Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
ابدأ بإضافة التريبسين إلى طبق بيتري يحتوي على خلايا سرطان الثدي المسماة لفصلها عن السطح. إضافة المتوسطة التي تحتوي على مصل لوقف عمل تريبسين. نقل تعليق الخلية إلى أنبوب مخروطي والطرد المركزي إلى خلية بيليه.
تجاهل supernatant وإعادة إنفاق الخلايا في المالحة العازلة الفوسفات. ضع الأنبوب على الجليد لإبطاء عملية التمثيل الغذائي للخلايا. قم بتحميل تعليق الخلية هذا الذي يحتوي على الكمية المطلوبة من الخلايا في حقنة قفل Luer وإصلاح إبرة عليها.
ضع فأرا في جهاز تقييد القوارض مع ذيله في الخارج. تراجع الذيل في الماء الدافئ لتوسيع الأوردة. هناك اثنين من الأوردة على الجانبين الجانبي والشريان على الجانب البطني من الذيل. امسح الذيل بالكحول وأدخل الإبرة وحقن تعليق الخلية.
مرة واحدة في مجرى الدم، والخلايا السرطانية المحقونة تغزو في الأعضاء، مثل الرئتين، وتتكاثر. قم بإزالة الإبرة ببطء واستخدم شاش معقم في موقع الحقن للضغط لوقف النزيف. أعد الماوس إلى قفصه وتأكد من الشفاء التام. في البروتوكول التالي، نظهر حقن الخلايا السرطانية النقيلية المسماة في نموذج الماوس لقياس الانبثاث سرطان الثدي والاستعمار.
يستنشق وسائل الإعلام وشطف لوحات الخلية مع برنامج تلفزيوني 1X. جرب الخلايا مع 5 ملليلتر من التريبسين لكل لوحة طولها 15 سنتيمترا لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق ونقل جميع الخلايا إلى أنبوب مخروطي. غسل الخلايا المتبقية من طبق زراعة الأنسجة مع ما يكفي من وسائل الإعلام كاملة النمو لإرواء التريبسين. أضف الغسيل إلى نفس الأنبوب المخروطي. عد الخلايا باستخدام عداد خلية تلقائي لتحديد إجمالي عدد الخلايا.
بعد ذلك ، طرد الخلايا في 122 مرة G لمدة ثلاث دقائق ونسيخ supernatant. Resuspend الخلايا في برنامج تلفزيوني 1X في التركيز المطلوب. هنا، يتم حقن 25،000 خلية في كل فأر في 100 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني، وبالتالي فإن الخلايا التي أعيد إنفاقها هي في 250،000 خلية لكل ملليلتر. الحفاظ على تعليق الخلية على الجليد حتى الحقن.
العمل في غطاء محرك السيارة في منشأة الحيوان، بلطف، ولكن مزيج تماما الخلايا عن طريق عكس الأنبوب أو استخدام حقنة 1 ملليلتر لضمان أن يتم إعادة إنفاقها بشكل موحد. الآن، قم بتحميل حقنة قفل Luer 1 ملليلتر مع تعليق الخلية وطرد فقاعات الهواء الزائدة. ضع إبرة مقاس 1/2 بوصة و30 قياسا على الحقنة مع شطبة وطرد فقاعات الهواء.
ضع الماوس برفق في جهاز تقييد القوارض. يجب أن يكون وريد الذيل الجانبي مرئيا ومتوسعا. إذا لم يكن كذلك، قرصة بلطف قاعدة الذيل وتراجع الذيل في ماء الصنبور الدافئ لتوسيع الأوردة. استخدام مسح الكحول لتنظيف الذيل. ثم أدخل الإبرة في الوريد الذيل، شطبة الجانب، وحقن 100 ميكرولتر من تعليق الخلية. إذا تم إدخال الإبرة بشكل صحيح في الوريد ، فيجب أن تنزلق بسهولة إلى الأمام والظهر قليلا ، ولا ينبغي أن تكون هناك مقاومة عندما يتم دفع المكبس.
وينبغي أن تؤدي الحقن الناجحة أيضا إلى تدفق، حيث يتحول اللون الأزرق للوريد إلى اللون الأبيض لبضع ثوان بعد الحقن. إزالة الإبرة ببطء، وباستخدام شاش معقم، وتطبيق الضغط على موقع الحقن لوقف أي نزيف. أعد الماوس إلى قفصه وراقبه لمدة 15 دقيقة لضمان التعافي الكامل.
