Bir Eski-ovo Tavuk Embriyo Kültürü Sistemi
Summary
Bu makalede, biz uzun vadeli sağlamak için basit bir yöntem mevcut<em> Eski-ovo</em> Kuş embriyo kültürü. Bu teknik, tam optik erişilebilirlik ve / veya kuş embriyolar steril taşıma gerektiren uzunlamasına deneyler için idealdir.
Abstract
Normal ve kusurlu embriyonik gelişim sürücü ve genetik microenvironmental faktörler arasındaki ilişkilerin anlaşılması ve yeni tedavi stratejileri keşfetmek için esastır. Görüntüleme teknolojisindeki gelişmeler, organizasyon ve vücut planı olgunlaşması kantitatif araştırma etkin, ancak daha sonraki bir aşamada embriyonik morfolojilerinden daha az açıktır. Tavuk embriyolar kültür ve cerrahi manipülasyon kolaylığı nedeniyle bu uygulama için cazip bir omurgalı hayvan model sistem. Erken embriyolar, hücre desenlendirme ve kader çalışmaları 1,2 tam optik erişim sağlayan filtre kağıdı yüzük, kısa bir süre için kültür olabilir . Kalp morfolojilerinden gibi incelenmesi ileri gelişim süreçleri, geleneksel yumurta kabuğu 3-5 bir pencere üzerinden, ama bu tekniği pencere boyutu nedeniyle optik erişimi sınırlar . Daha önce 10 gün, ultrasonografi 6,7 ile yüksek çözünürlüklü görüntüleme etkin altıgen tartmak teknelerde eski-ovo kültürünün bütün embriyolar için basit bir yöntem geliştirdi. Bu kültürler canlı deneyleri için mevcut görüntüleme araçları türleri sınırlayarak, ulaşım zor. Biz burada bir maliyet-etkili, taşınabilir çevre haznesi ile geliştirilmiş bir kabuk daha az kültür sistemi mevcut. Yumurta kısmen steril su ile dolu bir plastik bardak, dairesel yapıştırılmış bir poliüretan membran (wrap sarılmak) tarafından oluşturulan bir hamak üzerine kırık. Mekaniği altındaki hamak ve su taşıma araçları ile indüklenen titreşim yardımcı hamak çevresi ve derinlik boyutları, hem yüzey gerilimi korumak için kritik bir rol oynadı. Su banyosu dolaşan küçük bir ayak izi de deney sırasında sürekli sıcaklık kontrolü sağlamak için geliştirilmiştir. Biz morfojenik kusur olmadan en az 14 gün boyunca bu şekilde embriyoların kültürü için yeteneğini göstermek ya da bu sistemin birçok mikrocerrahi ve görüntüleme uygulamaları gecikme ve istihdam.
Protocol
Discussion
Optik erişim ve kuş embriyolarında deney yumurta kabuğu kısıtlamaları nedeniyle zordur. Pencereleme enjeksiyon ve mikrocerrahi yaklaşımları 8 için erişilebilir mikrodamarlar sayısı önemli ölçüde sınırlar . Sonuç olarak sadece erken embriyolar manipüle ve sürekli gözlem mümkün değildir. Embriyo üzerinde yüzey gerilimi yetersiz denetim nedeniyle uzun süreli kültür 9 engelledi Petri kutularına kullanarak Erken ex ovo kültürleri sınırlı kullanım. Yakın z…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fertile white Leghorn chicken eggs | ||||
| Model GB1, Avery Incubators, Hugo CO | ||||
| Saran Wrap | ||||
| Kimwipes | Kimberly-Clark, Inc. | |||
| Rubber bands | ||||
| Warm sterile water | ||||
| 9 oz plastic cup | ||||
| 100 mm diameter Petri dish | ||||
| 1602N thermal air | GQF Manufacturing CO, Savannah GA | |||
| Fluorescein-conjugated dextran (2 MDa, 1% w/v in phosphate buffered saline) | Sigma Aldrich Inc. | |||
| Microforge | Glassworx, Inc, St Louis MO | |||
| Glass capillary tubes (0.75 mm ID) | ||||
| Micromanipulator | World Precision Instruments, Sarasota FL | Model M3301L | ||
| Fluorescent microscopy | Zeiss | Z20 | ||
| Fine 55-forceps | World Precision Instruments, Sarasota FL | |||
| 10-0 nylon surgical suture | Ethicon | |||
| Tubing | VWR | 1mm OD | ||
| 3 mL syringe | BD | |||
| 200 μL pipetter and pipette tips | VWR |
References
- Zamir, E. A., Czirok, A., Cui, C., Little, C. D., Rongish, B. J. Mesodermal cell displacements during avian gastrulation are due to both individual cell-autonomous and convective tissue movements. Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 19806-19811 (1980).
- Ehrman, L. A., Yutzey, K. E. Lack of regulation in the heart forming region of avian embryos. Dev Biol. 207, 163-175 (1999).
- Clark, E. B., Hu, N., Rosenquist, G. C. Effect of conotruncal constriction on aortic-mitral valve continuity in the stage 18, 21 and 24 chick embryo. Am J Cardiol. 53, 324-327 (1984).
- deAlmeida, A., McQuinn, T., Sedmera, D. Increased ventricular preload is compensated by myocyte proliferation in normal and hypoplastic fetal chick left ventricle. Circ Res. 100, 1363-1370 (2007).
- Nakamura, H., Funahashi, J. Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation. Methods. 24, 43-48 (2001).
- Butcher, J. T., McQuinn, T. C., Sedmera, D., Turner, D., Markwald, R. R. Transitions in early embryonic atrioventricular valvular function correspond with changes in cushion biomechanics that are predictable by tissue composition. Circ Res. 100, 1503-1511 (2007).
- McQuinn, T. C. High-frequency ultrasonographic imaging of avian cardiovascular development. Dev. Dyn. 236, 3503-3513 (2007).
- Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing chicken eggs for developmental studies. J Vis Exp. , (2007).
- Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos. Dev Biol. 41, 391-394 (1974).
