Modelo de miocardiopatía de pez cebra: Cardiotoxicidad inducida por fármacos

Overview

Este video describe la técnica de crear un modelo de miocardiopatía de pez cebra con variaciones mínimas entre los grupos experimentales y en la muestra, creamos un modelo de miocardiopatía de pez cebra utilizando el fármaco doxorubicina.

Protocol

1. Inyección dox en peces adultos

1. Coloque una placa Petri limpia de 100 mm con una esponja en su interior, bajo un microscopio de disección y, a continuación, ajuste el enfoque. Corta la esponja para hacer una cavidad de unos 4 cm de longitud para sostener un pez. Hacer una cavidad más larga para un pez más grande.
2. Prepare una aguja de 34 G con una micro jeringa de 10 μL. Enjuague la aguja con 1x tampón HBSS para eliminar cualquier burbuja y bloque de la jeringa y el tubo.
3. Anestesiar los peces adultos en agua embrionaria que contenga 0,16 mg/ml de tricarina durante 2 min.
   NOTA: La anestesia prolongada durante 5 minutos seguida de la inyección dox puede causar fácilmente la muerte de los peces.
4. Remoje la esponja en agua embrionaria con tricacina y transfiera el pescado a la esponja para inyección.
5. Realice la inyección de DOX IP mediante cualquiera de los dos métodos descritos a continuación.
   1. Inyección de IP clásica
      1. Coloque el pez con el abdomen hacia arriba en la cavidad de la esponja. Inserte rápidamente la aguja, con un ángulo de 45° en el cuerpo del pez en la línea media entre las aletas pélvicas, y penetre aproximadamente 1-2 mm. Suelte lentamente toda la solución DOX. Espere 5 s antes de sacar la aguja. Compruebe la entrega dox por un color rojo visible en el vientre de los peces.
   2. Inyección alternativa de IP
      1. Coloque el pescado lateralmente sobre la esponja con el anterior a la derecha. Estabilice suavemente el pescado usando un fórceps extremo contundente con la mano izquierda, y sostenga la micro-jeringa con la mano derecha.
      2. Coloque la aguja debajo de la línea lateral por encima de la aleta pélvica, con el bisel hacia arriba. Apuntando a la posición de las 7 en punto en un ángulo de 45°, inserte la aguja de 3-4 mm a la cavidad del pez ubicada entre las aletas pélvicas y las aletas anales, y luego deprima lentamente el émbolo. Compruebe la entrega dox por un color rojo visible en el vientre de los peces.
6. Transfiera rápidamente el pescado inyectado a un tanque de cruce limpio lleno de agua fresca del sistema para permitir que los peces se recuperen. Enjuague la aguja una vez con 1x tampón HBSS entre inyecciones.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish