Импринтинг это явление в растительном и млекопитающих воспроизводства. Метилирование ДНК играет важную роль в механизмах импринтинга. Изоляция эндосперма и определения статуса метилирования генов в запечатлены<em> Arabidopsis</em> Может быть затруднено. В этом протоколе, мы описываем, как изолировать эндосперма и определять метилирование по бисульфит секвенирования.
Arabidopsis thaliana является отличным организма модель для изучения эпигенетических механизмов. Одной из причин является потерей функции нулевой мутанта ДНК метилтрансферазы является жизнеспособным, обеспечивая тем самым система изучить, как потерю метилирования ДНК в геноме влияет на рост и развитие. Импринтинг означает дифференциальное выражение материнских и отцовских аллелей и играет важную роль в воспроизводстве развития как млекопитающих и растений. Метилирования ДНК имеет решающее значение для определения того, материнской или отцовской аллелей запечатлены ген экспрессируется или замолчать. В цветущих растений, есть двойное событие оплодотворение в воспроизводстве: один сперматозоид оплодотворяет яйцеклетку для формирования эмбриона и второго предохранители сперматозоидов с центральной ячейки вызвать эндосперма. Эндосперм ткани, где происходит печать в растениях. Медея, SET домена Polycomb группы генов, а FWA, транскрипционный фактор регулирующих цветение, это первые два гена, показано, что запечатлелось в эндосперма и их выражения контролируется метилирования ДНК и деметилирования растений. Для того чтобы определить статус импринтинга генов и метилирования в эндосперм, мы должны быть в состоянии изолировать эндосперма в первую очередь. Так как семена в крошечных Arabidopsis, она остается сложной, чтобы изолировать Arabidopsis эндосперма и изучить его метилирования. В этом видео-протокол, мы сообщаем о том, как проводить генетические крест, чтобы изолировать эндосперма ткани из семян, и для определения статуса метилирования путем секвенирования бисульфит.
Это сравнительно легко отделить зародыш от эндосперма и кожуры, но это утомительно отдельных эндоспермом от кожуры, особенно для семян в начале или в середине торпедо стадии эмбриогенеза. Так как семенная оболочка только способствует очень небольшое количество ткани, для некоторых ге…
The authors have nothing to disclose.
Авторы выражают благодарность г-жа Дженнифер М. Ломмеля и Тары Н. Rognan для поддержания Arabidopsis растений. Эта работа была поддержана запуска средства из Сент-Луиса университета и Национального института здоровья гранты 1R15GM086846-01 и 3R15GM086846-01S1 к В. Сяо.
Supplies
Reagents