هذه الورقة تهدف إلى إرشاد القارئ في عملية متكاملة لقوة ذرية المجهر البصرية التصوير الميكانيكي لتحفيز الخلايا الحية في الثقافة. ويرد بروتوكول خطوة بخطوة. وقدم ممثل مجموعة البيانات التي تظهر استجابة الخلية الحية لتحفيز الميكانيكية.
لفهم الآلية التي الخلايا الحية الشعور القوات الميكانيكية ، وكيف تستجيب وتتكيف مع بيئتها ، وهي تكنولوجيا جديدة قادرة على التحقيق في سلوك الخلايا الفرعية الخلوية عالية المستوى مع القرار المكانية والزمانية والمتقدمة. وهكذا ، تم دمج مجهر القوة الذرية (AFM) مع مجموع المجهري التأمل الداخلي (TIRF) مضان والقرص التي تدور بسرعة (FSD) المجهري متحد البؤر. منظومة متكاملة قابلة للتطبيق على نطاق واسع عبر طائفة واسعة من الدراسات الحيوية الجزيئية في الخلايا الحية أي ملتصقة ، مما يسمح التصوير الضوئي المباشر للاستجابات الخلايا لتحفيز الميكانيكية في الوقت الحقيقي. وقد أظهرت إعادة ترتيب كبيرة من شعيرات أكتين والالتصاقات البؤرية بسبب تحفيز الميكانيكية المحلية على سطح الخلية التي يسببها قمية تغييرات في الهيكل الخلوي في جميع أنحاء الجسم الخلية. وهذه التقنيات المبتكرة لتوفير معلومات جديدة فهم يعيشون إعادة هيكلة الخلية واستجابة لديناميات القوة الميكانيكية. بروتوكول بيانات مفصلة وممثل المجموعة التي ترد ردا تظهر الخلية الحية لتحفيز الميكانيكية.
التصاقات الهيكل الخلوي 70-10 11-16 والتنسيق والهياكل الديناميكية التي تجميع وتفريق وتسليم وترحيل الخلايا أو الاستجابة لقوة ميكانيكية 17. لديهم وظائف كبيرة في تنظيم نمو الخلايا ، وبقاء ، والتعبير الجيني. معرفة التوزيع الخاصة بها وديناميكية توفر فهما أفضل لكيف…
The authors have nothing to disclose.
وكان Vinculin – GFP البلازميد هدية من يامادا كينيث والمعاهد الوطنية للصحة ، المعهد الوطني للأبحاث الأسنان والجمجمة ، بيثيسدا بولاية ميريلاند ، وأكتين mRFP – البلازميد كان هدية من مايكل ديفيدسون ، جامعة ولاية فلوريدا ، تالاهاسي (فلوريدا).
وأيد هذا العمل من قبل الجائزة شهادة NSF # 0747334 وAHA الجنسيات SDG # 0835205N لأندريا Trache.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
AFM tip | Novascan Technologies | 2 micron Borosilicate bead, 0.01N/m, Biotin Surface | ||
avidin | Sigma Aldrich | A9275 | 1mg/mL in DPBS | |
Fibronectin | Sigma Aldrich | F4759 | 1 mg/mL | |
DPBS | Invitrogen | 21600-051 | ||
Amaxa transfection kit for Smooth Muscle Cells | Lonza | VPI-1004 | ||
Mattek glass bottom dishes | MatTek Corporation | P60G-1.5-30-F | Sterile 60mm Falcon dishes with glass bottom coverslip no. 1.5 |