Overview
Artiklen beskriver en analyse for at studere zebrafisk aggression. Metoden bruger et simpelt spejl og observerer zebrafiskens adfærdsmæssige reaktion mod sin egen refleksion i spejlet.
Protocol
1. Gennemførelse af Aggression Assay
- Udfør aggressionsanalysen i en rektangulær tank på 19 L, der måler 30 cm x 15 cm x 10 cm. Udstyr tanken i eksterne uigennemsigtige skillevægge omkring tre sider af aggressionstanken, hvilket efterlader fronten udsat for visning for at reducere uønskede udefrakommende stimuli. Del tanken med udvendige markeringer i fire lige store rektangulære kvadranter og fastgør et spejl permanent (med silikone caulk) i nederste venstre kvadrant, skrå ved 22,5 ° danner en højre trekant mod den yderste venstre side af tanken.
- Sørg for, at vandets temperatur i akklimatiseringstanken og aggressionstanken ligger inden for 2 °C fra husholderstativet. For at gøre dette skal du have frisk, alderen vand forvarmet til 27,5-28,5 °C klar til at tilføje til aggressionstanken. BEMÆRK: Det er vigtigt at ændre vandet i mellem hver analyse for at fjerne uberettigede olfaktoriske signaler.
- Overfør, ved cupping, en fokal fisk fra huset rack til en separat akklimatisering tank, hvor det vil akklimatisere i 10 min.
BEMÆRK: Det er vigtigt at reducere stimulus introduceret til fisken gennem forkert håndtering. Overfør personer som tidligere beskrevet. Specifikt manuelt og omhyggeligt placere en lille, gennemsigtig plastkop i tanken af interesse. Uden at forstyrre fisken så meget som at overføre ved hjælp af et net, langsomt scoop op fisken i koppen. - Sørg for, at videokameraet er klar til optagelse ved at bekræfte, at aggressionsanalysetanken (se trin 1.1) er i fokus, og umiddelbart før du overfører personen til aggressionstanken, skal du trykke på rekord på enheden. Overfør fokale fisk via cupping fra akklimatiseringstank til aggressionstank.
BEMÆRK: Det er vigtigt at registrere, før fisken kommer ind i aggressionstanken for at spore det nøjagtige tidspunkt for indrejse. - Optag aggressionstanken i 10 min og 30 sek og kop derefter fokalfisken fra aggressionstanken tilbage i akklimatiseringstanken.
- Når du ser optagelsen, skal du vente 30 sek efter, at fisken er blevet introduceret til tanken som en ekstra akklimatiseringsperiode, før du scorer adfærd.
- Brug af JWatcher-scoringssystemet, der er defineret for aggressiv adfærd, kvantificer følgende adfærd i 10 minutter: Tid brugt i nærheden af spejl, antal spejltilgange, antal dart, antal forsøg på bid (åbningsmund i spejlretning) og antal laterale skærme (dorsal, bryst, anal og kaudale fin erektion).
- Score en enkelt aggression assay mindst to gange, indtil analysen er scoret med høj aftale mellem iterationer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 19 L rectangular tank | That Fish Place | 211932 | |
| ArtMinds Square Mirror, Value Pack 3" x 3" | Michaels | 10334162 | |
| Zebrafish Rack System | Aquaneering Inc | ZS550 | |
| Nikon AF Nikkor 35-105 mm f/305~4.5s MACRO lens | Nikon Corporation | NA | |
| Hitachi KP-D20A CCD Camera | Prescott's, Inc. | NA | |
| Jwatcher | NA | NA |
