زيبرافيش اعتلال عضلة القلب النموذجي: السمية القلبية الناجمة عن المخدرات

Overview

يصف هذا الفيديو تقنية إنشاء نموذج اعتلال عضلة القلب حمار وحشي مع الحد الأدنى من الاختلافات بين المجموعات التجريبية وفي العينة ، نخلق نموذج اعتلال عضلة القلب حمار وحشي باستخدام دواء doxorubicin.

Protocol

1. DOX حقن في الأسماك الكبار

1. ضع طبق بيتري نظيف عيار 100 مم مع إسفنجة داخله ، تحت مجهر تشريح ، ثم اضبط التركيز. قطع الإسفنج لجعل تجويف حوالي 4 سم في الطول لعقد سمكة. جعل تجويف أطول لسمكة أكبر.
2. إعداد إبرة 34 G مع حقنة صغيرة 10 ميكرولتر. شطف الإبرة مع العازلة HBSS 1x لإزالة أي فقاعات وكتل من الحقنة والأنابيب.
3. تخدير الأسماك البالغة في مياه الجنين التي تحتوي على 0.16 ملغ / مل tricaine لمدة 2 دقيقة.
   ملاحظة:التخدير لفترات طويلة أكثر من 5 دقائق تليها حقن DOX يمكن أن يسبب بسهولة موت الأسماك.
4. نقع الإسفنج في ماء الجنين مع tricaine، ونقل الأسماك على الاسفنجة للحقن.
5. تنفيذ حقن IP DOX بأي من الطريقتين الموضحة أدناه.
   1. حقن الملكية الفكرية الكلاسيكية
      1. وضع السمك مع البطن حتى في تجويف الإسفنج. أدخل الإبرة بسرعة، مع زاوية 45 درجة إلى جسم السمك في خط الوسط بين زعانف الحوض، واختراق ما يقرب من 1-2 ملم. حرر كل حل DOX ببطء. انتظر 5 ق قبل سحب الإبرة. تحقق من تسليم DOX بلون أحمر مرئي في بطن السمك.
   2. حقن IP بديل
      1. وضع السمك أفقيا على الاسفنج مع الأمامي إلى اليمين. استقرار بلطف الأسماك باستخدام ملقط نهاية حادة مع اليد اليسرى، وعقد حقنة صغيرة مع اليد اليمنى.
      2. ضع الإبرة أسفل الخط الجانبي فوق زعنفة الحوض ، مع مواجهة شطبة. عند الإشارة إلى موضع الساعة السابعة بزاوية 45 درجة، أدخل الإبرة من 3 إلى 4 مم في تجويف السمك الموجود بين الحوض والزعانف الشرجية، ثم قم بإكتئاب المكبس ببطء. تحقق من تسليم DOX بلون أحمر مرئي في بطن السمك.
6. نقل الأسماك المحقونة بسرعة إلى خزان عبور نظيف مليء بمياه النظام العذب للسماح للأسماك بالتعافي. شطف الإبرة مرة واحدة مع 1x HBSS العازلة بين الحقن.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish