न्युट्रोफिल कोशिकी जाल (नेट) एक महत्वपूर्ण सहज प्रतिरक्षा तंत्र रोगजनक बैक्टीरिया, कवक और परजीवी से लड़ने रहे हैं. हम यहाँ के मानव रक्त से न्युट्रोफिल granulocytes अलग करने और उन्हें सक्रिय जाल फार्म विधियों का वर्णन. हम तैयारी तकनीक मौजूद प्रकाश और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी में जाल कल्पना.
न्युट्रोफिल granulocytes परिधीय रक्त में leukocytes के सबसे प्रचुर मात्रा में समूह रहे हैं. के रूप में पेशेवर phagocytes, वे निमग बैक्टीरिया और उन्हें intracellularly को मारने जब उनके phagosome साथ रोगाणुरोधी granules फ्यूज. हमने पाया है कि neutrophils सूक्ष्मजीवों की हत्या के एक अतिरिक्त तरीका है: सक्रियण पर, वे ग्रेन्युल प्रोटीन और chromatin है कि एक साथ कोशिकी फाइबर फार्म जारी है कि बाँध रोगज़नक़ों. ये उपन्यास संरचनाओं, या न्युट्रोफिल कोशिकी जाल (नेट), विषैलापन कारकों को नीचा दिखाना और एक बैक्टीरिया, 2 कवक और 3 परजीवी को मार. जाल के संरचनात्मक आधार डीएनए है, और वे जल्दी से DNases की उपस्थिति में अपमानित कर रहे हैं. इस प्रकार, DNases व्यक्त बैक्टीरिया अधिक 4 ज़हरीले हैं. Correlative माइक्रोस्कोपी मंदिर, SEM, immunofluorescence और जीने सेल इमेजिंग तकनीक के संयोजन का उपयोग करना, हम दिखा सकता है कि उत्तेजना पर, neutrophils के नाभिक उनके आकार खो देते हैं और homogenize – यूरोपीय संघ और heterochromatin. बाद में, परमाणु लिफाफा और ग्रेन्युल झिल्ली. NET घटक के मिश्रण की अनुमति बिखर. अंत में, नेट कोशिका झिल्ली टूट के रूप में जारी कर रहे हैं. यह कोशिका मृत्यु प्रोग्राम (NETosis) apoptosis और परिगलन से अलग है और NADPH oxidase 5 द्वारा प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों की पीढ़ी पर निर्भर करता है है .
न्युट्रोफिल कोशिकी जाल तीव्र सूजन की साइटों पर प्रचुर मात्रा में हैं. जाल सहज प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के एक रूप हो दिखाई देते हैं कि बाँध सूक्ष्मजीवों, उन्हें फैलने से रोकने के लिए, और antimicrobial एजेंटों के एक उच्च स्थानीय एकाग्रता विषैलापन कारकों नीचा और इस प्रकार रोगज़नक़ों को मारने neutrophils उनके जीवन काल से परे भी उनके antimicrobial समारोह को पूरा करने के लिए अनुमति देता है सुनिश्चित करने. वहाँ सबूत बढ़ रही है, तथापि, कि जाल भी रोगों कि में शामिल हैं ऑटो प्रतिरक्षा सिंड्रोम से 6 बांझपन के लिए सीमा होती है.
हम विधियों का वर्णन करने के लिए परिधीय मानव रक्त 7 से न्युट्रोफिल granulocytes को अलग करने और उन्हें प्रोत्साहित करने के लिए जाल फार्म . इसके अलावा, हम प्रकाश और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी में जाल कल्पना प्रोटोकॉल शामिल हैं.
प्रदान प्रोटोकॉल काफी शुद्धता पर गैर उत्तेजित neutrophils के अलगाव NET गठन की प्रेरण और NETosis दौरान morphological परिवर्तन का विश्लेषण की अनुमति देगा. जब देखभाल के साथ नमूनों से निपटने, यानी कठोर धोने की स्थिति है जो शिथिल संलग्न जाल के अधिकांश के नुकसान में परिणाम देगा से बचने विभिन्न उत्तेजना शर्तों के अधीन. NET गठन (अवधि, उत्तेजना) की राशि की तुलना में किया जा सकता है. न्युट्रोफिल / रोगज़नक़ बातचीत, उत्तेजनाओं के अनुक्रम, अन्य प्रतिरक्षा कोशिकाओं के साथ परस्पर क्रिया: इस संबंध में, एक प्रारंभिक बिंदु के रूप में करने के तरीकों को स्थापित करने के लिए और अधिक परिष्कृत परिदृश्यों का विश्लेषण प्रदान प्रोटोकॉल सेवा कर सकते हैं.