Dezellularisierung und Recellularization von Whole Livers
Summary
Perfusion Dezellularisierung ist eine neuartige Technik, um ganze Leber Gerüste, dass die Orgel extrazellulären Matrix Zusammensetzung und Mikroarchitektur behält produzieren. Hierbei wird das Verfahren zur Herstellung von ganzen Organs Gerüste mit Perfusion Dezellularisierung und anschließende Wiederaufforstung mit Hepatozyten beschrieben. Funktionelle und transplantierbaren Leber Transplantate kann mit Hilfe dieser Technik werden.
Abstract
Die Leber ist ein komplexes Organ, das konstante Perfusion erfordert für die Lieferung von Sauerstoff und Nährstoffen und Beseitigung von Abfällen, um 1 überleben. Die Bemühungen zu erstellen oder zu imitieren die Leber Mikrostruktur mit Gründen up-Ansatz mit Tissue Engineering und Mikrofabrikationstechniken sind nicht erfolgreich gewesen, so weit durch, um diesen Entwurf Herausforderung. Darüber hinaus haben synthetische Biomaterialien verwendet werden, um Gerüste für Leber Tissue Engineering-Anwendungen zu erstellen bei der Induktion der Geweberegeneration und Reparatur zu einem großen Teil durch das Fehlen von spezifischen Zell-Bindung Motive, die die richtige Zelle Funktionen 2 induzieren wäre begrenzt. Dezellularisierte nativen Gewebe wie Blutgefäße 3 und Haut 4 auf der anderen Seite haben viele Anwendungen im Tissue Engineering gefunden, und sofern eine praktische Lösung für einige der Herausforderungen. Der Vorteil der dezellularisierte nativen Matrix ist, dass es, bewahrt in einem Umfang, der ursprünglichen Zusammensetzung und die Mikrostruktur, also die Verbesserung Zelladhäsion und Reorganisation 5.
In dieser Arbeit beschreiben wir die Methoden zur Perfusion-Dezellularisierung der Leber, so dass eine intakte Leber biologisches Gerüst, dass die Struktur der großen Blutgefäße behält erhalten ist durchzuführen. Des Weiteren beschreiben wir Methoden, um diese bioscaffolds mit adulten primären Hepatozyten recellularize, die Schaffung eines Lebertransplantation, die funktionelle in vitro ist, und hat das Schiff den Zugang erforderlich für die Transplantation in vivo.
Protocol
Discussion
Die Perfusion Dezellularisierung hier beschriebene Methode produziert eine ganze Leber Gerüst, das die gleiche grobe Struktur und die vaskuläre Mikroarchitektur des nativen Leber hat. Das Gerüst hat eine extrazelluläre Matrix Zusammensetzung ähnlich der nativen Leber. Die recellularization Methode erreicht Wiederbesiedlung des Gerüsts mit Zellen mit hohem Wirkungsgrad und die Zellen lebensfähig bleiben und funktionelle während der in vitro-Kultur Zeitraum getestet. Mit dem Zusatz von nonparenchymal Zell…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren bedanken sich bei Jack Milwid für die Gestaltung der in vitro Perfusionskammer danken. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse der US NIH, R01DK59766 und R01DK084053 zu MY, R00DK080942 zu KU, US NSF CBET-0853569 zu KU und die Shriners Hospitals for Children zu BEU (Grant No. 8503) unterstützt. Wir danken für die Unterstützung und die Shriners Hospitals for Children.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium dodecyl sulfate | Sigma-Aldrich | L4390 | ||
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | ||
| Masterflex L/S Digital Drive | Cole-Parmer | EW-07523-80 | ||
| Masterflex L/S Standard pump head | Cole-Parmer | EW- 07013-81 | ||
| Bubble trap | Radnoti | 130149 |
References
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- Lutolf, M. P., Hubbell, J. A. Synthetic biomaterials as instructive extracellular microenvironments for morphogenesis in tissue engineering. Nature biotechnology. 23, 47-55 (2005).
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