מלכודות תאי נויטרופילים (NETS) הן מנגנון חשוב החיסון המולדת להילחם חיידקים פתוגניים, פטריות וטפילים. כאן אנו מתארים שיטות לבודד גרנולוציטים נויטרופילים מהדם האנושי כדי להפעיל אותם בצורה הרשתות. אנו מציגים טכניקות הכנה לדמיין הרשתות מיקרוסקופ אור אלקטרונים.
גרנולוציטים נויטרופילים הם הקבוצה הנפוץ ביותר של לויקוציטים בדם ההיקפי. כפי phagocytes מקצועי, הם חיידקים לבלוע ולהרוג אותם intracellularly כאשר גרגרי הפתיל מיקרוביאלית שלהם עם phagosome. מצאנו כי נויטרופילים יש דרך נוספת של הרג מיקרואורגניזמים: על הפעלה, הם משחררים חלבונים גרגיר וכרומטין כי יחד טופס סיבי תאית כי פתוגנים לאגד. אלו מבנים חדשים, או מלכודות תאי נויטרופילים (סלים), לבזות גורמים ארסיות ו 1 להרוג חיידקים, פטריות וטפילים 2 3. עמוד השדרה הוא מבנה של רשתות ה-DNA, והם מפורקים במהירות בנוכחות DNases. לפיכך, חיידקים להביע DNases הם אלימים יותר 4. באמצעות מיקרוסקופ המצטרף שילוב TEM, SEM, immunofluorescence ולחיות טכניקות הדמיה התא, נוכל להראות כי על גירוי, הגרעינים של נויטרופילים מאבדים את צורתם ואת האיחוד האירופי ו heterochromatin homogenize. מאוחר יותר, את המעטפה גרעיני ממברנות גרגיר להתפורר ומאפשר ערבוב של הרכיבים NET. לבסוף, הנטס משתחררים כמו הפסקות קרום התא. זה מוות של תאים התוכנית (NETosis) הוא נבדל אפופטוזיס ונמק ותלוי הדור של מינים החמצן מגיב על ידי מונואמין NADPH 5.
מלכודות תאי נויטרופילים נפוצים באתרים של דלקת חריפה. NETS להיראות סוג של תגובה חיסונית מולדת כי מיקרואורגניזמים לאגד, למנוע מהם להתפשט, ולהבטיח ריכוז מקומי גבוה של סוכני מיקרוביאלית לבזות גורמים ארסיות ולהרוג פתוגנים ובכך מאפשר נויטרופילים למלא פונקציה מיקרוביאלית שלהם גם מעבר תוחלת החיים שלהם. יש להגדיל את הראיות, עם זאת, רשתות, כי הם מעורבים גם מחלות אשר נע בין אוטואימוניות תסמונות לעקרות 6.
אנו מתארים שיטות לבודד גרנולוציטים נויטרופילים מתוך 7 דם היקפיים האדם לעורר אותם בצורה הרשתות. כמו כן, אנו כוללים פרוטוקולים לדמיין את הרשתות מיקרוסקופ אור אלקטרונים.
פרוטוקול בתנאי יאפשר את בידודה של נויטרופילים מגורה על טוהר הלא מבוטל, הגיוס של היווצרות NET ועל ניתוח של שינויים מורפולוגיים במהלך NETosis. כאשר הטיפול דגימות בזהירות, כלומר הימנעות כביסה התנאים הקשים אשר תגרום לאובדן של רוב NETS מחוברת באופן רופף, בסכום של היווצרות NET בתנאים גירויים שונים (משך, גירוי) ניתן להשוות. במובן זה, את הפרוטוקולים ובלבד יכול לשמש כנקודת מוצא להקים שיטות לנתח תרחישים מתוחכמים יותר: אינטראקציות נויטרופילים / הפתוגן, רצף של גירויים, יחסי הגומלין עם תאים חיסוניים אחרים.