אתיים הקשורים ESCs, הנגרם לתאי גזע pluripotent (iPSCs) עשוי להיות חלופה pluripotent בתאי גזע ממקור זה מתגבר על שיקולים אתיים. מלבד ESCs…
Acknowledgements
המחברים מודים אנדריאה Axtell, סטושי Itoh, MD, ג'ף Velotta, MD, גרנט הויט, רוברט ג רובינס, MD, יו ג'ין, MD, טים דויל, PhD, והדמיה הקטן סטנפורד בעלי חיים Core לקבלת סיוע טכני. המחברים גם להודות AM ביקפורדס, Inc התמיכה של ציוד וטרינרי. מחקר זה נתמך על ידי מענקי מחקר מן המכון הלאומי לבריאות (HL-75774 R01, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), טבק קשורות קליפורניה מחלות תוכנית המחקר של אוניברסיטת קליפורניה (15IT-0257 ו-1514RT 0169) , ומכון קליפורניה עבור הרגנרציה לרפואה (RS1-00183).
NH נתמך על ידי מענק של איגוד הלב האמריקני. איגוד הלב יכול.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Surgical tools
Tool
Fine Science Tools
Syringe needle
Tool
BD
28G insulin syringe is preferred
Phosphate Buffered Saline
Reagent
Invitrogen
D-luciferin
Reagent
Biosynth International, Inc
Prepare D-luciferin in advance into filtered stock solutions of 15 mg/mL in PBS
IVIS 200 Bioluminescence imaging system and acquisition software
Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Gambhir, S. S., Cooke, J. P. Embryonic Stem Cell-Derived Endothelial Cells for Treatment of Hindlimb Ischemia. J. Vis. Exp. (23), e1034, doi:10.3791/1034 (2009).