حقن الوريد الذيل: طريقة لإدارة الخلايا السرطانية للدراسات النقيلية في نموذج الماوس

Overview

يصف هذا الفيديو تقنية حقن الخلايا السرطانية المسماة باستخدام حقن الوريد الذيل في نموذج الماوس. كما نراقب تكوين الانبثاث سرطان الثدي، والنمو باستخدام الوقت الحقيقي في تصوير الحيوانات الحية في الجسم الحي.

Protocol

1. حقن الوريد الذيل من الخلايا السرطانية المسمى

ملاحظة: تم تحسين الخطوة 1.2.4 لخلايا 4T1 التي تنمو في فئران BALB/c السينجينية. إذا تم استخدام خطوط الخلايا السرطانية الأخرى وسلالات الماوس ، يجب أولا تحسين عدد الخلايا التي يتم حقنها وطول المقايسة.

1. قم بتوسيع خطوط الخلايا 4T1 التي تم إنشاؤها في الخطوة 2 على طبقين 15 سم في وسائط النمو الكامل بحيث تتوفر الخلايا الزائدة في يوم الحقن.
2. إعداد الخلايا لحقن الوريد الذيل على النحو التالي:
   1. يستنشق وسائل الإعلام وشطف لوحات الخلية مع برنامج تلفزيوني 1x.
   2. جرب الخلايا مع 5 مل من التريبسين لكل لوحة 15 سم لمدة 2-5 دقائق (يجب أن تشطف الخلايا بحرية الجزء السفلي من البئر). نقل جميع الخلايا إلى أنبوب مخروطي. غسل الخلايا المتبقية من طبق زراعة الأنسجة مع ما يكفي من وسائل الإعلام كاملة النمو لإرواء التريبسين وإضافة الغسيل إلى نفس الأنبوب المخروطي.
   3. عد الخلايا باستخدام عداد خلية تلقائي لتحديد إجمالي عدد الخلايا.
   4. الطرد المركزي الخلايا في 122 × ز لمدة 3 دقائق، يستنشق supernatant، وإعادة إنفاق الخلايا في برنامج تلفزيوني 1x في التركيز المطلوب. هنا، يتم حقن 2.5 ×^{10 4} خلايا في كل فأر في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني، وبالتالي فإن خلايا إعادة الإنفاق في 2.5 × 10⁵ خلايا / مل. الحفاظ على تعليق الخلية على الجليد حتى الحقن.
      ملاحظة: من المهم الحد من مقدار الوقت بين تجربه الخلايا وحقن الوريد الذيل إلى ما يقرب من 1 ساعة.
3. حقن خلايا 4T1 من الخطوة 1.2.5 في الفئران عبر الوريد الذيل الجانبي على النحو التالي:
   1. العمل في غطاء محرك السيارة في منشأة الحيوان، بلطف ولكن بدقة خلط الخلايا عن طريق عكس الأنبوب أو استخدام حقنة 1 مل لضمان أن يتم إعادة إنفاقها بشكل موحد. تأكد دائما من إعادة إنفاق الخلايا قبل تحميل الحقنة.
   2. قم بتحميل حقنة قفل Luer سعة 1 مل مع تعليق الخلية وطرد فقاعات الهواء الزائدة. ضع إبرة مقاس 1/2 بوصة و30 قياسا على الحقنة مع شطبة وطرد فقاعات الهواء.
   3. ضع الماوس برفق في جهاز تقييد القوارض.
   4. يجب أن تكون عروق الذيل الجانبي مرئية ومتوسعة. إذا لم يكن كذلك، قرصة بلطف قاعدة الذيل وتراجع الذيل في ماء الصنبور الدافئ لتوسيع الأوردة.
      ملاحظة: ويمكن أيضا أن يتحقق تمدد الأوردة عن طريق وضع قفص الماوس تحت مصباح التدفئة و / أو على رأس لوحة التدفئة.
   5. استخدام مسح الكحول لتنظيف الذيل. أدخل الإبرة في الوريد الذيل، شطبة الجانب، وحقن 100 ميكرولتر من تعليق الخلية.
      ملاحظة: إذا تم إدخال الإبرة بشكل صحيح في الوريد ، فيجب أن تنزلق بسهولة إلى الأمام والظهر قليلا ، ولا ينبغي أن تكون هناك مقاومة عندما يتم دفع المكبس. وينبغي أن تؤدي الحقن الناجحة أيضا إلى "تدفق" يتحول فيه اللون الأزرق للوريد إلى اللون الأبيض لبضع ثوان بعد الحقن.
4. إزالة الإبرة ببطء واستخدام شاش معقم، وتطبيق الضغط على موقع الحقن لوقف أي نزيف.
5. أعد الماوس إلى قفصه وراقبه لمدة 15 دقيقة لضمان التعافي الكامل. يجب فحص الفئران بحثا عن علامات الألم أو الضيق 3x أسبوعيا.
6. رصد الفئران لتشكيل الانبثاث والنمو لمدة 3-6 أسابيع (خط الخلية والفأر سلالة تعتمد) باستخدام جهاز تصوير الحيوانات الحية في الجسم الحي (انظر الخطوتين 1.5 و 1.6).

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
2.5% Trypsin	Gibco	15090-046	Trypsin for tissue culture
Alcohol wipes			For sterolizing the injection site before tail vein injecitons
BALB/C mice (female, 6 weeks)	Taconic	BALB-F	For tail vein metastatic colonization and burden assays
Dulbecco&39;s phosphate buffered saline	Himedia	TS1006
EDTA	VWR	97061-406	Used to dilute trypsin for tissue culture
FBS 100% US origin	VWR	97068-085	Component of complete growth media
L-Glutamine	Gibco	25030-081	Component of complete growth media
Mouse breast cancer cells, 4T1	Karmanos Cancer Institute	Aslakson, CJ et al.,1992	Mouse metastatic breast cance cell line
Penicillin Streptomycin	Gibco	15140-122	Component of complete growth media