Modelo de Cardiomiopatia de Zebrafish: Cardiotoxicidade Induzida por drogas

Overview

Este vídeo descreve a técnica de criar um modelo de cardiomiopatia de zebrafish com variações mínimas entre grupos experimentais e, na amostra, criamos modelo de cardiomiopatia de zebrafish usando a droga doxorubicina.

Protocol

1. Injeção de DOX em Peixe Adulto

1. Coloque uma placa de Petri de 100 mm limpa com uma esponja dentro dela, sob um microscópio de dissecção, em seguida, ajuste o foco. Corte a esponja para fazer uma cavidade de cerca de 4 cm de comprimento para segurar um peixe. Faça uma cavidade mais longa para um peixe maior.
2. Prepare uma agulha de 34 G com uma micro-seringa de 10 μL. Enxágüe a agulha com tampão HBSS 1x para remover quaisquer bolhas e blocos da seringa e da tubulação.
3. Anestesiar o peixe adulto em água embrionária contendo 0,16 mg/mL tricaine por 2 min.
   NOTA: A anestesia prolongada ao longo de 5 minutos seguida pela injeção DE DOX pode facilmente causar a morte dos peixes.
4. Mergulhe a esponja em água de embrião com tricaine, e transfira o peixe para a esponja para injeção.
5. Realize a injeção IP DOX por qualquer um dos dois métodos descritos abaixo.
   1. Injeção ip clássica
      1. Posicione o peixe com o abdômen na cavidade da esponja. Insira rapidamente a agulha, com um ângulo de 45° para o corpo do peixe na linha média entre as barbatanas pélvicas, e penetre aproximadamente 1-2 mm. Libere toda a solução DOX lentamente. Espere 5 s antes de puxar a agulha. Verifique a entrega do DOX por uma cor vermelha visível na barriga do peixe.
   2. Injeção ip alternativa
      1. Coloque o peixe lateralmente sobre a esponja com o anterior para a direita. Estabilize suavemente o peixe usando um fórceps final com a mão esquerda e segure a micro-seringa com a mão direita.
      2. Posicione a agulha abaixo da linha lateral acima da barbatana pélvica, com o bisel voltado para cima. Apontando para a posição das 7 horas em um ângulo de 45°, insira a agulha de 3-4 mm na cavidade do peixe localizada entre as aletas pélvicas e anais, e, em seguida, lentamente deprimir o êmbolo. Verifique a entrega do DOX por uma cor vermelha visível na barriga do peixe.
6. Transfira rapidamente o peixe injetado para um tanque de travessia limpo cheio de água fresca do sistema para permitir que os peixes se recuperem. Enxágüe a agulha uma vez com tampão HBSS 1x entre as injeções.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish