전 비켜 치킨의 배아 문화 시스템
Summary
이 문서에서는, 우리는 장기 사용하는 간단한 방법을 제시<em> 전 비켜</em> 조류 배아의 문화. 이 기술은 전체 광 액세스 및 / 또는 조류 배아의 살균 운송을 필요로하는 길이 실험에 이상적입니다.
Abstract
정상 및 기형 배아 개발을 운전 유전과 microenvironmental 요인 사이의 관계를 이해하는 것은 새로운 치료 전략을 발견하기위한 필수적입니다. 이미징 기술의 발전은 조직과 신체 계획의 성숙의 양적 조사를 활성화하지만, 나중에 무대 배아 morphogenesis 덜 분명하다. 치킨 배아 때문에 문화와 수술 조작의 용이성이 응용 프로그램에 대한 매력적인 척추 동물 모델 시스템입니다. 초기 배아는 세포 patterning과 운명을 연구 1,2을위한 완벽한 광 액세스를 가능하게 필터 종이 링에 짧은 시간 동안 교양 수 있습니다. 같은 심장 morphogenesis로 유학 고급 개발 프로세스는 전통적으로 달걀 껍질 3-5의 창문을 통해 수행하지만,이 기술은 창 크기에 따라 광학 접근을 제한하고 있습니다. 최대 초음파 6,7 통해 고해상도 이미징을 활성화 10 일까지 우리는 이전에 육각 무게 보트에서 전 비켜 문화 전체 배아를 간단한 방법을 개발했습니다. 이러한 문화는 라이브 실험에 사용할 수 이미징 도구의 유형을 제한, 운송하기 어려웠다. 우리는 여기서 비용 효율적인 휴대용 환경 챔버와 개선된 쉘 적은 문화 시스템을 제시한다. 계란은 부분적으로 살균 물로 채워진 플라스틱 컵에 circumferentially 부착된 폴리 우레탄 막 (포장을 집착)에 의해 만들어진 그물에 금이 있었다. 아래 해먹와 물의 역학 교통으로 유도 진동을 저해할 도움 동안 해먹의 원주와 깊이의 크기는 두 표면 장력을 유지하기 위해 중요했다. 물 목욕을 순환 작은 풋프린트 또한 실험 기간 동안 지속적인 온도 제어를 사용하도록 개발되었습니다. 우리는 morphogenic 결함없이 적어도 14 일 동안 이런 방식으로 문화 배아 수있는 능력을 입증 또는 여러 microsurgical 및 이미징 응용 프로그램에서이 시스템을 지연하고 사용합니다.
Protocol
Discussion
광 접속 및 조류 배아의 실험은 알 껍질의 제약으로 인해 도전이다. 윈도우 크게 분사하고 microsurgical 접근 8 액세스할 수 microvessels의 수를 제한합니다. 결과적으로 초기 단 배아는 조작과 지속적인 관찰이 불가능하실 수 있습니다. 장기 문화 9 방해 배아에서 표면 장력의 불충 분한 제어하기 때문에 배양 접시를 사용하여 초기 전 비켜 문화는 제한된 사용했다. 우리는 최근?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fertile white Leghorn chicken eggs | ||||
| Model GB1, Avery Incubators, Hugo CO | ||||
| Saran Wrap | ||||
| Kimwipes | Kimberly-Clark, Inc. | |||
| Rubber bands | ||||
| Warm sterile water | ||||
| 9 oz plastic cup | ||||
| 100 mm diameter Petri dish | ||||
| 1602N thermal air | GQF Manufacturing CO, Savannah GA | |||
| Fluorescein-conjugated dextran (2 MDa, 1% w/v in phosphate buffered saline) | Sigma Aldrich Inc. | |||
| Microforge | Glassworx, Inc, St Louis MO | |||
| Glass capillary tubes (0.75 mm ID) | ||||
| Micromanipulator | World Precision Instruments, Sarasota FL | Model M3301L | ||
| Fluorescent microscopy | Zeiss | Z20 | ||
| Fine 55-forceps | World Precision Instruments, Sarasota FL | |||
| 10-0 nylon surgical suture | Ethicon | |||
| Tubing | VWR | 1mm OD | ||
| 3 mL syringe | BD | |||
| 200 μL pipetter and pipette tips | VWR |
References
- Zamir, E. A., Czirok, A., Cui, C., Little, C. D., Rongish, B. J. Mesodermal cell displacements during avian gastrulation are due to both individual cell-autonomous and convective tissue movements. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 19806-19811 (1980).
- Ehrman, L. A., Yutzey, K. E. Lack of regulation in the heart forming region of avian embryos. Dev Biol. 207, 163-175 (1999).
- Clark, E. B., Hu, N., Rosenquist, G. C. Effect of conotruncal constriction on aortic-mitral valve continuity in the stage 18, 21 and 24 chick embryo. Am J Cardiol. 53, 324-327 (1984).
- deAlmeida, A., McQuinn, T., Sedmera, D. Increased ventricular preload is compensated by myocyte proliferation in normal and hypoplastic fetal chick left ventricle. Circ Res. 100, 1363-1370 (2007).
- Nakamura, H., Funahashi, J. Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation. Methods. 24, 43-48 (2001).
- Butcher, J. T., McQuinn, T. C., Sedmera, D., Turner, D., Markwald, R. R. Transitions in early embryonic atrioventricular valvular function correspond with changes in cushion biomechanics that are predictable by tissue composition. Circ Res. 100, 1503-1511 (2007).
- McQuinn, T. C. High-frequency ultrasonographic imaging of avian cardiovascular development. Dev. Dyn. 236, 3503-3513 (2007).
- Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing chicken eggs for developmental studies. J Vis Exp. , (2007).
- Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos. Dev Biol. 41, 391-394 (1974).
