פרוצדורה זו משתמשת ערוץ תכלת המופעל אצות תא ספציפי כלי הביטוי הגנטי לעורר פוטנציאלים סינפטיים עם להבזקי האור בצומת neuromuscular (NMJ) ב<em> תסיסנית</em> הזחלים. טכניקה זו היא זולה וקלה לשימוש חלופה גירוי יניקה אלקטרודה ללימודי פיזיולוגיה הסינפטי מחקר ומעבדות הוראה.
Abstract
<em> תסיסנית</em> הכנה הזחל neuromuscular הוכיחה להיות כלי שימושי לחקר הפיזיולוגיה הסינפטי<sup> 1,2,3</sup>. נכון לעכשיו, רק את האמצעים לעורר junctional פוטנציאלים מעוררים (EJPs) בהכנה זו כרוכה בשימוש אלקטרודות יניקה. הן במחקר והן מעבדות ההוראה, התלמידים מתקשים לעיתים קרובות תמרונים וטיפול זה סוג של אלקטרודה מגרה. בעבודה הנוכחית, אנו מראים כיצד מרחוק לעורר פוטנציאלים סינפטיים ב NMJ הזחל ללא שימוש אלקטרודות יניקה. על ידי הבעת channelrhodopsin2 (ChR2)<sup> 4,5,6</sup> ב<em> תסיסנית</em> מנוע הנוירונים באמצעות<em> GAL4-כטב"מ</em> מערכת<sup> 7</sup>, וביצוע שינויים קלים לבוש electrophysiology בסיסיים, הצלחנו לעורר אמין EJPs עם פולסים של אור כחול. טכניקה זו יכולה להיות שימוש מסוים במעבדות הוראה הנוירופיזיולוגיה שם תלבושת תלמיד לתרגל זמן ומשאבים מוגבלים.
Protocol
חלק 1: טיפול בבעלי חיים וחוצה גנטי שמור כטב"מ-ChR2 ו-OK371 GAL4 קווי לטוס בבקבוקים נפרד המכיל התקשורת לטוס תקן 8. איסוף בתולות OK371-GAL4 קווי לעוף הזכרים של כטב"מים-ChR2 הקווים. <li styl…
Discussion
צעדים קריטיים לערב גם את לנתיחה הראשוני של הכניסה לתאי שריר. אם עצבים נחתכים או שריר פגום במהלך הניתוח הראשוני קשה כדי להמשיך את שאר הניסוי. במהלך הניתוח, יש להיזהר מאוד זווית לנתח מספריים כלפי מעלה ככל האפשר במהלך חתך הגבי. במהלך השלב המכריע השני, נכנסים לתא השריר, יש …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות מענקים RO1GM-33205 ו MH-LC עד 067,284 גריפית על ידי מלגה לתואר ראשון באוניברסיטת ברנדייס בקיץ מחקר NJ הורנשטיין. ניסויים ראשוניים של טכניקה זו בוצעו בשלב המעבדה לביולוגיה ימית במסגרת מערכות עצביות 2008 ובקיץ התנהגות כמובן (NIMH מענק: R25 MH059472) ב וודס הול, מסצ'וסטס.
Hornstein, N. J., Pulver, S. R., Griffith, L. C. Channelrhodopsin2 Mediated Stimulation of Synaptic Potentials at Drosophila Neuromuscular Junctions. J. Vis. Exp. (25), e1133, doi:10.3791/1133 (2009).