Decellularisatie en Recellularization van Whole Levers
Summary
Perfusie decellularisatie is een nieuwe techniek om hele lever scaffolds dat het orgel van de extracellulaire matrix samenstelling en microarchitectuur behoudt produceren. Hierin wordt de werkwijze voor het bereiden gehele orgel steigers met behulp van perfusie decellularisatie en de daaropvolgende herstel van de populatie met hepatocyten beschreven. Functionele en transplanteerbare lever enten kan worden gegenereerd met behulp van deze techniek.
Abstract
De lever is een complex orgaan dat constant perfusie vereist voor de levering van voedingsstoffen en zuurstof en de verwijdering van afval om een overleven. Pogingen om opnieuw of de lever microstructuur na te bootsen met een terrein-up benadering met behulp van tissue engineering en microfabricage technieken zijn niet succesvol geweest tot nu toe als gevolg van dit ontwerp uitdaging. Daarnaast zijn synthetische biomaterialen gebruikt om de steigers voor de lever tissue engineering-applicaties te maken is beperkt in het induceren van weefselregeneratie en reparatie voor een groot deel te wijten aan het ontbreken van een specifieke cel binding motieven die zou leiden tot de juiste celfuncties 2. Gedecellulariseerde inheemse weefsels zoals bloedvaten en de huid 3 4 aan de andere kant hebben vele toepassingen gevonden in tissue engineering, en hebben een praktische oplossing voor enkele van de uitdagingen. Het voordeel van gedecellulariseerde inheemse matrix, is dat het behouden, tot op zekere hoogte, de originele samenstelling, en de microstructuur, dus versterking van celhechting en reorganisatie 5.
In dit werk beschrijven we de methoden om perfusie-decellularisatie van de lever, zodanig dat een intact lever bioscaffold dat de structuur van de grote bloedvaten behoudt wordt verkregen uit te voeren. Verder beschrijven we methoden om deze bioscaffolds recellularize met volwassen primaire hepatocyten, het creëren van een lever transplantatie die functioneel is in vitro, en heeft het schip toegang nodig is voor transplantatie in vivo.
Protocol
Discussion
De perfusie decellularisatie hier beschreven methode levert een hele lever steiger die dezelfde grove structuur en de vasculaire microarchitectuur van de inheemse lever heeft. De steiger heeft een extracellulaire matrix samenstelling vergelijkbaar is met de inheemse lever. De recellularization methode bereikt herbevolking van de steiger met cellen bij hoge rendement en de cellen blijven haalbare en functionele tijdens de in vitro geteste cultuur periode. Met de toevoeging van nonparenchymal cellen in de lever r…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De auteurs willen graag Jack Milwid bedanken voor het ontwerp van de in vitro perfusie kamer. Dit werk werd ondersteund door subsidies van de Amerikaanse NIH, R01DK59766 en R01DK084053 om MIJN, R00DK080942 aan KU, de Amerikaanse NSF cbet-0853569 aan KU en de Shriners Hospitals for Children te BEU (subsidie niet. 8.503). Erkennen wij ook ondersteuning en de Shriners Hospitals for Children.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium dodecyl sulfate | Sigma-Aldrich | L4390 | ||
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | ||
| Masterflex L/S Digital Drive | Cole-Parmer | EW-07523-80 | ||
| Masterflex L/S Standard pump head | Cole-Parmer | EW- 07013-81 | ||
| Bubble trap | Radnoti | 130149 |
References
- Kulig, K. M., Vacanti, J. P. Hepatic tissue engineering. Transpl Immunol. 12, 303-310 (2004).
- Lutolf, M. P., Hubbell, J. A. Synthetic biomaterials as instructive extracellular microenvironments for morphogenesis in tissue engineering. Nature biotechnology. 23, 47-55 (2005).
- Dahl, S. L., Koh, J., Prabhakar, V., Niklason, L. E. Decellularized native and engineered arterial scaffolds for transplantation. Cell Transplant. 12, 659-666 (2003).
- Schechner, J. S. Engraftment of a vascularized human skin equivalent. FASEB J. 17, 2250-2256 (2003).
- Gilbert, T. W., Sellaro, T. L., Badylak, S. F., F, S. Decellularization of tissues and organs. Biomaterials. 27, 3675-3683 (2006).
- Uygun, B. E. Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix. Nat Med. , (2010).
