Zebravis Cardiomyopathie Model: Drug-Geïnduceerde Cardiotoxiciteit

Overview

Deze video beschrijft de techniek van het creëren van een zebravis cardiomyopathie model met minimale variaties tussen experimentele groepen en in het monster, maken we zebravis cardiomyopathie model met behulp van het medicijn doxorubicine.

Protocol

1. DOX-injectie bij volwassen vissen

1. Plaats een schone petrischaal van 100 mm met een spons erin, onder een dissectiemicroscoop en pas vervolgens de scherpstelling aan. Snijd de spons om een holte van ongeveer 4 cm lang te maken om een vis vast te houden. Maak een langere holte voor een grotere vis.
2. Bereid een naald van 34 G voor met een microspuit van 10 μL. Spoel de naald af met 1x HBSS buffer om eventuele bellen en blokken uit de spuit en slang te verwijderen.
3. Verdoof de volwassen vissen in embryowater met 0,16 mg/ml tricaine gedurende 2 minuten.
   OPMERKING: Langdurige anesthesie gedurende 5 minuten gevolgd door DOX-injectie kan gemakkelijk de dood van vissen veroorzaken.
4. Week de spons in embryowater met tricaïne en breng de vis over op de spons voor injectie.
5. Voer IP DOX-injectie uit met een van de twee hieronder beschreven methoden.
   1. Klassieke IP-injectie
      1. Plaats de vis met de buik omhoog in de holte van de spons. Steek de naald snel in, met een hoek van 45° ten opzichte van het vislichaam in de middellijn tussen de bekkenvinnen, en penetreer ongeveer 1-2 mm. Laat alle DOX-oplossing langzaam los. Wacht 5 s voordat u de naald eruit trekt. Controleer de DOX-levering door een zichtbare rode kleur in de visbuik.
   2. Alternatieve IP-injectie
      1. Plaats de vis lateraal op de spons met de voorste naar rechts. Stabiliseer de vis voorzichtig met een stompe einddreicet met de linkerhand en houd de microspuit met de rechterhand vast.
      2. Plaats de naald onder de zijlijn boven de bekkenvin, met de schuine kant naar boven gericht. Wijzend op de 7 uur positie onder een hoek van 45°, steekt u de naald 3-4 mm in de visholte tussen het bekken en de anale vinnen en drukt u vervolgens langzaam de zuiger in. Controleer de DOX-levering door een zichtbare rode kleur in de visbuik.
6. Breng de geïnjecteerde vis snel over naar een schone oversteektank gevuld met vers systeemwater om de vis te laten herstellen. Spoel de naald eenmaal af met 1x HBSS buffer tussen de injecties.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish