В этой статье мы приведем простой методологии чтобы долгосрочные<em> Экс-ово</em> Птичьего культуры эмбриона. Эта техника идеально подходит для продольной эксперименты требуют полного оптического доступа и / или стерильной транспортировки в птичьем эмбрионов.
Понимание связи между генетическими и микросреды факторы, влияющие на нормальное и неправильного эмбрионального развития имеет основополагающее значение для открытия новых терапевтических стратегий. Достижения в области технологий визуализации позволили количественного исследования организации и созревание тела план, но поздней стадии эмбрионального морфогенеза менее ясна. Куриные эмбрионы привлекательным позвоночных животных модельной системы для такого применения из-за своей простоты культуры и хирургических манипуляций. Ранние эмбрионы могут быть культивировали в течение короткого времени на фильтровальную бумагу кольца, которое позволяет полностью оптического доступа для структурирования клетки и 1,2 судьба исследований. Изучение передовых процессов развития, таких как сердечный морфогенез традиционно осуществляется через окно яичной скорлупы 3-5, но эта техника пределы оптического доступа за счет размера окна. Ранее мы разработали простой метод культуры целых зародышей экс-ово с шестиугольными вес лодки на срок до 10 дней, что позволило высоким разрешением с помощью УЗИ 6,7. Эти культуры были трудно транспортировать, ограничивающий типы изображений инструментов, доступных для живых экспериментов. Мы здесь присутствует улучшенный оболочки менее культуре системы с экономически эффективной, портативные экологической палаты. Яйца были трещины на гамак создан полиуретановой мембраны (цепляются обертка), наложенных на окружности пластиковый стаканчик, частично заполненной стерильной водой. Размеры окружности и глубину гамак оба были важны для поддержания поверхностного натяжения, в то время как механика гамак и воды под помогли ослабить колебания индуцированного транспорта. Небольшой размер оборотной водой ванне был также разработан, с тем постоянный контроль температуры во время экспериментов. Мы демонстрируем способность к культуре эмбрионов на этом пути, по крайней мере 14 дней без морфогенный дефект или отложить и использовать эту систему в нескольких микрохирургических и визуализации приложений.
Оптический доступ и экспериментов в птичьего эмбриона является сложной задачей из-за ограничений яичной скорлупы. Windowing существенно ограничивает число микрососудов доступным для инъекций и микрохирургические подходы 8. В результате только ранних эмбрионов можно манипулироват?…
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Fertile white Leghorn chicken eggs | ||||
Model GB1, Avery Incubators, Hugo CO | ||||
Saran Wrap | ||||
Kimwipes | Kimberly-Clark, Inc. | |||
Rubber bands | ||||
Warm sterile water | ||||
9 oz plastic cup | ||||
100 mm diameter Petri dish | ||||
1602N thermal air | GQF Manufacturing CO, Savannah GA | |||
Fluorescein-conjugated dextran (2 MDa, 1% w/v in phosphate buffered saline) | Sigma Aldrich Inc. | |||
Microforge | Glassworx, Inc, St Louis MO | |||
Glass capillary tubes (0.75 mm ID) | ||||
Micromanipulator | World Precision Instruments, Sarasota FL | Model M3301L | ||
Fluorescent microscopy | Zeiss | Z20 | ||
Fine 55-forceps | World Precision Instruments, Sarasota FL | |||
10-0 nylon surgical suture | Ethicon | |||
Tubing | VWR | 1mm OD | ||
3 mL syringe | BD | |||
200 μL pipetter and pipette tips | VWR |