Dieses Video-Artikel beschreibt Schritt für Schritt, wie man eine Samenprobe Prozess zu einer qualitativ hochwertigen Fluoreszenz zu erreichen<em> In situ</em> Hybridisierung auf menschliche Spermien. Die Vorbereitungen erhalten können Aneuploidietestung im Zusammenhang mit der klinischen Diagnose verwendet werden.
Aneuploidien sind die häufigsten Chromosomenstörungen beim Menschen. Die meisten dieser Veränderungen ergeben sich aus meiotischen Fehler bei der gametogenic Prozess bei den Eltern. In der menschlichen Männchen, können diese Fehler auf die Produktion von Spermien mit numerischen Chromosomenanomalien, die eine erhöhte Gefahr der Übertragung dieser Anomalien auf die Nachkommen vertreten führen.
Aus diesem Grund hat die Technik der Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) auf Spermakerne zu einem Protokoll weithin im Zusammenhang mit der klinischen Diagnose integriert. Diese Praxis liefert eine Schätzung der Frequenzen von numerischen Chromosomenanomalien in den Keimzellen der Patienten, die zur genetischen Reproduktion Rat zu suchen.
Bis heute sind die Chromosomen am häufigsten in Spermien FISH Analyse mit einbezogen Chromosomen X, Y, 13, 18 und 21.
Dieses Video-Artikel beschreibt Schritt für Schritt, wie zu verarbeiten und zu befestigen ein menschliches Sperma Probe, wie man decondense und denaturieren die Spermien Chromatin, wie es weitergehen soll, um Spermien FISH Präparate zu erhalten, und wie die Ergebnisse am Mikroskop sichtbar zu machen. Besondere Hinweise über die wichtigsten Schritte gegeben werden, um optimale Ergebnisse zu erzielen.
Dieses Protokoll beschreibt, wie die menschliche Samenproben für den Erhalt von Spermien FISH Präparate Prozess. Mit diesem Protokoll ist es möglich, chromosomale Anomalien bei männlichen Keimzellen zu analysieren. Spermatozoen Aneuploidietestung hat Anwendungen entweder im Rahmen der Grundlagenforschung und in der reproduktiven Beratung der unfruchtbaren Männer. Obwohl in der klinischen Diagnostik der am häufigsten untersuchten Chromosomen X, Y, 13, 18 und 21, andere kommerzielle Sonden für eine breite Palette v…
The authors have nothing to disclose.
Diese Arbeit wurde von der Generalitat de Catalunya (2005-SGR00437) unterstützt. Die Autoren danken J. Blanco und F. Vidal für ihre Überwachung und Ermutigung, und J. Lucas für seine technische Unterstützung.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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1,4-Dithiothreitol (DTT) | Material | Roche | 10197777001 | |
2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol | Material | Roche | 10708976001 | |
Acetic acid | Material | Merck | 100.063 | |
AneuVysion® Multicolor DNA Probe Kit
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Material | Vysis Inc. | 32-161075
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Centrifuge 5804R | Tool | Eppendorf | ||
Centrifuge tube | Material | Nunc | 347856 | |
Coplin jar (glass) | Material | Barloworld Scientific | Hellendahl (ZCT278) | |
Coplin jar (plastic) | Material | Deltalab | 191087 | |
Cover slips (15×15) | Material | Knittel gläser | 4600115 | |
Cover slips (18×18) | Material | Knittel gläser | 4600118 | |
Diamond pencil | Material | Hammacher | 335117010 | |
Ethanol | Material | Merck | 100.983 | |
Formamide | Material | Roche | 11814320001 | |
Freezer | Tool | Zanussi | ||
Gloves | Material | Sanyc | 101/3300 | |
HYBrite™ | Tool | Vysis Inc. | ||
Immersion Oil | Material | Olympus | 35505 | |
Incubator | Tool | Heraeus | ||
Methanol | Material | Merck | 106.009 | |
Micropipette | Material | Labsystems | Finnpipette (4500000) | |
Micropipette replacement tip | Material | Daslab | 16-2001 | |
Nail varnish | Material | Quo-cosmetics | ||
Olympus BX60 epifluorescence microscope | Tool | Olympus | Equipped with a triple-band filter for DAPI/Texas Red/FITC and single-band filters for Aqua, FITC and Texas Red. | |
Pasteur Pipette | Material | Rubilabor | 211.0230 | |
Phase contrast microscope | Tool | Nikon Diaphot | ||
Plastic pipette (3ml) | Material | Deltalab | 200007 | |
Potassium chloride (KCl) | Material | Fluka | 60128 | |
Rubber cement | Material | Best-test | ||
Slides | Material | Knittel gläser | 4520022 | |
Slide Saver Boxes | Material | Deltalab | 19276.1 | |
Sterile container | Material | Deltalab | 409726 | |
Syringe | Material | PentaFerte | 002022300 | |
Thermometer | Material | Comark Instruments, Inc | KM12 | |
Tri-distilled water | Material | |||
Triton X-100 | Material | Sigma | 9002-93-1 | |
Tweezers | Material | B/Braun | Aesculap (BD224R) | |
Vertical laminar flow hood | Tool | Burdinola | OR-ST 1500 | |
Vortex mixer | Tool | Fisher Scientific | FB15012 | |
Water bath | Tool | Raypa® |