تحليل التعبير الجيني في الحفار الرماد الزمرد ( Agrilus planipennis) عن طريق ريال الكمية من الزمن - PCR
Summary
الكمية في الوقت الحقيقي PCR (qRT – PCR) هو أداة فعالة لتشخيص مستويات مرنا في أنسجة الحشرات المختلفة والمراحل التنموية. في هذا التقرير نعرض لاستخدام qRT – PCR إلى مستويات مرنا التأكد اليرقات في الأنسجة المختلفة ، ومراحل تطور من أنواع الحشرات الغازية ، والزمرد الرماد حفار.
Abstract
الزمرد الرماد حفار (MNG ،<em> Agrilus planipennis</em>) هو الآفات الغريبة الغازية ، والتي أودت بحياة الملايين من أشجار الدردار (<em> Fraxinus</em> SPP) في أمريكا الشمالية.<strong></strong> البنك المصري الامريكي يواصل انتشاره السريع والهجمات الرماد الأشجار من مختلف الأعمار ، من الشتلات لأشجار ناضجة. ومع ذلك ، حتى الآن سوى القليل جدا أو لا وجود لمعرفة الجزيئية البنك المصري الامريكي. ونحن مهتمون في فك رموز العمليات الفسيولوجية الجزيئية المستندة على الصعيد المصري الامريكي الأنسجة التي تساعد في نجاح الاستعمار من أشجار الدردار. في هذا التقرير نعرض الاستخدام الفعال للPCR الوقت الحقيقي الكمية (qRT – PCR) إلى مستويات مرنا التأكد من اليرقات في أنسجة مختلفة (بما في ذلك الهيئات المعي المتوسط الدهون ، وإهاب) ومراحل النمو المختلفة (بما في ذلك 1<sup> ش</sup> — ، 2<sup> الثانية</sup> — ، 3<sup> الثالثة</sup> — ، 4<sup> عشر</sup> – instars ، prepupae والكبار) من البنك المصري الامريكي. كمثال ، وهو الجين peritrophin (يسمى هنا ،<em> AP – PERI1</emويتمثل>) وهذا الجين من الفائدة والبروتين الريباسي (<em> AP – RP1</em>) مثل الرقابة الداخلية. Peritrophins تشكل عناصر مهمة في الغشاء المحيط بالغاذية / مصفوفة (بعد الظهر) ، والذي هو بطانة القناة الهضمية للحشرات. رئيس الوزراء وظائف متنوعة بما في ذلك عملية الهضم والحماية الميكانيكية لظهارة المعى المتوسط.
Protocol
Discussion
دورات العتبة (CT) يتم الحصول على قيمة لكل عينة في لوحة qRT – PCR. لجعل منحنى القياسية ، ورسم الحصول على قيمة ط م لكل تمييع ضد السجل من تركيزه. ثم تم التخطيط القيم ط م للالعينات التجريبية على تخفيف هذا المعيار منحنى السلسلة. وحسبت كميات الهدف من إنشاء منحنيات معيار منفصلة لكل …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نعترف مساعدة التي قدمتها لورديس Arrueta أنتقيرة الدلتا (قسم الحشرات ، جامعة ولاية أوهايو / OARDC ، وستر ، أوهايو) في الإعداد لهذه التجارب. نشكر الدكتور تريز بولندا (وزارة الزراعة ، وخدمات الغابات ، NRS) لارسال عينات من البنك المصري الامريكي اليرقات. مساعدة التي قدمها الدكتور لويس وكاناس ونورس M أكوستا مع تقديره هو الإعداد المجهر. تم توفير التمويل لهذا المشروع من أموال الدولة والحكومة الفيدرالية المخصصة للمركز ولاية أوهايو البحوث والتنمية الزراعية ، جامعة ولاية أوهايو.
References
- Lehane, M. J. Peritrophic matrix structure and function. Annu Rev Entomol. 42, 525-550 (1997).
- Mittapalli, O., Sardesai, N., Shukle, R. H. cDNA cloning and transcriptional expression of a peritrophin-like gene in the Hessian fly, Mayetiola destructor [Say]. Arc of Insect Bio. 64, 19-29 (2007).
- Pauchet, Y., Wilkinson, P., van Munster, M., Augustin, S., Pauron, D., ffrench-Constant, R. H. Pyrosequencing of the midgut transcriptome of the poplar leaf beetle Chrysomela tremulae reveals new gene families in Coleoptera. Ins Bio and Mol. 39, 403-413 (2009).
- Pfaffl, W. M. A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR. Nucleic Acids Res. 29, 2002-2007 (2001).
- Tellam, R. L., Lehane, M. J., Billingsley, P. F. . Biology of the Insect Midgut. , 86-114 (1996).
