Dieses Protokoll zeigt Methoden zur Gewinnung von Spermien aus den Hoden der Männchen und dann Besamung weiblichen Mäusen. Dieses Verfahren ist nützlich, wenn die genaue Zeit in entwicklungspsychologischen Studien sowie transgene Arbeit benötigt wird.
Abstract
Nagetiere der Gattung Peromyscus (Reh-Mäuse) sind die am weitesten verbreitete Muttersprache in Nordamerika Säugetiere. Peromyscus Arten sind in einem breiten Spektrum von Forschungsgebieten einschließlich Toxikologie, Epidemiologie, Ökologie, Verhaltens-und genetischen Studien verwendet. Hier sind sie ein nützliches Modell für die Demonstrationen der künstlichen Besamung.
Methoden ähnlich denen hier angezeigten zuvor in mehrere Hirsche Maus-Studien verwendet wurde, noch keine detaillierten Protokoll veröffentlicht worden. Hier zeigen wir die grundlegende Methode der künstlichen Befruchtung. Dieses Verfahren beinhaltet das Extrahieren der Hoden aus dem Nagetier, dann Isolierung der Spermien aus dem Nebenhoden und Samenleiter. Die reifen Spermien, jetzt in einem Milch-Gemisch, werden in den weiblichen Genitaltrakt auf die Zeit des Eisprungs platziert. Die Befruchtung wird als Tag 0 für Timing der Entwicklung des Embryos gezählt. Embryonen können dann zur gewünschten Zeit-Punkt abgerufen und manipuliert werden.
Künstliche Befruchtung kann in einer Vielzahl von Nagetieren, wo genau Embryo Timing ist entscheidend, oder schwer zu bekommen verwendet werden. Diese Technik ist von entscheidender Bedeutung für Arten oder Stämme (darunter die meisten Peromyscus), die sich nicht paaren können sofort und / oder wo Paarung ist schwer zu beurteilen. Darüber hinaus bietet die künstliche Besamung genaue Zeitpunkt für die Entwicklung des Embryos entweder in Abbildung Entwicklungsfortschritte und / oder transgene Arbeit. Reduzierte Anzahl von Tieren verwendet werden, da die Befruchtung gewährleistet ist. Diese Methode wurde entscheidend für die Förderung der Peromyscus System, und wird hoffentlich profitieren auch andere.
Protocol
Künstliche Befruchtung Künstliche Befruchtung wird anstelle der natürlichen Paarung, um die Chancen, dass alle Frauen geworden sind wird schwanger zu erhöhen. 2 männliche wurde für alle 1 superovulierten Weibchen oder ein Weibchen bekannt, in Östrus verwendet werden. Die caudae Nebenhoden von reifen männlichen Mäusen wurden in einer 9% Milch Suspension gegeben und offen mit 18-Gauge-Nadel in Scheiben geschnitten. Das Sperma wurde erlaubt, sich frei zu schwimmen ein paar Minuten und da…
Acknowledgements
Ich möchte Mike Dewey vom Peromyscus Genetic Stock Center für seine wertvolle Einblicke, Geduld und Wissen auf Nagetier-Reproduktion zu danken.