هذا الإجراء يستخدم الضوء الأزرق تنشيط قناة الطحالب والخلايا أدوات محددة التعبير الجيني لاستحضار إمكانات متشابك مع نبضات ضوئية عند تقاطع العصبية والعضلية (NMJ) في<em> ذبابة الفاكهة</em> اليرقات. هذه التقنية هي رخيصة وسهلة الاستخدام البديل لتحفيز الكهربائي شفط للدراسات في علم وظائف الأعضاء متشابك البحوث والمختبرات التعليمية.
Abstract
و<em> ذبابة الفاكهة</emوقد ثبت> إعداد الاعصاب اليرقات ليكون أداة مفيدة لدراسة علم وظائف الأعضاء متشابك<sup> 1،2،3</sup>. في الوقت الراهن ، والوسيلة الوحيدة المتاحة لاستحضار إمكانات صلي مثير (EJPs) في إعداد هذا ينطوي على استخدام أقطاب الشفط. في كل من مختبرات البحث والتدريس ، والطلاب في كثير من الأحيان صعوبة المناورة والتلاعب في هذا النوع من القطب محفزة. في العمل الحالي ، وتبين لنا كيفية حفز الطاقات بعد متشابك في NMJ اليرقات من دون استخدام أقطاب الشفط. بالإعراب عن channelrhodopsin2 (ChR2)<sup> 4،5،6</sup> في<em> ذبابة الفاكهة</em> الخلايا العصبية الحركية باستخدام<em> GAL4 – UAS</em> النظام<sup> 7</sup> ، وإجراء تغييرات طفيفة على منصة الكهربية الأساسية ، وكنا قادرين على استحضار موثوق EJPs مع نبضات من الضوء الأزرق. هذه التقنية يمكن أن تكون ذات فائدة خاصة في مختبرات الفسيولوجيا العصبية تدريس الطالب حيث الوقت والموارد تلاعب الممارسة محدودة.
Protocol
الجزء 1 : رعاية الحيوان والصلبان الوراثية الحفاظ على UAS – ChR2 وخطوط الطيران OK371 – GAL4 في زجاجات تحتوي على سائل الاعلام منفصلة تطير القياسية 8. جمع العذارى من خطوط الطيران OK371 – GAL4<…
Discussion
الخطوات الحاسمة إشراك كل من التشريح الأولي ودخول الخلايا العضلية. إذا كان يتم قطع الأعصاب أو تلف العضلات أثناء تشريح الأولية أنه من الصعب الاستمرار في بقية التجربة. أثناء تشريح ، يجب على المرء أن يكون حذرا للغاية لمقص تشريح زاوية صعودا أكبر قدر ممكن من خلال شق الظهري?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح RO1GM – 33205 067284 وMH – LC لغريفيث وصيف جامعة برانديز المنح الدراسية الجامعية لبحوث Hornstein نيوجيرسي. وأجريت تجارب أولية لهذه التقنية في المختبر البيولوجي البحري كجزء من الأنظمة العصبية والسلوكية 2008 دورة صيفية (NIMH المنحة : MH059472 R25) في وودز هول ، MA.
Hornstein, N. J., Pulver, S. R., Griffith, L. C. Channelrhodopsin2 Mediated Stimulation of Synaptic Potentials at Drosophila Neuromuscular Junctions. J. Vis. Exp. (25), e1133, doi:10.3791/1133 (2009).