Zebrafisch Kardiomyopathie Modell: Drogeninduzierte Kardiotoxizität

Overview

Dieses Video beschreibt die Technik der Erstellung eines Zebrafisch-Kardiomyopathie-Modells mit minimalen Variationen zwischen experimentellen Gruppen und in der Probe erstellen wir Zebrafisch-Kardiomyopathie-Modell mit dem Medikament Doxorubicin.

Protocol

1. DOX Injektion bei erwachsenen Fischen

1. Legen Sie eine saubere 100 mm Petrischale mit einem Schwamm darin unter einem Seziermikroskop, und stellen Sie dann den Fokus ein. Schneiden Sie den Schwamm, um einen Hohlraum von etwa 4 cm Länge zu machen, um einen Fisch zu halten. Machen Sie einen längeren Hohlraum für einen größeren Fisch.
2. Bereiten Sie eine 34 G-Nadel mit einer 10-L-Mikrospritze vor. Spülen Sie die Nadel mit 1x HBSS Puffer, um Blasen und Blöcke aus der Spritze und Schläuche zu entfernen.
3. Anästhetisieren Sie die erwachsenen Fische in Embryowasser, das 0,16 mg/ml Tricain für 2 min enthält.
   HINWEIS: Eine verlängerte Anästhesisierung über 5 min, gefolgt von einer DOX-Injektion, kann leicht zum Fischsterben führen.
4. Den Schwamm in Embryowasser mit Tricain einweichen und den Fisch zur Injektion auf den Schwamm geben.
5. Führen Sie die IP-DOX-Injektion mit einer der beiden unten beschriebenen Methoden durch.
   1. Klassische IP-Injektion
      1. Positionieren Sie den Fisch mit dem Bauch in den Hohlraum des Schwamms. Setzen Sie die Nadel mit einem 45°-Winkel zum Fischkörper schnell in die Mittellinie zwischen den Beckenflossen ein und dringen Sie ca. 1-2 mm ein. Lösen Sie alle DOX-Lösungen langsam. Warten Sie 5 s, bevor Sie die Nadel herausziehen. Überprüfen Sie die DOX-Lieferung durch eine sichtbare rote Farbe im Fischbauch.
   2. Alternative IP-Injektion
      1. Legen Sie den Fisch seitlich auf den Schwamm mit dem Vorderen nach rechts. Stabilisieren Sie den Fisch vorsichtig mit einer stumpfen Endzange mit der linken Hand und halten Sie die Mikrospritze mit der rechten Hand.
      2. Positionieren Sie die Nadel unterhalb der Seitlichen Linie über der Beckenflosse, wobei die Abschrägung nach oben zeigt. Zeigen Sie auf die 7-Uhr-Position in einem 45°-Winkel, legen Sie die Nadel 3-4 mm in den Fischhohlraum zwischen dem Becken und den Analflossen, und drücken Sie dann langsam den Kolben. Überprüfen Sie die DOX-Lieferung durch eine sichtbare rote Farbe im Fischbauch.
6. Übertragen Sie den eingespritzten Fisch schnell in einen sauberen, mit frischem Systemwasser gefüllten Becken, damit sich die Fische erholen können. Spülen Sie die Nadel einmal mit 1x HBSS Puffer zwischen den Injektionen.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish